医学形态学实验

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1、医学形态学实验山东大学医学院医学形态学实验课程教学大纲课 程 名 称: 医学形态学实验 英 文 名 称: Medical morphologicalExperiment 课 程 编 号:实 验 课 性 质:融合创新性实验课 程 负 责 人:开放实验项目数:8大 纲 主 撰 人: 武玉玲、张庆慧、郝晶等人大 纲 审 核 人:一、学时、学分课程总学时: 32 实验学时: 32课程总学分: 实验学分:二、适用专业及年级 供基础、临床医学、预防、口腔医学、护理学5、6、7年制专业用 三、实验 教学目的与基本要求通过医学形态学融合性实验教学，将人体解剖学、组织胚胎学和病理解剖学三 个相关学科的交叉内容进

2、行有机整合，形成系统化的知识。通过创新实验的学习， 使学生学会使用医学形态学实验常用的仪器，熟悉科研常用的技术方法，培养学生 动手能力、提高学生利用所学知识解决实际问题的能力，启迪学生的科研思维和创 新精神，以适应研究型大学培养人才的要求。四、主要仪器设备1（动物：Wistar大鼠，昆明小鼠2（仪器设备:显微图像观察系统、恒温培养箱，手术器械、微量注射器、常用 染料。五、实验课程内容和学时分配指 已学实导 开序 实验项目 时验实 验 内 容 教 /号 名 称 分要师 未 配 求开1（第1、2趾蹼间隙皮下注射0.2ml 丁未Pa tent blue, 10分钟后在腘窝及兆 开 腹股沟处切开皮肤，

3、寻找蓝染的淋习 巴管及淋巴结（可追踪至腹膜后隙）。观察淋巴管及淋巴结的形态和分布。2（将一段小肠系膜平铺于透明的载物台上，用显微图像观察系统观 察小肠系膜内淋巴管的运动。注意分寻找淋巴管的瓣膜。 小淋巴系统1 3（小 肠浆膜下注射适量Pat ent 4组的组成blue。观察淋巴管的吸收功能及引进流。 行 4（追踪腹膜后隙染色的淋巴结。5（在腹股沟处结扎、切断腹股沟淋巴结和淋巴管，造成淋巴引流障碍，观察淋巴淤滞和淋巴水肿的形成。6（观察淋巴引流注射标本，淋巴结和淋巴管组织切片。总结淋巴系统的组成和功能。邢未1、将Wista大鼠麻醉固定于手术台。 子开 分英 2、 切开背部皮肤，暴露脊柱，脊髓半切

4、小打开椎管，剪断 一半脊髓。 损伤的手组4 2 术试验观3、 缝合背部肌及皮肤。 进察 4、 待大鼠 清醒后，观察大鼠行 损伤后的临床表现。5、 讨论并写出试验报告1. 肥大细胞的制作与观察: 张未取健康大鼠一只，脱臼处死。艳开 随后剪取皮下组织，平铺置于载玻敏 片 上。用95,乙醇溶液固定、甲苯胺蓝染色，最后树胶封片。镜下观分察肥大细胞形态、颗粒染色特点及肥大细胞肥大细胞走形分布特点。 小的制作与2. 大鼠?型超敏反应动物模型组3 4观察 的建立 进取马血清用生理盐水按一定的比行 例稀释，然后给大鼠腹腔 注射进行被动致敏。致敏后14 日再用马血清进行腹腔注射进行大鼠致敏实验。随后剪取皮下组织

5、，观察肥大细胞脱颗粒情况。未武1（活精子标本的制备与观察取育龄期雄鼠附睾，将其剪成开 玉 小块，制作小鼠活精子悬液。将悬 玲 液滴于载玻片上，低倍镜观察精子的活动情况。另取精子悬液涂片，用0.3,甲 苯胺蓝液染色，光镜观察精子的形态结构。2（体外抑精子实验实验分组：（1）实验组:在37?恒温条件下取50ul精子悬液与等量一定浓度的 抑精子药液充分混合分别于混合后30 sec、5 min、10 min和30 min时取一 滴混合液滴于载玻片上显微镜下计数10个视野记录活动精子百分率,或用伊红 染料染色计算精子存活率,。（2） 对照组:分取50 口 l精子悬液与等量生理小鼠活精小盐水混合其余操作方

6、法同上。子标本的 组比较在处理后不同时间内两组制作与精4 4 进子低渗肿活动精子的百分率。行同时分别取处理10 min分钟胀试验后的实验组及对照组的精子悬液以1000, 1500r/min离心5min弃上清液 取沉淀于管底的精子涂片用0.3,甲苯胺蓝液染色光镜观察两组精子形态结 构的不同。3（精子低渗肿胀试验将735 mg柠檬酸钠 2HO 2和1351 mg果糖溶于100 ml蒸馏水中配 制成150 mol的低渗溶液,可考虑用蒸馏水代替低渗液，。（2）取0.1ml处理后的精 子混悬液与1ml低渗液混合于37?下培养30 min然后在显微镜下观察100 个精子计算精子尾肿胀百分率以确定其低渗肿胀

7、能力。然后比较两组精子的 膜功能。郝未 ,（精子获能实验晶开 取12-16周龄ICR雄鼠的附睾尾放在石蜡油中，用眼科剪在其顶端剪一 小口，然后用眼科镊子挤压附睾尾部精子，将其挑到200ul平衡过夜的HTF受精获 能液滴中，置于37?、5,CO2饱和湿度条件下培养1h使精子获能，显微镜下观察精 子的形态和运动。,超排卵及收集卵细胞:取6-8周龄ICR雌鼠，腹腔注射7.5IU,只PMSG,间 隔48h后再注射7.5IU,只HCG，进行超排处理（实验老师课前准备）。注射HCG14h 后，颈椎脱臼处死雌鼠，取出输卵分管在滤纸上除去血迹，放入培养皿小中，用解剖针刺破输卵管的膨大小鼠体外部，将流出的卵子团

8、引入到HTF培 组5 4 受精实验 养液滴中，显微镜下观察卵丘复合进体的形态。 行3（观察受精过程：在卵子HTF培养液滴中，加入5,1Oul获能精子（200个精子,ul），显微镜下观察精子向卵细胞周围集聚。放入CO2培养箱培养。4（观察精、卵原核：精卵共同孵育12-16h后,将受精卵移至玻片上（多聚赖氨 酸预处理），空气干燥5min,向玻片上滴加数滴甲醇-冰醋酸溶液（3:1）室温（25?） 下固定5min，滴加1%美蓝染色液室温5min，水洗，90%、95%和纯酒精脱水各2 分钟，二甲苯透明，树胶封片，高倍显微镜下观察受精卵的卵原核和精原核。1. 肉眼及镜下观察正常肝脏的大张未体形态特点及正常

9、组织结构。 庆开2. 镜下观察固有结缔组织的形态慧，特点。 甄3. 肉眼及镜下观察肝硬化的标本军分晖 及病理切片，对照肝脏正常结构找结 缔组织小出肝硬化的病理组织学特点。 增生与肝组6 4 4. 互动式讨论:肝脏结构与功能的硬化 进关系，固有结缔组织的功能以及行 在创伤愈合中的作用，结缔组 织增生与肝硬化的关系，肝硬化时肝脏多种功能降低的结构基础以及如何防止肝硬 化的发生。甄未1. 肉眼观察矽肺、尘肺的病理军开 标本;晖 2. 显微镜观察活体染色的疏松结缔组织铺片，重点观察吞噬了染料颗粒的 巨噬细胞，成纤维细胞和胶原纤维; 3（显微镜观察正常肺切片，熟悉肺组织的正常 结构，观察肺间质中的尘细胞

10、;4（显微镜观察矽肺、尘肺的病理切片，与正常肺切片对照比较，以理解巨噬细 胞与矽肺、尘肺发病的关系;分5（学生自己动手，给小鼠腹腔巨噬细胞小注射或皮下注射台盼蓝，2小与矽 肺、组时后取腹腔液制作涂片，或取7 4 尘肺的发进皮下组织制作铺片，伊红染 色，生 行 显微镜观察吞噬了染料颗粒的巨噬细胞;6（教师和学生互动式讨论巨噬细胞的形态结构和生理功能，矽肺、尘肺的病理 过程，巨噬细胞与矽肺、尘肺病理过程的相关关系，吸烟的危害; 7（教师和学生互 动式讨论巨噬细胞在特异性免疫和非特异性免疫中的作用，讨论巨噬细胞在矽肺、 尘肺、结核病、动脉粥样硬化等疾病发生、发展和归宿中的意义;李未1. 取大鼠称重。

11、一组腹劲开 腔注射肾上腺素松22.5mg/kg体重，另一组腹腔注射相同量的生理盐水做对照，注射后观察记录两只大鼠的一般情况和呼吸等临床表现。15min20min 后处死动物（注意结扎气管以免液体外溢），取出肺和心脏。2. 用滤纸吸去肺表面的 液体，用天平称两肺 的重量，计算肺重系 数（肺重量g/体重 分kg*100%），若肺重系肺组织结 小数1%，比较两组大鼠构特点与 组的肺重系数。若肺重急性肺淤8 4 进血、肺水系数1%，表明肺水肿 行肿的观察 已形成。3. 对比观察2组大鼠肺 的外观，记录包括大 小、颜色、质地、及 切面外观，将2组大 鼠的肺脏用10%的甲 醛固定。4. 镜下观察对比和记录 2组大鼠肺组织切片 （实验前准备好）。 5. 互动讨论肺淤血、肺 水肿形成的机理及实 验肺水肿标本的病理 特点，用所见病变解 释实验中所观察到的临床现象。六、考核方式结合实验操作和实验报告确定成绩。七、实验教科书、参考书（一）教科书高英茂（医学形态学实验（北京:科学出版社, 2007（二）参考书