实验三 琼脂免疫电泳实验

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1、实验三实验三 琼脂免疫电泳实验琼脂免疫电泳实验实验目的实验目的 了解免疫电泳的原理和用途。掌握免疫电泳的操作过程和方法。掌握免疫电泳实验结果的分析方法，并对粗提的蛋白进行检测。免疫电泳为区带电泳与双向免疫扩散的结合。先利用区带电泳技术将不同电荷和分子量的蛋白抗原在琼脂内分离，然后在与电泳方向平行的方向上开槽，加入抗血清。37下使两者扩散，各区带蛋白在相应的位置与抗体反应形成弧形沉淀线。免疫电泳原理图解见图。实验原理实验原理免疫电泳原理图解实验材料：牛血清 粗提蛋白 琼脂糖 巴比妥缓冲液（PH8.6，离子强度0.05）兔抗牛血清（1）配制）配制1.2的琼脂，加热使之融化。的琼脂，加热使之融化。（

2、巴比妥缓冲液配制）（巴比妥缓冲液配制）（2）吸取吸取34 mL琼脂琼脂溶液，溶液，均匀涂布到载玻片上，均匀涂布到载玻片上，注意注意要要马上用马上用吸管尖把吸管尖把琼脂琼脂表面整平，若有表面整平，若有气气泡立刻除去泡立刻除去，并立，并立即于中间横放一根毛细管，待凝，制成即于中间横放一根毛细管，待凝，制成2mm的琼脂板。的琼脂板。（3）取打孔器在图示的位置打孔（图）取打孔器在图示的位置打孔（图），此二，此二孔孔位置要位置要对称。对称。于酒精灯上小心烘烤，使琼脂与玻璃板贴紧。于酒精灯上小心烘烤，使琼脂与玻璃板贴紧。操作步骤操作步骤2mm2mm图2 胶板打孔及挖槽示意图（4）用微量加样器加入）用微量加

3、样器加入1020uL的粗提蛋白的粗提蛋白和牛血清和牛血清，不要溢出（可加入，不要溢出（可加入指示剂指示剂）。（5）把把载载玻片放到玻片放到电泳电泳槽中，倒入槽中，倒入巴比妥缓冲液巴比妥缓冲液，琼脂板两端用琼脂板两端用滤纸滤纸与缓冲液搭桥，接通电源，电压与缓冲液搭桥，接通电源，电压10-12v/cm电泳电泳1-2h。（6）样品）样品中有中有蓝色蓝色染料，染料，当蓝色当蓝色接近另一端接近另一端时时，终终止电泳，止电泳，小心取出小心取出载载玻片。玻片。（7）用）用刀片在刀片在胶体胶体的中央，的中央，划两道平行线划两道平行线。刀刻要刀刻要深及底部，深及底部，两道平行线间隔两道平行线间隔不可大于不可大于

4、3 mm。用大用大头针挑去琼脂。头针挑去琼脂。（8）加入人全血清，放入湿盒中，）加入人全血清，放入湿盒中，37 下扩散下扩散24h。注意事项注意事项（1）浇载玻片时，玻片应保持水平，琼脂 面要尽量铺平。（2）加样应一次加满，并防止样品溢出孔 外。（3）电泳过程中注意防止发热，以免影响 电泳结果。（4）电泳时要使滤纸与凝胶密切接触，不可有缝隙。思考题思考题（1）画出沉淀线的形态、数量和位置，并予以简要说明。（2）与相关的免疫学试验进行比较，探讨免疫电泳的主要优点。PH8.6巴比妥缓冲液配制：巴比妥缓冲液配制：巴比妥酸巴比妥酸 0.92g-100ml，加热熔解加热熔解 巴比妥钠巴比妥钠 5.15g-350ml，摇动熔解摇动熔解 混合，补足至混合，补足至500ml