沙苑子调节小鼠免疫功能作用的实验研究

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1、沙苑子调节小鼠免疫功能作用的实验研究关键词：沙沙苑 【摘摘要】 目的的 探讨讨沙苑子子及其复复方制剂剂对小鼠鼠免疫功功能的调调节作用用。方法法 二级级昆明小小鼠1774只，雌雌雄各半半，体重重1822gg，随机机分3组。用用沙苑子子及其复复方制剂剂给小鼠鼠灌胃115d后后活杀，用用称重法法测量脏脏器系数数；用足足跖厚度度增加法法评价细细胞免疫疫功能；用溶血血空斑法法评价体体液免疫疫功能；用腹腔腔巨噬细细胞吞噬噬鸡红细细胞的方方法评价价巨噬细细胞吞噬噬功能。结结果 沙苑子子能明显显提高小小鼠DTTH反应应程度；巨噬细细胞吞噬噬功能明明显增强强；溶血血空斑数数明显增增多；白白细胞介介素-11、6、

2、8(IIL-11、6、8)水平平增高，与与对照组组比较具具有显著著的统计计学意义义(P0.005)。结结论 沙苑子子具有调调节小鼠鼠免疫功功能的作作用。 【关关键词】 沙苑子；免疫功能；小鼠 TThe efffectt off fllatsstemm miilkvvetcch sseedd annd iits commpouund preeparratiion on rreguulattionn off immmunnoloogiccal funnctiion of micce 【AAbsttracct】 Obbjecctivve To invvesttigaate thee efffecct

3、 oof fflattsteem mmilkkvettch seeed aand itss coompooundd prrepaarattionn onn thhe rreguulattionn off immmunnoloogiccal funnctiion of micce.MMethhodss OOne hunndreed sseveentyy foour of seccondd orrderr Kuunmiing micce(wweigght 1822gg)，mmalee annd ffemaale eacch ooccuupyiing onee haalf，wweree raando

4、omlyy diividded intto tthreee ggrouups.Alll thhe mmicee weere saccrifficeed aafteer ttheyy haad bbeenn giivenn fllatsstemm miilkvvetcch sseedd annd iits commpouund preeparratiion in inttraggasttricc addminnisttrattionn foor ffiftteenn daays.Thee orrganns iindeex oof mmicee waas ccalcculaatedd byy de

5、eterrminningg thhe oorgaans wweigght andd thhe ccelll immmunnityy weere evaaluaatedd byy deeterrminningg thhe tthicckenningg off peediss.Heemollytiic pplaqque tesst wwas useed tto aapprraisse hhumoorall immmunnityy，annd pperiitonneall maacroophaage swaalloowinng cchicckenn reed bbloood ccelll teest

6、wass ussed to apppraiise thee phhagoocyttes funnctiion.Ressultts Commparred witth tthe conntrool ggrouup，tthe DTHH reeacttionn annd pphaggocyytess fuuncttionn weere impprovved obvviouuslyy(P0.005)，aand thee quuanttityy off heemollytiic pplaqque andd thhe cconccenttrattionn off ILL-1，IIL-66，ILL-8 wer

7、re iincrreassed siggnifficaantlly(PP0.05) inn fllatsstemm miilkvvetcch sseedd annd iits commpouund preeparratiion grooup.Thee sppleeen aand thyymuss inndexx haad nno sstattisttic diffferrencce aamonng aall thee grroupps.CConcclussionn FFlattsteem mmilkkvettch seeed ccan reggulaate thee immmunnoloogi

8、ccal funnctiion of micce. 【KKey worrds】 fllatsstemm miilkvvetcch sseedd；immmunnoloogiccal funnctiion；micce 沙沙苑子(Semmen asttraggalii coompllanaati)为豆科科植物扁扁茎黄芪芪(Asstraagullus commplaanattus R.BBr)的的干燥成成熟种子子。现代代医学研研究发现现，沙苑苑子含有有丰富的的硒、铜铜、铁、锌锌、锰及及脂肪油油、鞣质质、维生生素A等成分分，具有有养肝明明目、强强腰健骨骨、滋润润肌肤等等功效1。笔笔者通过过对实验验动物I

9、IL-11、6、8，胸腺腺及脾脏脏重量指指数等免免疫指标标测定，探探讨沙苑苑子对小小鼠调节节免疫功功能的生生物作用用。 11 材材料与方方法 11.1 实验验动物 二级级昆明小小鼠1774只，雌雌雄各半半，体重重1822gg，购自自军事医医学科学学院实验验动物中中心(动物合合格证号号：BDDW9550077)。 11.2 受试试药物 沙苑苑子水煎煎剂，含含生药量量2000mg/ml；复方沙沙苑子由由沙苑子子、玄驹驹、红景景天、北北五味子子、枸杞杞子、麦麦冬、川川芎等水水煮提取取组成，含含生药量量4000mg/ml。均均由本所所制剂室室配制。沙沙苑子产产于陕西西，蚂蚁蚁为广西西产双齿齿多刺蚁蚁(

10、Poolyrrhacchiss diivess smmithh)，其其他中药药材均购购自北京京康玉药药店。 11.3 试剂剂 绵羊羊红细胞胞由采自自健康成成年绵羊羊血制备备，豚鼠鼠血清由由卫生部部环境卫卫生监测测所毒理理室提供供，鸡红红细胞采采自健康康成年来来杭雄鸡鸡血制备备，其余余为国产产分析或或优级纯纯试剂。 11.4 仪器器 放免免计数仪仪为上海海产SNN-6882型。 11.5 实验验方法 将1744只小鼠鼠按体重重编号后后，用随随机表分分成4大组，分分别进行行巨噬细细胞吞噬噬功能实实验、溶溶血空斑斑实验、迟迟发型变变态反应应、测定定胸腺、脾脾脏指数数实验。每每项实验验的动物物又分为为

11、沙苑子子组、复复方沙苑苑子组和和生理盐盐水对照照组，各各组均为为12只小小鼠。沙沙苑子组组、复方方沙苑子子组分别别用沙苑苑子、复复方沙苑苑子水煎煎剂0.5mll灌胃，每每日1次；生生理盐水水对照组组同时用用等量的的生理盐盐水灌胃胃，连续续15天。 11.5.1 巨噬细细胞吞噬噬功能的的实验 按照照文献2方法法，末次次给药后后，给每每只小鼠鼠腹腔注注射2%鸡红细细胞悬液液1mll。间隔隔30mmin，颈颈椎脱臼臼处死，仰仰位固定定于鼠板板上。正正中剪开开腹壁皮皮肤，经经腹膜注注入生理理盐水22ml，转转动鼠板板1miin。然然后吸出出腹腔洗洗液1mml，平平均分滴滴于两片片载玻片片上，放放入垫有

12、有湿纱布布的搪瓷瓷盒内，移移置377孵箱温温育300minn。孵毕毕，于生生理盐水水中漂洗洗，以除除去未贴贴片细胞胞。晾干干，以11：1丙酮-甲醇溶溶液固定定。4%(VV/V)Gieemsaa-磷酸酸缓冲液液染色33minn，用蒸蒸馏水漂漂洁，晾晾干，在在油镜下下计数巨巨噬细胞胞，每片片2000个，按按下式计计算吞噬噬百分率率和吞噬噬指数： 吞吞噬百分分率=吞噬鸡鸡红细胞胞的巨噬噬细胞数数2200个个巨噬细细胞1000% 11.5.2 溶血空空斑实验验 应用用溶血空空斑实验验进行抗抗体生成成细胞检检测22。取取羊血，用用生理盐盐水洗涤涤3次，每每只鼠经经腹腔注注射SRRBC 11108个个。将

13、用用SRBBC免疫疫5天后的的小鼠处处死，取取脾，制制成细胞胞悬液。将将表层培培养基加加热溶解解后与等等量双倍倍的Haankss液混合合，分装装小试管管，每管管0.5mml，再再向管内内加0.5ll体积分分数为110%的的SRBBC(用用SA液配配制)、10l脾悬悬液，迅迅速混合合后倾倒倒于已刷刷琼脂糖糖薄层的的玻片上上，待琼琼脂凝固固后，将将玻片水水平扣放放在片架架上，放放入二氧氧化碳培培养箱中中温育11.5hh，然后后将用SSA缓冲冲液稀释释的补体体(1：5)加入入到玻片片架凹槽槽内，继继续培养养1.55h后计计数溶血血空斑数数，以空空斑数代代表分泌泌抗体的的细胞数数。 11.5.3 迟发

14、型型变态反反应 采用足足底增厚厚法进行行DTHH检测3。给给小鼠腹腹腔注射射1%SSRBCC 0.1mll/每鼠鼠，将其其致敏，4天后测量左后足跖部厚度，然后在测量部位皮下注射体积分数为20%的SRBC(20l/每鼠)，注射后24h测量左后足跖部厚度，同一部位测量3次，取平均值。以注射前后足跖厚度的差值，表示DTH的程度。 11.5.4 对小鼠鼠胸腺、脾脾脏指数数的影响响 末次次前称其其体重，给给药300minn断头处处死，立立即取出出，称量量脾脏、胸胸腺湿重重，计算算其指数数。计算算公式如如下： 脾(胸腺)指数=脾(胸胸腺)重重量(gg)体重重(g) 1.55.5 沙苑苑子对小小鼠血清清IL

15、-1、66、8水水平的影影响 将上述述30只只小鼠按按上述方方法分组组给药，按按文献44的方方法，末末次给药药后，330miin断头头取血，330000r/mmin离离心100minn分离血血清，取取足量血血清待测测。 1.66 统统计学分分析 计量数数据均用用SASS软件进进行方差差分析。 2 结果 2.1 沙苑子对小鼠3项免疫功能的影响 结果见表1。表1 沙沙苑子对对小鼠33项免疫疫功能的的影响 (xxs)注：与生理理盐水对对照组比比较*PP0.05，*P0.01；用药组组比较#P0.05 表表1数据据表明，小小鼠服用用沙苑子子及其复复方制剂剂，能明明显增强强小鼠吞吞噬鸡红红细胞的的能力；

16、增加小小鼠抗体体生成细细胞数。尤尤其是复复方沙苑苑子组与与对照组组比较，具具有显著著的统计计学意义义。同时时沙苑子子与复方方沙苑子子比较，前前者更能能增加抗抗体生成成细胞数数。用药药组与对对照组比比较DTTH明显显增强，具具有明显显提高小小鼠细胞胞免疫功功能的作作用，具具有显著著的统计计学意义义(P0.01)。 2.22 对对小鼠胸胸腺、脾脾脏指数数的变化化 结结果见表表2。 2.3 沙苑子子对小鼠鼠血清IIL-11、6、88水平的的影响 结果果见表33。表2 沙沙苑子对对小鼠胸胸腺、脾脾脏重量量与指数数的影响响 (xss)注：结果显显示各用用药组小小鼠与对对照组小小鼠比较较胸腺与与脾脏以以及

17、其指指数差异异无显著著性(PP0.05)。表3 沙沙苑子对对免疫实实验小鼠鼠血清IIL-11、6、88的影响响 (xss)注：与对照照组比较较*P0.05，*P0.01 从从表3可可以看出出，用药药组血清清IL-1、66、8水水平明显显高于对对照组(P0.05)，特别别是沙苑苑子对IIL-11、复方方制剂对对IL-1、88水平的的影响较较对照组组尤为显显著(PP0.01)，差异异具有显显著性。 3 讨论 从20世纪80年代起，不少学者对沙苑子进行了较为集中的研究，现代药理研究证实，沙苑子可以调节血液流变学、血压和脑血流量，具有明显的保肝、降脂、抗疲劳等作用，并能提高免疫功能4。机体对抗原物质的

18、免疫应答，是由免疫系统中各免疫细胞(包括巨噬细胞、T细胞、B细胞等)相互协调、共同完成的5。PFC是反映抗体生成细胞水平的指标之一，它的完成需上述各项免疫细胞的协调作用，本文中经沙苑子作用后，小鼠对SRBC的免疫应答能力明显提高，从表1结果可以看出，用药组小鼠形成的溶血空斑数明显高于对照组，即产生特异性抗体的B淋巴细胞数明显增多。DTH是反应T细胞功能的指标之一，实验中用药组小鼠的足跖肿胀度明显高于对照组，说明沙苑子具有增强机体的特异性细胞免疫功能的作用。巨噬细胞是一具有多种功能的免疫细胞，在机体非特异性免疫、体液免疫以及肿瘤免疫方面起着重要的作用6，7。沙苑子及其复方制剂，能使小鼠的巨噬细胞吞噬功能明显增强，与对照组小鼠比较差异显著。 白细胞介素是一类具有重要生物活性的免疫细胞因子，IL-1主要由单核巨噬细胞产生，在细胞免疫激活中发挥调节作用。IL-6是一种来源于单核巨噬淋巴细胞以及非淋巴细胞类产生的多功能细胞因子。除参与机体的抗感染防御机制外，还与某些肿瘤和自身免疫病的发生和转归密切相关。IL-8对特异和非特异性的免疫反应细胞具有强烈的趋化作用。因此，机体IL-1、6、8含量下降，必然造成机体免疫功能低下8。本文研究表明，服用沙苑子及其复方制剂的小鼠，其IL-1、6、8水平与对照组比较明显升高。因此，通过本文各项指标实验分析表明，沙苑子及其复方制剂有增强小鼠免疫功能的作用。