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1、 吸光光度法第一节 吸光光度分析的根本原理 第二节 吸光光度分析的根本定律 第三节 吸光光度分析方法及仪器 第四节 显色反响及其条件的选择 第五节 光度丈量误差及丈量条件的选择 第六节 吸光光度分析的运用 第一节 吸光光度法根本原理吸光光度法简介概念：单色光、复合光 、互补色光物质颜色的构成 物质的颜色是由其主要吸收色光的互补色光决议的。物质对光的选择性吸收。光吸收曲线光吸收定律朗伯比耳定律吸光光度法简介:许多物质的溶液呈现出各种不同的颜色，普通来说，有色物质含量越高，其溶液的颜色就越深。因此，经过比较有色溶液颜色的深浅，即可测定有色物质的含量。有色物质溶液之所以呈现出各种不同的颜色，是由于有
2、色物质选择性地吸收了不同波长的光。吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法。概念：光是一种电磁波，根据波长或频率陈列。波长范围 10-1nm 10-1 10nm 10400nm 400750nm 0.751000m 0.1100cm 11000cm光谱区域 射线 X射线 紫外光 可见光 红外光 微波 无线电 单色光：复合光：互补色光：具有同一波长的光称为单色光。由不同波长组成的光称为复合光。按一定比例混合可得到白光的两种单色光互称为互补色光。光的互补表示图：物质颜色的构成:物质的颜色是由其KMnO4主要吸收色光的互补色光决议的。E=Ej-Ei E=hc/光吸收曲线:确定最大
3、吸收波长max。吸光光度法定性分析 的根据。吸光光度法定量分析 的根据A不同浓度KMnO4溶液的光吸收曲线朗伯比耳定律：式中：I0是入射光强度，It是透入射光强度。b是液层厚度，c是溶质物质的量浓度。a是与物质本性及入射光波长有关的常数。(透光率)T=It /I0 100%那么 lg 1/T=abc (吸光度)A=lg I0/It 那么 A=abclg I0/It=abc第二节 吸光光度分析的根本定律光吸收定律朗伯-比耳定律 (The Lambert-Beers Law)当一束平行的、强度为I0的单色光垂直照射于厚度为b、浓度为c的单位截面积的均匀液层时，由于溶液中吸光质点对入射光部分吸收，使
4、透过光强度降至It。假设将液层分成厚度为无限小的相等薄层，每一薄层厚度为db，又设薄层内含有dn个吸光质点，照射到薄层上的光强度为I，光经过薄层后，强度变化量为dI，那么dI与I成正比，也与dn成正比，即：nIdId1bcndd2bIIbcII0ddt0cbIIt0lncbIIAklgt0cbaA cbATTIIAlg1lglgt0第三节第三节 吸光光度分析方法及仪器吸光光度分析方法及仪器 一、目视比色法 二、光电比色法 三、分光光度法 运用分光光度计丈量溶液的吸光度，以确定物质含量的分析方法称为分光光度法。1规范曲线法 图 规范曲线 配制一系列浓度不同的规范溶液，显色后，用一样规格的比色皿，
5、在一样条件下测定各标液的吸光度，以标液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标作图，实际上应该得到一条过原点的直线，称为规范曲线。然后取被测试液在一样条件下显色、测定，根据测得的吸光度在规范曲线上查出其相应浓度从而计算出含量，如下图。2比较法)()(sxSccAA)()(sxScAAc 例：例：准确取含磷准确取含磷30 g的标液，于的标液，于25 mL容量瓶中显色定容，在容量瓶中显色定容，在690 nm处处测得吸光度为测得吸光度为0.410；称取；称取10.0 g含磷试样，在同样条件下显色定容，在同一波含磷试样，在同样条件下显色定容，在同一波优点测得吸光度为优点测得吸光度为0.320。计算试样中磷的含量。
6、解：。计算试样中磷的含量。解：sxsx)()(mmSccAA66x103.2100.1023ggmmw四、仪器一、显色反响 第四节 显色反响及其条件的选择 在吸光光度分析中所用到的显色反响主要有配位反响、氧化复原反响等。用于吸光光度分析的显色反呼应满足以下要求：选择性好，干扰少；灵敏度高；有色化合物的组成恒定；有色化合物的性质稳定 色差大 二、显色反响条件的选择 1显色剂用量 MRMR（待测组分）（显色剂）（有色化合物）2、溶液的酸度 影响配合物的组成；影响配合物的组成；影响被测离子的存在形状；3、显色温度 4显色时间 5溶剂 三、测定中的干扰及其消除方法 第五节第五节 光度丈量误差及丈量条件
7、的选择光度丈量误差及丈量条件的选择 控制试液的浓度：含量大时，少取样或稀释试液；含量少时，可多取样或萃取富集。一、吸光光度分析误差 1偏离朗伯-比耳定律 偏离朗伯比耳定律的主要缘由如下：非单色光引起的偏离；化学、物理要素引起的偏离。2光度丈量误差 二、丈量条件的选择 1选择适宜的入射光波长 2控制适当的读数范围 由于吸光度在0.20.8范围内丈量的读数误差较小，所以，应尽量使吸光度读数控制在此范围内，为此可采取以下措施：选择不同厚度的比色皿。读数太大时，可改用厚度小的比色皿；读数太小时，改用厚度大的比色皿。3选择适当的参比溶液 假设样品溶液、试剂、显色剂均无色时，选溶剂作参比，称为“溶剂空白；
8、假设样品溶液有色，而试剂、显色剂无色时，选不加显色剂的样品溶液作参比，称为“样品空白；假设试剂、显色剂有色，而样品溶液无色时，选不加样品的试剂、显色剂溶液作参比，称为“试剂空白。第六节第六节 吸光光度分析的运用吸光光度分析的运用一、示差分光光度法 示差分光光度法是以一个与被测试液浓度接近的规范溶液显色后作为参比溶液进展丈量，从而求得被测物含量的分析方法。假设分别以c(s)和c(x)表示参比溶液和被测试液的浓度且 c(x)c(s)，根据朗伯比耳定律可得：)(xxcbA)(sscbAcbscxcbAAA)()(sx 二、多组分分析 设某溶液中含有x和y两种组分，其浓度分别为c(x)和c(y)，它们的吸收光谱能够会出现如下图的几种情况：1.不重叠 2.单向重叠 3.双向重叠)(x1x1xcbA)()(y2x2yx2ycbxcbA)()(y1x1yx1ycbxcbA)()(y2x2yx2ycbxcbA三、双波长分光光度法
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