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1、编写教师：郑洪副教授编写教师：郑洪副教授编写日期：编写日期：2006年年9月月实验实验10 分子荧光分析法分子荧光分析法编写教师：郑洪副教授编写教师：郑洪副教授编写日期：编写日期：2006年年9月月光光谱谱分分析析原原子子光光谱谱（略略）分分子子光光谱谱分分子子吸吸收收U UV V-V Vi is s（紫紫外外-可可见见）I IR R（红红外外）分分子子发发光光光光致致发发光光其其它它发发光光形形式式如如：化化学学发发光光等等荧荧光光、磷磷光光(对光的吸收对光的吸收)编写教师：郑洪副教授编写教师：郑洪副教授编写日期：编写日期：2006年年9月月21V=0321V=021V=0S0S1S2T1发
2、生激发发生激发态反应态反应分子内的激发和衰变过程分子内的激发和衰变过程21V=0A1A2VRFiciscPVR激发态能量的跃迁与转激发态能量的跃迁与转 化的形式和速率：化的形式和速率：A1,A2 吸收吸收:10-15 sVR 振动松弛：振动松弛：10-12 sic 内转化：内转化：10-11 sisc 系间窜越：系间窜越：10-6 10-2 sF 荧光：荧光：10-9 10-6 sP 磷光：磷光：10-6 100 s编写教师：郑洪副教授编写教师：郑洪副教授编写日期：编写日期：2006年年9月月2503003504004505005506000200400600800 Ex.Wavelength
3、(nm)Relative Fluorescence Intensity激发光谱激发光谱发射光谱发射光谱任何荧光化合物，都具有两种特征的光谱：激发光谱和任何荧光化合物，都具有两种特征的光谱：激发光谱和发射光谱。发射光谱。组成、结构与衍化信息组成、结构与衍化信息 物质的化学结构物质的化学结构 环境与介质条件环境与介质条件 与其它溶质的相互作用与其它溶质的相互作用 反应动力学反应动力学编写教师：郑洪副教授编写教师：郑洪副教授编写日期：编写日期：2006年年9月月O-OCOO-O-OCOO-NH2萘 紫外区蒽 蓝区丁省 绿区1）共轭结构2）刚性的平面结构荧光黄会发荧光酚酞不发荧光3）取代基编写教师：郑
4、洪副教授编写教师：郑洪副教授编写日期：编写日期：2006年年9月月F=KI0fC I I0 0：光源强度；：光源强度；f f：荧光量子产率；：荧光量子产率；C C：荧光体浓度）：荧光体浓度）1 1）影响相对荧光强度的因素有哪些？）影响相对荧光强度的因素有哪些？2 2）试比较荧光法与紫外）试比较荧光法与紫外-可见分光光度法的分析性能。可见分光光度法的分析性能。?问题：问题：55056057058059060061062006001200180024003000360042004800C Fluorescence IntensityWavelength(nm)（注意：注意：在一定浓度范围内适用）在
5、一定浓度范围内适用）编写教师：郑洪副教授编写教师：郑洪副教授编写日期：编写日期：2006年年9月月？问题问题：荧光光度计与紫外荧光光度计与紫外-可见分光光度计在光路设置可见分光光度计在光路设置 上有什么不同？为什么？上有什么不同？为什么？编写教师：郑洪副教授编写教师：郑洪副教授编写日期：编写日期：2006年年9月月 常规分析应用：常规分析应用：定性分析：定性分析：f；ex；em；峰形等；峰形等 定量检测：定量检测：F=KI0fC 其它（略）其它（略）高端生化研究：高端生化研究：分子相互作用研究；分子相互作用研究；代谢动力学跟踪；代谢动力学跟踪；显微成像显微成像（物理迁移与化学衍化的原位（物理迁
6、移与化学衍化的原位“显迹显迹”）编写教师：郑洪副教授编写教师：郑洪副教授编写日期：编写日期：2006年年9月月编写教师：郑洪副教授编写教师：郑洪副教授编写日期：编写日期：2006年年9月月2.1 2.1 实验原理实验原理NCH2OHHOH3CRR=CH2NH2,CH2OH,CHO.在近中性的水溶液在近中性的水溶液中有较强的荧光发射中有较强的荧光发射:（323nm/392nm 323nm/392nm 附近）附近）在碱性介质中不稳定在碱性介质中不稳定易发生光降解易发生光降解VBVB6 6 的化学结构的化学结构编写教师：郑洪副教授编写教师：郑洪副教授编写日期：编写日期：2006年年9月月、试液配制、
7、试液配制 、VB6的荧光光谱的绘制的荧光光谱的绘制、标准工作曲线的制作、标准工作曲线的制作、未知液的配制、未知液的配制编写教师：郑洪副教授编写教师：郑洪副教授编写日期：编写日期：2006年年9月月注射液的移取与稀释注射液的移取与稀释系列标液的测定顺序系列标液的测定顺序即放即测，防光降解即放即测，防光降解荧光仪的开关机顺序荧光仪的开关机顺序编写教师：郑洪副教授编写教师：郑洪副教授编写日期：编写日期：2006年年9月月1.从荧光光谱图上读出最大激发（从荧光光谱图上读出最大激发（ex）和发射波长（）和发射波长（em）2.用标准工作曲线法算出所配实测试液的浓度用标准工作曲线法算出所配实测试液的浓度3.计算注射液中维生素计算注射液中维生素B6的含量，的含量，病计算测定量占病计算测定量占 标示量标示量 的百分数的百分数
仪器分析实验实验分子荧光分析法
