食品生物技术基因工程复习题

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1、复习题一、 名词解释基因重组 (gene recombination)：是指DNA片段在细胞内、细胞间，甚至在不同物种之间进行交换，交换后的片段仍然具有复制和表达的功能。克 隆：来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。限制性内切酶：限制酶是在生物体(主要是微生物)内的一种酶，能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性内切酶。黏性末端：被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。质粒：是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，包括真核生物的细胞器和细菌细胞中核区外的DNA分子。基 因：是一切生物体内储存遗传信息的，

2、有自我复制能力的遗传功能单位。CDNA ：以RNA为模板，在逆转录酶的作用下，生成的RNA-DNA中的DNA为CDNA。CCCDNA：绝大多数的天然DNA质粒具有共价、封闭、环状的分子结构，即CCCDNA。 生物技术：是在细胞水平上，特别是在分子水平上对生物体遗传性实现巨大的接近定向改造的一套内容繁多和复杂的技术。DNA克隆（分子克隆、基因克隆、重组DNA）：应用酶学方法，在体外将外源性遗传性物质与载体结合成重组DNA分子，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子的过程。回文结构：在切割部位，一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序

3、完全一致。同尾酶：来源各异，识别的靶子序列也各不相同，但都产生出相同的粘性末端。目的基因：是人们所需要转移或改造的基因。序列分析：是指对某一段分子或片段的核苷酸排列顺序测定，测得组成分子的、 、的排列顺序基因转移（transgenosis）：是借助于物理、化学或生物的手段将外源基因导入受体细胞，并检查其在该细胞内表达情况的一种技术，是细胞工程中一项重要而应用广泛的技术。 报告基因：系指其编码产物能够被快速地测定，常用来判断外源基因是否已经成功地导入寄主细胞（器官或组织）并检测其表达活性的一类特殊用途的基因选择标记基因：简称选择基因，是指可使被转化的细胞获得其亲本细胞所不具备的新的遗传特性，从而

4、使得人们能够使用特定的选择培养基，将转化的新细胞从亲本细胞群体中选择出来的一类特殊的基因基因探针：是一段与目的基因互补的核酸序列，可以是，也可以是，用它与待测样品或进行核酸分子杂交，可以判断两者的同源程度原位杂交：将标记的核酸探针与固定在细胞或组织中的核酸进行杂交，Dot印迹杂交：将待测或的细胞裂解物变性后直接点在硝酸纤维素膜上，不需要限制性酶进行酶切，既可与探针进行杂交反应基因的转移技术：就是将外源目的基因或DNA片段引人受体生物或细胞并检查其在转化细胞中表达结果的一种技术。cDNA文库：是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载体连接而成的克隆的集合。RT-PCR:先用逆转录酶

5、作用于mRNA，以寡聚dT为引物合成cDNA第一链，然后用已知一对引物，扩增嵌合分子，这种方法称为逆转录PCR二、填空题1.1972年斯坦福大学的_ Berg _等人完成了首次体外重组实验，并首次用限制性内切酶切割SV40的DNA片断与l噬菌体的DNA片断，经过连接，组成重组DNA分子，他是第一个实现DNA重组的人。 2.1973年斯坦福大学的 Cohen 将伤寒沙门氏抗链霉素质粒与含有四环素抗性基因的大肠杆菌质粒pSC101连接成重组质粒，具有双重抗药性。标志着基因工程的诞生。3.基因工程的意义 大规模的生产生物分子， 设计构建新物种， 搜寻、分离和鉴定生物体尤其是人体内的遗传信息。4.基因

6、工程的特征 跨物种性 ， 无性扩增 。5.限制性内切酶分为 I ， II _， III _。6.我国青年科学家陈炬成功地把人的干扰素基因嫁接到烟草的DNA分子上，使烟草获得了抗病毒的能力，试分析：烟草有了抗病毒的能力，这表明，烟草体内产生了人的干扰素。这说明人和烟草共用一套遗传密码；蛋白质合成的方法_ 相同 _（填“相同”或“不同”）；也说明了DNA是_遗传物质_。7. 基因工程中的运载体必须具备A 能够在宿主细胞中复制并稳定地保存B 具多个限制酶切点，以便与外源基因连接C 具有某些标记基因，便于进行筛选。8.限制酶是一类专门切割 DNA 的酶，它能特异性识别切割 双 链（单、双）DNA。9.

7、限制酶命名采用Smith和A thens提议的方案，第一个字母大写取自来源细菌的属名_；第二、三个字母取自来源细菌的_种名_；第四个字母（如果有）取自来源菌的_株 系。10.自然界的基因转移与重组有_接合作用_，_转化_，_转导_，_转染_ _。11.基因工程的基本步骤_切、接、转、增、检 。12.目的基因的提取方法 鸟枪法 ，_反转录法 ， _根据已知的氨基酸序列合成DNA 。13.聚合酶链反应（PCR）的基本步骤 变性 _，_ 退火_， _延伸。 所用的酶为 TaqDNA聚合酶 ， 酶 耐热的 特性。14.常用的报告基因 基因_， 基因_， 基因_ ， 基因 _ ， 基因和基因_ 。15.

8、DNA序列测定常用方法有末端终止，化学裂解法，DNA测序自动化。16.运载体的作用_将外源基因转移到受体细胞中去_， 利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制_ 。17.目的基因导入受体细胞常用的受体，微生物用 大肠杆菌 ，植物用 拟南芥 _ 18.Maxam-Gilbert化学裂解法中使戊糖脱落，用于嘌呤环的试剂是 硫酸二甲酯 ，而 联氨 可用于肼解嘧啶环。19.基因工程的两个基本特点是：(1)分子水平上的操作_，(2) 细胞水平上的表达_。 20.核酸杂交探针可分为两大类：DNA探针和RNA探针。其中DNA探针又分为基因组DNA探针和cDNA探针。 21.如果用限制性内切核酸酶切割双

9、链DNA产生5突出的黏性末端，则可以用Klenow酶填补的方法3末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3突出的黏性末端，可以用T4DNA聚合酶进行3末端标记。 22.单链DNA探针的标记可以采用下列方法：(1) 用M13噬菌体载体合成单链DNA探针；(2)从mRNA反转录合成单链cDNA探针；(3)用不对称PCR合成单链DNA探针 。 23.根据Northern杂交的结果可以说明：外源基因是否进行了转录。 24.RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜) 上，同一放射DNA探针杂交的技术称Northern印迹。 25.在Southern印迹技术中，

10、DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的DNA探针杂交。 26.可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有5-3合成酶；和3-5外切核酸酶的活性。 27.根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素：(1)_克隆的是完整的基因；(2)_ 使用的是表达载体； (3) 不含内含子。 28.Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别： (1)_ 印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA (2)_ 电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件29.放射免疫筛选的原理基于以下三点：(1)_

11、抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)_ 同一个抗原可以同几种抗体结合；(3)_ 抗体能够被标记_30. 番茄在运输和贮藏过程中，由于过早成熟而易腐烂。应用基因工程技术，通过抑制某种促进果实成熟激素的合成能力，可使番茄贮藏时间延长，培育成耐贮藏的番茄新品种，这种转基因番茄已于1993年在美国上市。请回答： （1）促进果实成熟的重要激素是乙烯。 （2）在培育转基因番茄的基因操作中，所用的基因的“剪刀”是限制性内切酶，基因的“针线”是DNA连接酶，基因的“运输工具”是运载体。 （3）与杂交育种、诱变育种相比，通过基因工程来培育新品种的主要优点是目的性强、育种周期短和克服远缘杂交的障碍。31. 科学家

12、通过基因工程培育抗虫棉时，需要从苏云金芽孢杆菌中提取出抗虫基因，“放入”棉的细胞中与棉的DNA结合起来并发挥作用，请回答下列有关问题： （1）从苏云金芽孢杆菌中切割抗虫基因所用的工具是限制性内切酶，此工具主要存在于微生物中，其特点是一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的位点切割。 （2）苏云金芽孢杆菌一个DNA分子上有许多基因，获得抗虫基因常采用的方法是“鸟枪法”。具体做法是：用限制性内切酶将苏云金芽孢杆菌的DNA切成许多片段，然后将这些片段分别与运载体结合，再通过运载体转入不同的受体细胞，让它们在各个受体细胞中大量复制，从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法把带有目的基因的D

13、NA片断分离出来。 （3）进行基因操作一般要经过的四个步骤是：提取目的基因、目的基因与载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与表达。32、在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。请据图回答：A过程需要的酶有(同一种)限制酶、DNA连接酶(缺一不可)。要把重组质粒导入土壤农杆菌，首先必须用Ca2+处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为感受态；然后将将重组质粒和感受态细胞在缓冲液中混合培养完成转化过程。含有重组质粒的土壤农杆菌侵染离体棉花叶片组织后，将离体棉花叶片组织培养成再生植株

14、要经过C 脱分化和E 再分化。如要确保再生植株中含有抗虫基因，可在C过程的培养基中加入卡那霉素。如想利用分子杂交技术检测再生植株中的抗虫基因是否转录，应该用放射性同位素标记的目的基因作为探针与mRNA三、选择题1、下列目的基因的获取过程中不宜用“鸟枪法” 获取的是 （ ） A胰岛素基因 B.抗虫基因 C抗病毒基因 D.固氮基因2、英国科学家维尔莫特首次用羊的体细胞(乳腺细胞)成功地培育出一只小母羊，取名“多利”，这一方法被称之为“克隆”，以下四项中与此方法在本质上最相近的是（ ） A将兔的早期胚胎分割后，分别植入两只母兔子宫内，并最终发育成两只一样的兔B将人的抗病毒基因嫁接到烟草的DNA分子上

15、，培育出具有抗病能力的烟草新品种C将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞D将人的精子与卵细胞在体外受精，受精卵在试管内发育3、用大肠杆菌生产胰岛素需应用的生物工程不包括（ ）A.基因工程B.细胞工程C.发酵工程D.酶工程4、细菌的某个基因发生突变，导致该基因编码的蛋白质肽链中一个氨基酸替换成了另一个氨基酸，该突变发生在基因的（ ）A. 外显子 B. 编码区C. RNA聚合酶结合的位点 D. 非编码区5、以下有关基因工程的叙述，正确的是（ ）A. 基因工程是细胞水平上的生物工程B. 基因工程的产物对人类都是有益的C. 基因工程产生的变异属于人工诱变D. 基因工程育种的优点之一是目的性强

16、6、为了培育节水高产品种，科学家将大麦中与抗旱节水有关的基因导入小麦，得到转基因小麦，其水分利用率提高了20%。这项技术的遗传学原理是（ ）A基因重组 B基因突变 C基因复制 D基因分离7、利用苏云金芽孢杆菌的抗虫基因培育的抗虫棉是否成功，最好检测（ ）A是否有抗生素产生 B是否有目的基因表达C是否有抗虫的性状出现 D是否能分离到目的基因8、在人类染色体DNA不表达的碱基对中，有一部分是串联重复的短序列，它们在个体之间有显著的差异性，这种短序列可用于（ ）A生产基因工程药物 B侦查罪犯C遗传病的产前诊断 D基因治疗9.下列DAN片段中具有回文结构的是（ ）AGCAGTCGACTTG. BTAG

17、TTCGCAATCCCGATGGTACTTC DACAATTCGCCTA10. 伊拉克战争加剧了海洋石油污染。基因工程创造的“超级细菌”能提高降解石油的效率。这是因为（ ） A.多种基因目的的表达 B.不消耗O2 C.提供动物幼体的食物 D.以石油成分作为生长因子 11. 下列关于生物工程中，人们对所需的对象进行筛选的叙述不正确的是（ ） A.在基因工程中可依标记基因对工程细菌进行筛选 B.在基因工程中利用病菌侵染对所育植物品种的抗病性进行筛选 C.微生物培养中利用无氮培养基可筛选出共生固氮菌 D.在细胞工程中利用双亲细胞的特性可对杂种细胞进行筛选 12. 2000年6月26日，6国科学家向全

18、世界宣布：“人类基因组草图”的绘制工作已经全部完成。“人类基因组草图”是指（ ） A.人类所有基因控制蛋白质合成的机制 B.人类所有基因的功能 C.人类所有基因的数目 D.人类DNA中全部的遗传信息 13. 现在人们已经实现了分子水平上遗传物质的人工重组，下列实例中属于分子水平上人工重组基因的是（ ） A.利用杂交技术培育出新的高品质水稻品种 B.科学工作者将猪的胰岛素转变成人的胰岛素 C.能产生抗体的小鼠B淋巴细胞和骨髓细胞的融合 D.将人的抗胰蛋白酶基因导入到羊的DNA分子中 14. 在基因工程中用来完成基因的剪切和拼接的工具是( ) A限制酶和连接酶 B限制酶和水解酶 C限制酶和运载体

19、D连接酶和运载体 15. 1993年，我国科学工作者培育成的抗棉铃虫的最新转基因抗虫棉，其抗虫基因来源于（ ） A普通棉花的基因突变 B棉铃虫变异形成的致死基因 C在棉铃虫体内寄生的线虫基因 D苏云金芽孢杆菌体内的抗虫基因 16. 能有效地打破物种的界限、定向地改造生物的遗传性状，培育新的农作物优良品种的生物技术是（ ） A. 杂交育种技术 B诱变育种技术 C基因工程技术 D组织培养技术 17. 下列关于基因工程的叙述正确的是（ ） A所有的限制酶都能识别同一种特定的核苷酸序列 B基因工程技术是唯一能冲破远源杂交不亲和的障碍培育生物新品种的方法 C质粒是基因工程中唯一用作运载目的基因的工具 D

20、对目的基因进行大量复制的过程称为分子“克隆” 18. “科技奥运”是2008年北京奥运会的三大理念之一，而基因兴奋剂的检测是其中一个重要课题。一些运动员和教练员将能提高身体素质的基因植入体内，借助基因疗法进行不公平的竞赛，这就是基因的兴奋剂。比如说EPO(促红细胞生成素)是一种传统的兴奋剂，这种兴奋剂可增加血液中红细胞含量，从而提高运动成绩，许多运动员因冒险服用而遭禁赛。若借助于基因治疗手段，将这种兴奋剂的基因注入人体，在身体里形成一个局部的EPO制造基地，那么传统的尿样和血样检测都无法查出。下列有关基因兴奋剂的说法，错误的是 A运动员注入的能改善运动员各种运动能力和耐力的基因称为基因兴奋剂

21、BEPO(促红细胞生成素)可增加血液中红细胞含量，提高运输氧气的能力 C通过DNA检测，可以查出运动员体内是否加入了基因兴奋剂 D基因兴奋剂引起的变异属于可遗传变异，产生的物质对人体无副作用 19.我国科学家在利用基因工程培育抗虫棉的过程中，经提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞这三个步骤后，在全部受体细胞中，能够摄入抗虫棉基因的受体细胞占（ ）A.全部 B.大部分 C.一半 D.很少20.质粒是基因工程最常用的运载体，它的主要特点是：能自主复制不能自主复制结构很小蛋白质环状RNA环状DNA能“友好”地“借居”（ ）A. B. C. D. 21.下列含有内含子的生物是（

22、）A.大肠杆菌 B. 青霉C. 放线菌D.蓝藻22.基因工程的设计施工是在什么水平上进行的（ ）A.细胞 B.细胞器 C.分子 D.原子23.细菌抗药性基因存在于（ ）A.核DNA B.质粒 CRNA D.小的直线型DNA24. 下列关于转基因植物的叙述，正确的是()A转入到油菜的抗除草剂基因，可能通过花粉传入环境中B转抗虫基因的植物，不会导致昆虫群体抗性基因频率增加C动物的生长激素基因转入植物后不能表达D如转基因植物的外源基因来源于自然界，则不存在安全性问题25. 下列叙述符合基因工程概念的是()AB淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中含有B淋巴细胞中的抗体基因B将人的干扰素基因重组到质粒后

23、导入大肠杆菌，获得能产生人干扰素的菌株C用紫外线照射青霉菌，使其DNA发生改变，通过筛选获得青霉素高产菌株D自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌DNA上26. 下列关于基因工程应用的叙述，正确的是()A基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因B基因诊断的基本原理是DNA分子杂交C一种基因探针能检测水体中的各种病毒D利用基因工程生产乙肝疫苗时，目的基因存在于人体B淋巴细胞的DNA中27. 近年来基因工程的发展非常迅猛，科学家可以用DNA探针和外源基因导入的方法进行遗传病的诊断和治疗，下列做法中不正确的是()A用DNA探针检测镰刀型细胞贫血症B用DNA探针检测病毒性肝炎C用导入外源

24、基因的方法治疗半乳糖血症D用基因替换的方法治疗21三体综合征（21三体综合征是由于患者多了一条21号染色体，不能用基因替换的方法治疗）28. 下列有关基因工程的叙述，正确的是：（）ADNA连接酶的作用是将两个黏性末端的碱基连接起来B目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变C目的基因与运载体结合的过程发生在细胞外D常使用的运载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等29.下列关于基因工程的叙述，正确的是：（）A基因工程经常以抗菌素抗性基因为目的基因B细菌质粒是基因工程常用的运载体C通常用一种限制性内切酶处理含目的基因的DNA，用另一种处理运载体DNAD为育成抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因

25、时只能以受精卵为受体30.与“限制性内切酶”作用部位完全相同的酶是：（）A反转录酶BRNA聚合酶CDNA连接酶D解旋酶31.限制性内切酶的作用实际上就是把DNA上某些化学键打断，一种能对GAATTC专一识别的限制酶，打断的化学键是：（）AG与A之间的键BG与C之间的键CA与T之间的键D磷酸与脱氧核糖之间的键32.下列技术中不能获得抗锈高产小麦新品种的是()A诱变育种B细胞融合 C花粉离体培养 D转基因 33下列能说明目的基因完成了表达的是()A棉株中含有杀虫蛋白基因B大肠杆菌中具有胰岛素基因C土豆含有抗病毒的基因D酵母菌中提取到了干扰素34基因工程的叙述，正确的是()A基因工程经常以抗生素抗性

26、基因为目的基因B细菌质粒是基因工程常用的运载体C通常用一种限制性内切酶处理含目的基因的DNA，用另一种处理运载体DNAD为育成抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体35基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是()A人工合成基因B目的基因与运载体结合C将目的基因导入受体细胞D目的基因的表达和检测36. 科学家们经过多年的努力，创立了一种新兴的生物技术基因工程，实施该工程的最终目的是（ ） A定向提取生物体DNA分子 B定向对DNA分子进行人工“剪切” C定向改造生物的遗传性状 D在生物体外对DNA分子进行改造37.下列哪项

27、不是基因工程中用来运载目的基因的载体？（ ） A细菌质粒 B噬菌体 C、动植物病毒 D细菌核区的DNA38基因工程中，常用的细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是（ ） A结构简单，操作方便 B繁殖速度快 C遗传物质含量少 D性状稳定，变异少39在基因工程中用来修饰改造生物基因的工具是（ ） A限制酶和连接酶 B限制酶和水解酶 C限制酶和运载体 D连接酶和运载体40有关基因工程的叙述正确的是（ ） A限制性内切酶只在获得目的基因时才用 B重组质粒的形成在细胞内完成 C质粒都可作运载体 D蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料41不属于目的基因与运载体结合过程的是（ ） A用一定的限制酶切割质粒

28、露出黏性末端 B用同种限制酶切割目的基因露出黏性末端 C将切下的目的基因的片段插入到质粒切口处 D将重组DNA导入受体细胞中进行扩增42科学家将含有人的抗胰蛋白酶基因的DNA片段注射到羊的受精卵中，该受精卵发育的羊能分泌含抗胰蛋白酶的奶。这一过程涉及（ ） DNA按照碱基互补配对原则自我复制 DNA以其一条链为模板合成RNA RNA以自身为模板自我复制 按照RNA密码子的排列顺序合成蛋白质 A B C D43实施基因工程第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来，这要利用限制性内切酶。从大肠杆菌中提取的一种限制性内切酶ECORI，能识别DNA分子中的GAATTC序列，切点在G与A之间。

29、这是应用了酶的（ ） A高效性 B专一性 C多样性 D催化活性受外界条件影响44下列有关基因工程技术的叙述中正确的是（ ） A重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体 B所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列 C选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快 D只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达45下列说法正确的是（ ） ADNA连接酶最初是从人体细胞中发现的 B限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列 C质粒是基因工程中惟一用作运载目的基因的运载体 D利用运载体在宿主细胞内对目的基因进行大量复制的过程可称为“克隆”46下列关于限制酶的说法不正确的是（ ） A限制酶广泛存

30、在于各种生物中，微生物中很少分布 B一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C不同的限制酶切割DNA的切点不同 D限制酶的作用是用来提取目的基因47、下列有关基因的叙述，错误的是（ ）A蛋白质是基因表达的唯一产物 B 基因是 DNA 链上具有编码功能的片段C 基因也可以是 RNA D 基因突变不一定导致其表达产物改变结构48、基因工程的单元操作顺序是（ ）A 增，转，检，切，接 B 切，接，转，增，检C 接，转，增，检，切 D 切，接，增，转，检 49、下列各组专业术语中，含义最为接近的是（ ）A 终止子与终止密码子 B 基因表达与基因转译C DNA 退火与 DNA 复性 D 重组子与转化子5

31、0、根据酶切活性对盐浓度的要求，限制性核酸内切酶可分成（ ）A 2 大类 B 3 大类 C 4 大类 D 5 大类51、T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是（ ）A 2 -OH 和 5 P B 2 -OH 和 3 -PC 3 -OH 和 2 P D 5 - P和 3 - OH52、下列有关连接反应的叙述，错误的是（ ）A 连接反应的最佳温度为 37 B 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10%C 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mMD 连接酶通常应过量 2-5 倍53、原生质体转化方法不大适用于（ ）A 大肠杆菌 B 枯草杆

32、菌 C 酵母菌 D 链霉菌54、下列各常用载体的装载量排列顺序，正确的是（ ）A Cosmid -DNA Plasmid B -DNA Cosmid PlasmidC Plasmid -DNA Cosmid D Cosmid Plasmid -DNA55、若某质粒带有 lacZ 标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入（ ）A 半乳糖 B 异丙基巯基 - 半乳糖苷（ IPTG ）C 蔗糖 D 5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚基 - -D- 半乳糖苷（ X-gal ）56、下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是（ ）A 大肠杆菌繁殖迅速 B 枯草杆菌分泌

33、机制健全C 链霉菌遗传稳定 D 酵母菌表达产物具有真核性57、分子杂交的化学原理是形成（ ）A 共价键 B 离子键 C 疏水键 D 氢键58、cDNA 法获得目的基因的优点是（ ）A 成功率高 B 不含内含子 C 操作简便 D 表达产物可以分泌58、质粒载体中构建LacZ基因的目的是（ ）A、编码蓝色色素产物，可用于检测转化的细胞；B、编码一种可检测的酶，当基因内部的位点插入任何外源片段，破坏阅读框，产物不能表达；C、编码一种酶，可将RNA转化为DNA；D、仅为提供多克隆位点用59、采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是，人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。以

34、下有关叙述，正确的是 ( )A人体细胞中凝血因子基因编码区的碱基对数目，等于凝血因子氨基酸数目的3倍B可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA分子导入羊的受精卵C在该转基因样中，人凝血因子基因存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中D人凝血因子基因开始转录后，DNA连接酶以DNA分子的一条链为模板合成mRNA60、用基因工程技术可使大肠杆菌合成人的蛋白质。下列叙述不正确的是 ( ) A常用相同的限制性内切酶处理的基因和质粒 BDNA连接酶和 RNA聚合酶是构建重组质粒必需的工具酶 C可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒 D导入大肠杆菌的目的基因不一定能成功表达 61基因工

35、程中，切割目的基因和载体所用的限制酶及切口必备的特点是( )A可用不同的限制性内切酶，露出的黏性末端必须相同B必须用相同的限制性内切酶，露出的黏性末端可不相同C必须用相同的限制性内切酶，露出的黏性末端必须相同D可用不同的限制性内切酶，露出不同的黏性末端62在基因表达载体的构建中，下列说法不正确的是（ ）一个表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止子有了启动子才能驱动基因转录出mRNA终止子的作用是使转录在所需要的地方停止所有基因表达载体的构建是完全相同的A B C D63下图中有关工具酶功能的叙述，不正确的是( )A切断a处的酶为限制性内切酶 B连接a处的酶为DNA连接酶C切断b处的酶为DNA

36、解旋酶 D连接b处的酶为RNA聚合酶64下列不能作为基因工程受体细胞的是（ ）A动物的受精卵 B人的神经细胞 C大肠杆菌细胞 D酵母菌细胞65 以下是几种不同限制性核酸内切酶切割DNA分子后形成的部分片段。下列的叙述中，错误的是（ ）A以上DNA片段是由4种限制酶切割后产生的B若要把相应片段连接起来，应选用DNA聚合酶C上述能进行连接的两个片段，其连接后形成的DNA分子是D限制酶和DNA连接酶作用的部位都是磷酸二酯键66基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是( )A人工合成基因 B目的基因与运载体结合C将目的基因导入受体细胞 D目的基因的

37、检测与表达67下列有关基因工程中运载体的说法中，正确的一项是（ ）A在进行基因工程操作中，被用作运载体的质粒都是天然质粒B所有的质粒都可以作为基因工程中的运载体C质粒是一种独立于细菌染色体外的链状DNA分子D作为载体的质粒DNA分子上应有对重组DNA进行鉴定和选择的标记基因68下列有关基因工程技术的叙述，正确的是 ( )A重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体B所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C选用的细菌为重组质粒受体细胞，是因为质粒易进入细菌细胞且繁殖快D只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达69、下图为DNA分子的某一片段，其中、分别表示某种酶的作用部位，则相应的

38、酶依次是( )ADNA连接酶、限制性内切酶、解旋酶B限制性内切酶、解旋酶、DNA连接酶C解旋酶、限制性内切酶、DNA连接酶D限制性内切酶、DNA连接酶、解旋酶70科学家已能运用基因工程技术，让羊合成并由乳腺分泌抗体。下列相关叙述中，正确的是（ ）该技术将导致定向变异DNA连接酶把目的基因与运载体黏性末端的碱基对连接起来蛋白质中的氨基酸序列可为合成目的基因提供资料受精卵是理想的受体细胞A B C D71在已知某小片段基因碱基序列的情况下，获得该基因的最佳方法是( )A用mRNA为模板逆转录合成DNAB以4种脱氧核苷酸为原料人工合成C将供体DNA片段转入受体细胞中，再进一步筛选D由蛋白质的氨基酸序

39、列推测mRNA72下列关于基因工程的叙述中，正确的是( ) 基因工程是人工进行基因重组的技术，是在分子水平上对生物遗传作人为干预 基因治疗是基因工程技术的应用基因工程打破了物种与物种之间的界限DNA探针可用于病毒性肝炎的诊断、遗传性疾病的诊断、改造变异的基因、检测饮用水病毒含量A B C D73下列关于生物工程的相关知识，叙述正确的是 ( )A在基因工程操作中为了获得重组质粒，必须用相同的限制酶，露出黏性末端可以不相同B若要生产转基因抗病水稻，可将目的基因先导入到大肠杆菌中，再转入水稻细胞中C植物体细胞杂交，能克服远缘杂交不亲和的障碍，培育出的新品种一定不是单倍体D基因治疗主要是对具有缺陷的体

40、细胞进行全面修复74转基因作物（GMC )是通过转基因对农作物进行精确的改造而产生的，转基因作物一方面在产量、抗逆性及品质等方面 有显著改进，极大地降低农业生产成本，另一方面，科学家通过动物实验发现转基因作物可能对人类健康存在着危害。2000年2月27日，英国首相布莱尔为此发表了一篇文章，文中说：“毫无疑问，转基因作物对人类健康和环境有可能带来危害，保护公众和环境的安全，现在是，将来也是政府的首要任务。但与此同时，这种新的科技成果将给人类带来更多的利益，这也是毋庸置疑的。”就以上材料你以为下列说法欠妥的是（ ）A转基因技术应用的基本原理是基因重组，转基因作物是转基因技术的一种产物B如果转基因作

41、物产生了对人类健康及环境的负面影响，我们应该反思转基因技术C科学家必须在现有知识与技术的基础上尽量考虑转基因作物可能存在的风险及采取相应的防范措施D国家必须对转基因作物的研究制定相应的法律法规，并进行严格管理与有效控制75科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。下图是转基因抗冻番茄的培育过程示意图。下列相关的说法中，不正确的是（ ）A若图中是科学家构建的鱼抗冻蛋白基因的表达载体，它通常应包括目的基因、启动子、终止子、标记基因等B科学家常采用显微注射技术的方法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内C在转基因番茄食用过程中，可能会出现过敏反应、影响人体正常的代

42、谢、出现滞后效应等安全问题D多聚半乳糖醛酸酶(PG酶)可将成熟的番茄果实细胞壁中的多聚半乳糖醛酸降解为半乳糖醛酸，从而导致果实软化。抑制PG酶的活性可以延长番茄果实储藏期，则采用蛋白质工程技术降低该酶活性的一般过程： PG酶蛋白的功能分析PG酶蛋白的结构预测和设计PG酶基因的改造76下图是获得抗虫棉的技术流程示意图。卡那霉素抗性基因(kanr)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下列叙述正确的是 ( )A构建重组质粒过程中需要限制性内切酶和DNA连接酶 B愈伤组织的分化产生了不同基因型的植株C卡那霉素抗性基因(kanr)中有该过程所利用的限制性内切酶的识别位

43、点D抗虫棉有性生殖后代能保持抗虫性状的稳定遗传77下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，有关的叙述中错误的是（ ）A基因工程的核心是基因表达载体的构建B可以利用人的皮肤细胞来完成过程C过程必需的酶是逆转录酶，过程必需的酶是解旋酶D在利用AB获得C的过程中，必须用同一种限制性内切酶切割A和B，使它们产生相同的黏性末端78 菊花的紫花和白花性状是由一对等位基因控制的，紫色（R）对白色（r）显性。现已克隆到控制紫色的基因R，如果你打算利用上述材料开展研究，那么下表选项中，合理的是( )选项实验方案实验目的A用白花植株与紫花植株杂交判断显隐性B将控制开紫花的基因转入其他植物中 改变受体植

44、物花的颜色C将R基因转入大肠杆菌并大量表达紫色蛋白生产紫色蛋白用作染料D用紫花杂合子的嫩芽组织培养获得纯合子植株用于育种四、问答题1.基因工程诞生的技术突破的因素有哪些？限制性内切酶、DNA连接酶、载体、感受态体系、琼脂糖凝胶电泳、DNA测序技术2.举出转基因的两种方法，并说明其原理？DNA-磷酸钙沉淀法：由于核酸以磷酸钙DNA共沉淀物的形式存在，培养细胞对DNA的吸收会大大提高，细胞通过内吞作用，使DNA进入细胞质，并转移整合到细胞核内的染色体内。一般是将DNA与CaCl2 溶液混合后，同时加入HEPES缓冲的盐溶液（HeBS）混合，静置后形成DNA磷酸钙沉淀物，然后用来转染受体细胞。脂质体

45、（liposome）介导的基因转移： 脂质体是一种内部包装DNA的球状磷脂双分层膜结构，能与细胞膜融合将DNA送入细胞的。基因枪介导的DNA转移：它通过高速飞行的金属颗粒将包被其外的目的基因直接导入到受体细胞内，从而实现基因转化的方法。3.双脱氧法测序和Maxam-Gilbert化学裂解法的原理。以及测序基本过程？双脱氧法测序的原理。 在DNA合成时，利用ddNTP与dNTP竞争掺入到新生的DNA链上使链终止的原理。即在A、C、G、T 4种反应体系中，分别加入不同的ddNTP，其他试剂相同，经酶促合成反应，生成具有相同的5末端，而3不同的DNA片段的混合物。经电泳分离，放射自显影，直接读出DN

46、A的核苷酸序列。化学裂解法测序的原理1、用放射性核素标记待测DNA一侧末端2、将标记DNA分为G、A+G、C+T、C 4个反应体系3、用不同的化学试剂处理不同反应体系，随机断裂DNA片段某种碱基中的任何一个，产生一组一端为放射线标记的末端，另一端为不同大小的DNA片段的混合物4、电泳分离，放射自显影得到互相错落的梯形图谱，即可读出DNA序列不管是上述哪一种方法，测序基本过程如下：1、制备待测DNA序列模板；2、酶促或化学反应将其转变“等差数列”（n=1）；3、PAGE；4、读序。4.Southern印迹、Northern印迹、estern印迹、原位杂交的原理及应用。以及Northern印迹与S

47、outhern 印迹的不同点？Southern印迹：提取重组体总DNA，限制性酶切后进行琼脂糖凝胶电泳，在碱溶液中使DNA变性即双链变为单链，再经毛细管虹吸作用被原位转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上，将膜上的DNA烤干固定后加入杂交液和标记探针进行杂交，洗去多余探针，在X光底片上放射自显影。Northern印迹：提取重组体总RNA或mRNA，在强变性剂防止RNA形成二级结构环，进行琼脂糖凝胶电泳，电泳后，将电泳分离开的RNA原位吸印到化学处理过的纸或硝酸纤维素膜上，将膜上的RNA烤干固定后加入杂交液和标记探针进行杂交，洗去多余探针，在X光底片上放射自显影。estern印迹：提取重组体蛋白质，用SD

48、S-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质，然后将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上原位转移到硝酸纤维素膜上，最后进行抗体与抗原结合反应。原位杂交：先通过一定方法，让菌落转移到一种支撑膜上，如硝酸纤维素膜，然后裂解膜上的细菌，使DNA变性并原位结合在膜上，将带有DNA印迹的膜与放射性标记的RNA或DNA探针杂交，在杂交后，先洗去未杂交的探针，在进行放射性自显影。Northern印迹与Southern 印迹的不同点： 1、变性：RNA电泳前加热变性、电泳时加变性剂保持RNA处于变性状态，DNA电泳前和电泳中不变性 2、转膜：RNA转膜前不需变性和中和处理,Southern印迹时，DNA转膜前需进行碱变性及中和处理

49、3、靶核酸为RNA5.目的基因的提取方法有那些？具体说明其原理？目的基因的提取方法直接分离基因：鸟枪法人工合成基因：反转录法、根据已知的氨基酸序列合成DNA鸟枪法（散弹射击法）： 用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞提供的外源DNA的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（即扩增），从中找出含有目的基因的细胞，再利用一定的方法将目的基因的DNA片段分离出来。反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ：

50、根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。6.什么叫显微注射法DNA？显微注射法的优点有那些？显微注射DNA一般是用微吸管加DNA溶液在显微镜下准确地插入受体细胞核中，并将DNA注射进去的方法，在动物细胞转移中较常使用。现在，多利用显微镜操作器在相差显微镜下进行操作。每个细胞的注射量约为1011 ml，熟练的操作者每10分钟可注射200个细胞。 显微注射法的优点：1）转化率高达20，特别是在没有合适的DNA载体系统时更有价值；2）对各种受体细胞均适用，从体细胞、淋巴细胞到受精卵

51、；3）对转移物质没有限制，可以是DNA、RNA、蛋白质、病毒、代谢物或代谢底物以至细胞器、染色体、细胞核；4）可以控制转移的量和转移物的浓度；5）可选择受体细胞的核的接受位点，可研究物质在细胞内的运转，区隔化和依赖区隔的修饰；6）受体不用特殊的选择系统；7）要求的样品量少，2ml样品足够作显微注射；8）实验细胞与对照细胞可以在同样的条件下比较。但也有缺点，如设备和技术的要求较高，一次处理细胞数量不能太多，对细胞有损伤。7.理想质粒载体的必备条件？ 具有较小的分子质量和较高的拷贝数。具有若干限制性核酸内切酶的单一酶切位点。具有两种以上的选择标记基因。缺失mob基因。插入外源基因的重组质粒较易导入

52、宿主细胞并自制和表达。8.核酸操作的基本技术有哪些？核酸提取与纯化核酸的检测与保存核酸的凝胶电泳核酸分子杂交9、影响核酸保存的关键因素是什么？怎样保存核酸制品？关键因素：保存液的酸碱度保存温度保存方法：一般保存可用浓盐液，NaCL-柠檬酸缓冲液或0.1mol/L醋酸缓冲液。对DNA来说，在pH411的范围分子的碱基较稳定，超出此范围DNA 易变性或降解，低温、稀碱下保存DNA及低温下保存RNA均较稳定。固态核酸通常在0以上低温干燥保存即可。10、合成cDNA第二链的主要策略有哪些？自身引导合成法置换合成法PCR合成法快速扩增cDNA末端法双链cDNA末端的处理cDNA与载体的连接11、基因工程

53、诞生的理论基础是什么？是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三大发明。理论上的三大发现：证实了DNA是遗传物质揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定技术上的三大发明：限制核酸内切酶的发现与DNA切割DNA连接酶的发现与DNA片段的连接基因工程载体的研究与应用12. PCR技术主要应用于哪些领域？核酸基础研究序列分析检测基因表达从cDNA文库中放大特定序列研究已知片段邻近基因或未知DNA片段进化分析医学应用分析生物学证据性别控制转基因检测。13.大肠杆菌作为基因工程受体菌具有哪些特点？真核基因在大肠杆菌中表达存在哪些障碍？特点：大肠杆菌培养

54、方便、操作简单、成本低廉，基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚，对其基因表达调控的分子机理也比较了解，而且历经二十年的基因工程实践，大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系，有多种适用的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。 存在的障碍：第一，在大肠杆菌的mRNA的核糖体结合位点上，含有一个起始密码子及16S核糖体RNA 3末端碱基互补序列，即S-D序列，而真核上缺泛这个序列。第二，许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰，如正确的折叠和组装，而细菌中通常并没有这样的修饰机制，从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白。 第三、外源真核基因所

55、表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别，并被当做“异已分子”降解掉。14、典型的DNA重组实验通常包括哪些步骤？a、提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另一DNA分子上（克隆载体），形成一个新的重组DNA分子。b、将这个重组DNA分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。 c、对那些吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定。 d、对含有重组DNA的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。15、基因文库的构建对重组子的筛选举出3种方法并简述过程。1）抗生素抗性筛选、抗性的插入失活、兰-白斑筛选 或PCR筛选、差式筛选、DNA探针2）多数克隆载体均带有抗生素抗性基

56、因（抗氨苄青霉素、四环素）。当质粒转入大肠杆菌中后，该菌便获得抗性，没有转入的不具有抗性。但不能区分是否已重组。3）在含有两个抗性基因的载体中，如果外源DNA片段插入其中一个基因并导致该基因失活，就可用两个分别含不同药物的平板对照筛选阳性重组子。 如pUC质粒含LacZ基因（编码半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。16简述重组DNA技术中目的基因的获取来源和途径。目的基因的获取，主要有以下几种途径，化学合成法：已知某种基因的核苷酸序列或根据某种基因产

57、物的aa序列推导出该多肽链编码的核苷酸序列，再利用DNA合成仪合成。基因组DNA：一个细胞或病毒所携带的全部遗传信息，或整套基因的全部DNA片段从基因组DNA文库中获得cDNA文库。聚合酶链反应-PCR17简述。互补筛选重组体质粒细菌的原理。重组体的筛选方法有；直接法(dlrectselectlon)：针对载体携带的某种或某些标志基因和目的基因而设计的筛选方法称直接法。其特点是：直接测定基因或基因表型。A抗药性标志筛选：如克隆载体携带 有某个(些)抗药基因，如：ampr、tetr等。只有被转化的细菌才能在含有该抗生素的培养基生长，并形成菌落，使转化菌与非转化菌区别开。如重组体中的外源性基因插入到标志性基因内，标志性基因则失活，通过有或无抗菌素培养基对比培养，即可区分单纯载体转化菌和重组体(含目的基因的载体)转化菌。如：将目的基因插入tetr基因中，该载体就失去tetr抗药性，但仍有apmr抗药性，被转化的细菌(含重组体)可在含有apmr培养基生长，而不能在tet，培养基生长。也叫插入灭恬法。B补救标志(raarker rescue)筛选；如克隆基因能够在宿主菌表达，且表达产物与宿主苗的营养缺陷互补，那么就可以利用营养突变菌株进行筛选，这就是标志补救。如：酵母咪唑甘油磷酸脱水酶基因表达产物与细菌组氨酸合成有关。当酵母DNA与L噬苗体载体结合后，在转染或感染组氨酸缺陷型大肠杆