TMT蛋白组学的具体步骤及方法

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1、TMT蛋白组学的具体步骤及方法TMT ( Tandem Mass Tag )是 Thermo Fisher Scientific 开发的一种多肽体 外标记技术。通过对不同样品中的肽段采用不同通道的TMT试剂进行标记， 然后进行LC-MS/MS分析，实现样本蛋白组之间的相对定量。技术流程TMT技术流程图技术原理0NIIH严Muss RcporLeronnaliKer Fitnclioiial Group126-131 Da丁试割结构圏TMT试剂盒每个通道的报告基团和平衡基团分子量总和是一致的，当肽段用 TMT试剂标记后，来源于不同样本的同一序列的肽段的分子结构和分子量仍保 持一致，它们在一级质谱

2、中呈现为同一个信号，一起进入二级质谱分析阶段。 二级质谱中TMT试剂的平衡基团丢失，报告基团从肽段上碎裂下来，肽段自 身序列也被碎裂。肽段自身的碎片可用来定性分析肽段的序列组成。报告基团 的信号强度比值则能代表来源于不同样本的该肽段的含量比值。TMT 技术优势TMT 试剂盒每个通道的报告基团和平衡基团分子量总和是一致的，当肽段用 TMT 试剂标记后，来源于不同样本的同一序列的肽段的分子结构和分子量仍保 持一致，它们在一级质谱中呈现为同一个信号，一起进入二级质谱分析阶段。 因为标记后的肽段可以混合到一起，就可以将混合物一起进行色谱分级，然后 再进行质谱分析，这样能有效增加鉴定数目。 Mam mm

3、i aB-*样本蛋白质抽提上 -蛋白质是量评估 矚胶电泳粒成生物 TMT 技术流程：预屣谱分析质量 怦怙_数据库比对质最 评估4预实验通过肽段TMT标记High PH RP分级质谱分析数据库比对 |N肽段展量数偏差uX生物信息学分析正式实验按告粒成生物TMT优势a. 软硬件先进（仪器为 Q Exactive , Q Exactive PLUS 和 Q Exactive HF-X,软 件为 PD2.2/Mascot）;b. 质控严格（预实验中每个样本都需要进行蛋白质水平和预质谱水平的质检， 不合格的样本会给予合理建议。正式实验中对标记效率和仪器状态也进行严格 管控，发现不合格则重新开展实验，确保实验数据有效）;c. 专业的团队（团队成员经验丰富，能处理几乎所有类型的样本分析）；d. 强大的生信分析团队（除GO,KEGG等常规的分析外，还能进行IPA，趋势 聚类，蛋白质相互作用以及其他个性化分析）。粒成生物TMT成功案例: