微生物的实验室培养ppt课件

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1、到目前为止，到目前为止，几十项几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖生理学和医学奖，化学奖 都与微生物学有关都与微生物学有关单细胞的动植物单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等如草履虫、单细胞藻类等专题专题2:2:微生物的培育与运用微生物的培育与运用 培育微生物需求处理的两个问题是什么？培育微生物需求处理的两个问题是什么？1 1、为其提供适宜的营养条件和环境条件、为其提供适宜的营养条件和环境条件2 2、防止杂菌的入侵、防止杂菌的入侵1.1.营养成分：营养成分：思索：微生物思索：微生物“吃什么？吃什么？水、无机盐、碳源、氮源水、无机盐、碳源、氮源此外，还需求满足微生物生长对此外，还需求满足微生物生

2、长对pHpH、特殊营、特殊营养物质如养物质如:生长因子生长因子)以及氧气等的要求。以及氧气等的要求。1.1.根本成分：根本成分：碳源碳源无机碳源：无机碳源：有机碳源：有机碳源：CO2CO2、CO32-CO32-、HCO3-HCO3-牛肉膏牛肉膏自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物氮源氮源无机氮源：无机氮源：有机氮源：有机氮源：N2、NH4、NO3-蛋白胨蛋白胨牛肉膏蛋白胨培育基牛肉膏蛋白胨培育基 是一种运用最广泛和最普通的细菌根底培育基。是一种运用最广泛和最普通的细菌根底培育基。1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培育基的配方牛肉膏蛋白胨培育基的配方H2O 定容至定容至1000mlNacl

3、 5g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g琼脂琼脂20.0g分析其营养构成？分析其营养构成？C.自养型微生物与异养型微生物自养型微生物与异养型微生物的培育基的主要差别是的培育基的主要差别是()()A A碳源碳源 B B氮源氮源 C C无机盐无机盐 D D特殊营养物质特殊营养物质An.概念：概念：n.种类：种类：1 1按物理性质来分：固体培育基和液体培育基按物理性质来分：固体培育基和液体培育基 2 2按功能来分：选择培育基和鉴别培育基按功能来分：选择培育基和鉴别培育基固体培育基：菌落固体培育基：菌落选择培育基选择培育基n参与青霉素的培育基参与青霉素的培育基n参与高浓度食盐的培育基参与高浓度食盐

4、的培育基 n不加氮源的无氮培育基不加氮源的无氮培育基n不加含碳有机物的无碳培育基不加含碳有机物的无碳培育基分别酵母菌、霉菌等真菌分别酵母菌、霉菌等真菌抑制细菌、放线菌的生长抑制细菌、放线菌的生长分别金黄色葡萄球菌分别金黄色葡萄球菌分别固氮菌分别固氮菌分别自养型微生物分别自养型微生物伊红伊红美蓝培育基美蓝培育基是鉴别培育基，可以用是鉴别培育基，可以用来检测自来水中的大肠来检测自来水中的大肠杆菌能否超标，由于的杆菌能否超标，由于的代谢产物与伊红代谢产物与伊红美蓝美蓝结合，使菌落呈黑色并结合，使菌落呈黑色并带有金属光泽，使大肠带有金属光泽，使大肠杆菌的菌落显示出来，杆菌的菌落显示出来，并没有促进大肠

5、杆菌的并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物生长和抑制其他微生物的生长。的生长。例如：鉴别大肠杆菌培育基例如：鉴别大肠杆菌培育基大肠杆菌呈黑色中心大肠杆菌呈黑色中心,有或无金属光泽有或无金属光泽n获得纯真培育物的关键是什么？获得纯真培育物的关键是什么？防止外来杂菌污防止外来杂菌污染染1.目的：目的：2.方法：方法：消毒与灭消毒与灭菌菌消毒与灭菌的概念和区别？消毒与灭菌的概念和区别？2.2.无菌范围：无菌范围：实验操作空间消毒实验操作空间消毒操作者的手、穿着消毒操作者的手、穿着消毒实验器具灭菌实验器具灭菌实验操作过程实验操作过程二二.无菌技术：无菌技术：防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染1.

6、1.消毒与灭菌：消毒与灭菌：酒精灯旁操作酒精灯旁操作超净任务台超净任务台 有些细菌在一定有些细菌在一定的条件下，细胞里面的条件下，细胞里面构成一个椭圆形的休构成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。环境有很强的抵抗力。抗逆性极强抗逆性极强注：不是繁衍体注：不是繁衍体干热灭菌干热灭菌接种环、接种针等接种环、接种针等 金属器具金属器具7075、30min 80、15min100、56min消毒消毒灭菌灭菌定义定义方法方法较为温暖理化方法，较为温暖理化方法，杀死部分有害菌体杀死部分有害菌体不包

7、括芽孢、孢子不包括芽孢、孢子剧烈的理化方法，剧烈的理化方法，杀死一切微生物杀死一切微生物包括芽孢、孢子包括芽孢、孢子煮沸消毒法煮沸消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法化学药剂化学药剂紫外线紫外线灼烧灭菌灼烧灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌二二.无菌技术：无菌技术：防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染2.2.消毒与灭菌：消毒与灭菌：1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培育物无菌技术除了用来防止实验室的培育物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请他判别以下资料或器具能否需求消毒或请他判别以下资料或器具能否需求消毒或灭菌。假设需求，请选择适宜的方法。灭菌。假设需求，

8、请选择适宜的方法。1 1 培育细菌用的培育基与培育皿培育细菌用的培育基与培育皿2 2 玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管3 3 实验操作者的双手实验操作者的双手答：无菌技术还能有效防止操作者本身被微生物感染。答：无菌技术还能有效防止操作者本身被微生物感染。答：答：1、2需求灭菌；需求灭菌；3需求消毒。需求消毒。高压蒸气灭菌的原理是高压蒸气灭菌的原理是 A A高压使细菌高压使细菌DNADNA变性变性 B B高压使细菌蛋白质凝固变性高压使细菌蛋白质凝固变性 C C高温烫死细菌高温烫死细菌 D D高温使细菌高温使细菌DNADNA变性变性B B1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培育基的配

9、制、培育基的配制3 3、培育基的灭菌、培育基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培育、恒温箱中培育7 7、菌种的保管、菌种的保管涂布器涂布器接种环接种环接种针接种针四四.大肠杆菌的纯化培育：大肠杆菌的纯化培育：制备牛肉膏蛋白胨固体培育基制备牛肉膏蛋白胨固体培育基1.1.计算计算2.2.称量称量3.3.溶化溶化牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖4.4.调调pHpH、分装、封口、分装、封口5.5.灭菌灭菌6.6.倒平板倒平板 7.7.无菌检查：无菌检查：3737培育培育24-48h2

10、4-48h培育基、培育皿培育基、培育皿防琼脂糊底防琼脂糊底约约50防止皿盖上的水珠落入培育基，呵斥污染防止皿盖上的水珠落入培育基，呵斥污染灼烧灭菌，灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培育基防止瓶口的微生物污染培育基b.b.纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法 一、一、平板划线法平板划线法:经过接种环在琼脂固体培育基经过接种环在琼脂固体培育基外表延续画线的操作外表延续画线的操作,将聚集的菌钟逐渐稀释分散将聚集的菌钟逐渐稀释分散到培育基的外表到培育基的外表.在数次

11、画线后在数次画线后,可以分别到由一个细胞繁衍而来的可以分别到由一个细胞繁衍而来的肉眼可见的子细胞群体肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落这就是菌落.将接种环放在火将接种环放在火焰上灼烧，直到焰上灼烧，直到接种环接种环_在在_旁冷旁冷却接种环，并却接种环，并翻开棉塞翻开棉塞 将试管口经过火焰将试管口经过火焰 .将已_的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液 左手将皿盖翻开一条缝隙，右手左手将皿盖翻开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划板内，划_条平行线，条平行线，盖上皿盖。留意不要划破培育基。盖上皿盖。留意不要划破培育基。.将试管经过火焰，并塞上棉塞 火焰火焰冷却冷却

12、三至五三至五灼烧接种环，待其冷却后，从灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的第一区域划线的_开场开场往第二区域内划线。反复以上往第二区域内划线。反复以上操作，在三、四、五区域内划操作，在三、四、五区域内划线。留意不要将最后一区的划线。留意不要将最后一区的划线与第一区相连。线与第一区相连。末端末端烧红烧红将平板将平板_放放入培育箱中培育。入培育箱中培育。倒置倒置二二.大肠杆菌的纯化培育：大肠杆菌的纯化培育：纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌：平板划线法：平板划线法：菌种菌种划划3 3个平板个平板1 1个不划线个不划线1.1.接种：接种：接种环接种环防止划破培育基防止划破培育基反复实验反复实验空白对照空

13、白对照1.1.接种环只蘸一次菌液接种环只蘸一次菌液,但要在培育基不同位但要在培育基不同位置延续划线多次置延续划线多次.2.2.划线首尾不能相接划线首尾不能相接3.3.划线后划线后,培育皿倒置培育培育皿倒置培育划线分别法本卷须知划线分别法本卷须知:二、稀释涂布平板分别法二、稀释涂布平板分别法涂布分别法涂布分别法:是指将菌液进展一系列的梯度稀是指将菌液进展一系列的梯度稀释释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的外表，进展培育。固体培育基的外表，进展培育。在稀释度足够的菌液里，聚集在一同的微生在稀释度足够的菌液里，聚集在一同的微生物将分散成单个的细胞，

14、从而能在培育基外物将分散成单个的细胞，从而能在培育基外表构成单个菌落。表构成单个菌落。6 6支试管，分别参与支试管，分别参与9ml9ml无菌水无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：菌液菌液微量微量 移移液器液器稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：b.b.涂布平板：涂布平板：不超越不超越0.1ml0.1ml各梯度分别涂布各梯度分别涂布3个平板个平板1 1个不涂布作空白对照个不涂布作空白对照滴滴灼灼涂涂稀稀释释103103倍倍稀稀释释104104倍倍稀稀释释1

15、05105倍倍2、纯化大肠杆菌、纯化大肠杆菌平板划线法平板划线法:稀释涂布平板法稀释涂布平板法:(1)(1)接接种种方方法法.延续划线，延续划线，.逐渐稀释逐渐稀释.梯度稀释，梯度稀释，.分别涂布分别涂布.平板划线法：平板划线法：大肠杆菌的纯化培育：大肠杆菌的纯化培育：制备牛肉膏蛋白胨固体培育基制备牛肉膏蛋白胨固体培育基纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌：1.1.接种：接种：稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：2.2.培育：培育：将接种后的培育基和一个未接种的培育基将接种后的培育基和一个未接种的培育基放入放入3737恒温箱中培育恒温箱中培育12h12h24h24h后，后，察看并记录察看并记录三三.菌种的保

16、藏：菌种的保藏：1.1.暂时保藏：暂时保藏：试管固体斜面培育基上试管固体斜面培育基上442.2.长期保管：长期保管：菌种易被污染、变异菌种易被污染、变异甘油管藏甘油管藏1ml1ml甘油甘油1ml1ml菌液菌液2020编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml例例3 3右表是某微生物培右表是某微生物培育基成分，请据此回答：育基成分，请据此回答

17、：1 1右表培育基可培育右表培育基可培育的微生物类型的微生物类型是是 。2 2假设不慎将过量假设不慎将过量NaClNaCl参与培育基中。参与培育基中。如不想浪费此培育基，如不想浪费此培育基，可再参与可再参与 .提示：金黄色葡萄球提示：金黄色葡萄球菌具耐盐性菌具耐盐性自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 3 3假设除去成分假设除去成分，参与，参与CH2OCH2O，该培育基可用于培该培育基可用于培育育 。4 4表中营养成分表中营养成分共有共有 类。类。5 5不论何种培育不论何种培育基，在各种成分都溶基，在各种成分都溶化后分装前，要进展化后分装前，要进展的是的是 。固氮微生物固氮微生物 3

18、 调整调整pH pH 编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml6 6右表中各成右表中各成分分量确定的原那分分量确定的原那么么是是 。7 7假设右表培假设右表培育基用于菌种鉴定，育基用于菌种鉴定，应该添加的成应该添加的成分分 。依微生物的生长依微生物的生长需求确定需求确定 琼脂或凝固剂琼脂或凝固剂 编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml