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1、实验 16 花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。一、花粉萌发测定法【原理】正常的成熟花粉粒具有较强的活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观察计算其萌发率，以确定其活力。【器材与用具】载玻片；显微镜；玻棒；恒温箱；培养皿；滤纸。【试剂】培养基：10%蔗糖，10mg/L 硼酸，0.5%的琼脂。称 10g 蔗糖、lmg 硼酸、0.5g 琼脂与 90ml 水放入烧杯中，在 100C 水浴中熔化，冷却后加水至 100ml备用。
2、【方法】1.将培养基熔化后，用玻棒蘸少许，涂布在载玻片上，放入垫有湿润试纸的培养皿中，保湿备用。2.采集丝瓜、南瓜或其他葫芦科植物刚开放或将要开放的成熟花朵，将花粉洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在 25C 左右的恒温箱（或室温 20C 条件下）中孵育，510min 后在显微镜下检查 5 个视野，统计其萌发率。【注意事项】1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度,离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适
3、用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。二、碘-碘化钾染色测定法【原理】多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I-KI 溶液可将其染2成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I-KI 溶液2染色呈黄褐色。因此，可用 I-KI 溶液染色来测定花粉活力。2【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。【试剂】I-KI 溶液：取 2gKI 溶于 510ml 蒸馏水中，加入 1gI，待完全溶解22后，再加蒸镏水 300ml。贮于棕色瓶中备用。【方法】采集水稻、小麦或玉米可育和不育植株的成熟花药，取一花药于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子将花药捣
4、碎，使花粉粒释放，再加 12 滴 I-KI 溶液，2盖上盖玻片，在显微镜下观察。凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。观察 23 张片子，每片取 5 个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。【注意事项】此法不能准确表示花粉的活力，也不适用于研究某一处理对花粉活力的影响。因为三核期退化的花粉已有淀粉积累，遇碘呈蓝色反应。另外，含有淀粉而被杀死的花粉粒遇 I-KI 也呈蓝色。2三、氯化三苯基四氮唑（TTC）法【原理】具有活力的花粉呼吸作用较强，其产生的 NADH 或 NADPH 可将无色的 TTC22（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）还原成红色的 TT
5、F（三苯基甲）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC 的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC 后的颜色变化判断花粉的生活力。【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。【试剂】0.5%TTC 溶液：称取 0.5gTTC 放入烧杯中，加入少许 95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至 100ml。溶液避光保存，若发红时，则不能再用。【方法】采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加 12 滴 0.5%TTC 溶液,搅匀后盖上盖玻片，置 35C 恒温箱中，1015min 后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。观察 23 张片子，每片取 5 个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
花粉活力测定的3种方法
