电穿孔SCIENTZ-2C说明书

《电穿孔SCIENTZ-2C说明书》由会员分享，可在线阅读，更多相关《电穿孔SCIENTZ-2C说明书（9页珍藏版）》请在装配图网上搜索。

1、IZ基因导入仪使用说明书宁波新芝生物科技股份有限公司地址：宁波市科技园区木槿路65号 31503电话：7 871399传真：3 Htt/: Email:zhSCNZC基因导入仪使用说明书一、概述高压脉冲基因导入仪，广泛用于植物、动物和各种微生物的各类细胞电穿孔，可以进行细胞杂交、细胞融合，基因导入的研究。本系统结构紧凑，采用电脑（CPU) 控制， 使用方便，安全可靠。注意:1。本仪器为高压装置，使用仪器前请仔细阅读说明书，必须按说明书方法安装和使用。 。在各项准备工作完成后再开机，使用完后须及时关机, 避免长时间空开;充完电后，应及时进行导入操作或者放电，避免长时间处于充电状态。 3。防止液体

2、溢出洒在仪器上。二、原理.仪器的组成本仪器由CIENZ2C基因导入仪主机和基因导入杯及专用连接线等组成。电路构成由控制电源、高压电源、高压整流、储能电容(有高压电容和低压电容）、并接电阻、充放电回路、CPU控制、显示电路以及导入杯（溶池)等部分组成。电子开关电子开关如图： 高压电源 高压整流 电子开关 高压储能电容 储能电路 放电回路 导入杯高压储能电容电源 分压取样 PU控制电路 并接电阻选择 控制电源 CU控制电路显示电路 2。工作原理导入杯（溶池)内放置经过适当处理的细胞溶液（含基因）,接入仪器的高压脉冲输出端,选择适当的电能量(）：由储能电容和储能电压的平方乘积确定），选择适当的放电阻

3、抗（以RC放电时间常数作参考）以瞬间放电（指数式衰减）的形式可逆击穿细胞壁,达到基因导入细胞之目的。 三、技术参数1、储能电容A。高压储能电容：1F、5、5F以及它们的组合如6F、26、30F和1F共七档，自由设置;B。低压储能电容:25、F、100F、0F、0、80以及它们的组合如125、10F、175F、200F -直至175F共6档自由设置。最小25F，以5F为步长递进；2、储能电压A。使用高压储能电容时,储能电压可从0120V,自由设置，精度为1V;B.使用低压储能电容时，储能电压可从10V400V，自由设置,精度为V；3、放电并接电阻：5(固定)、0、100、200、400、80和以

4、及它们的组合如50、100、50 直至60共32档，自由设置。最小0最大160， 以0步进.另有无穷大档可供选择.4、使用电源：单相220V，5HZ，10W。静态R放电时间常数(RC理论值,忽略细胞溶液阻抗)以下测试条件(低压：300V,高压：20V）R（ms）R(）C（mf）15.025.0020040060800000150 0.05025.2551020005075 1000.100。2.2006080110 200.20100204081260000 000。30.575306121824004 4。02。010.480160403204000 500.502.515510030040

5、0505060060305060120243604800090700。703175742804205070105000.804。0008016032080681200001005.025。10000400080010001500101。73751530900115022 (注：在高压放电时，实际的RC常数要远小于上表的参考值）四、仪器面板、后板结构及功能1。前面板后面板电源插座五. 参数设置步骤（一）开机后液晶L显示0，此时按“C”键进入设置界面（如下图所示）图5。 按“C后进入设置界面(二）参数设置、电压参数设定(） a.进入设置界面后，按电压设置键“U,进入电压设置窗口（如下图所示)， 可

6、以输入所需的电压值。 b。按“”键确认（参数被确认后，电压数组中会出现“。”）.如输错可按“0按钮清除数据后，重新输入再次按“P”键确认即可；或者多次按“0”键，直至显示区域只显示;图5.2_ 设置电压第二组参数200V，按“PT调用c.在电压设置界面中，可按“”键来切换预存参数（U1到U5共组参数)，按“PT键即可调用（参数被调用后，电压数组中会出现“。）； 被调用的该组参数，经过导入动作后,会覆盖原先改组的参数,下次只需调用该组参数，而无需再此输入2、电阻参数设置（R） 按“R”键进入电阻参数设置，设置基本设置方法，跟电压设置方法一样，设置范围为501600欧姆(每5欧步进）电阻也15五组

7、参数，也可保存和调用预存参数；、电容参数设置（） 按“C键进入电容参数设置，设置方法同上，电容设置分为高压储能电容和低压储能电容两种（具体设置方法再下文设定数据的范围介绍）（三）、设定数据的范围电压、电容和电阻三个参数的设定范围各不相同，下面分别作说明。1、电压:设定范围为52500伏，辨别率为1伏。低压5040，高压401-2500V.2、电容:分为高低压两档，高压分为：1，5,6，25,2，3，31F共七档。低压从25F开始到575F,每25F步进一档,且只有当设定的数值达到或超过该档时才会有效。3、 电阻：电阻的设定范围为01600欧姆(每50欧姆步进一档） 另有无穷大档(设即为该档）.

8、 设置时，只有设定的数值达到或超过该档时才会有效。（四）导入操作4、电压（)电阻（R）电容（C）设置完后,就可以按“RD键进行储能(过程如下图所示） 图5。22 存能过程(从1到99%,当到达即表示储能完成）、储能完成（界面显示“L 9”）,按“D”即进行导入动作6、导入动作后,界面会显示本次导入时间(时间常数），如下图所示图.2_ 时间常数显示5、导入动作后，需按“U”键返回到设置状态中，来进行新的设置;如无需根改参数，直按“RD”键，仪器按前一次设置进行储能注意事项:1、每一个数字键按下都有“嘀”的声音提示，如没有声音则表示按钮并未完全按下,输入无效。2、如听到“嘀”、“嘀”两声提示音则表

9、示输入数据超出范围需重新输入(在设定电容、电阻参数时).六、使用注意事项1、仪器若长期未使用在重新使用时，应先低压充电、放电,逐步升高电压，直至额定值。在仪器使用时，应先通电予热0-15mi，设置数据,进行几次充电放电空操作后，才可正式进行导入操作。2、仪器的输出连接线、接线座等处在放电时有高电压、大电流存在。故在使用时，应避免与人体、导体（如液体）或易受干扰的电器等接触、靠近。3、 仪器内有高电压(200V)存在，非专业人员，不得打开检修。如有故障请与我单位有关技术人员联系.4、 实验中如果出现溶池发生弧光，溶液爆溅出来说明电压设置太高或电容太大，应相应降低电压、电容的设置值。七. 新芝基因

10、导入仪实验参考技术参数品种电压电容电阻导入盒转化率反馈用户名酵母1200-5005F0-4002mm。-。210cfu/ugDNA上海肺科医院大肠杆菌1250F400001m0718cug DNA清华大学大肠杆菌100V0F501mm2500cu/ug DN清华大学大肠杆菌1500V2500mm500c/ugDNA左右解放军总医院羊细胞0V50F5004m10cfu/ug 中科院发育所毕赤酵母102F4002mm1.8x10cug DN华东师范大学枯草芽孢杆菌1250V2F002mm02cfu/ugDN华东师范大学（因各单位实验条件不尽相同,以上实验参数仅供参考)八 操作过程1、按上图所示，连

11、接好仪器电源、导入盒(接输出插孔）等。 2、将配有相应细胞液的导入杯装入导入盒内（细胞液一般用双重去离子水价甘露醇或葡萄糖等，浓度为1020,电阻在3千欧左右)。3、 打开电源开关，仪器通电,显示器有显示。按“参数设置步骤”的方法。设置实验所需的技术参数时，应先按储能电容（C)再按储能电压(）最后按放电电阻(R)的具体数值，然后按键按一下即可，当屏幕中充电进度显示“9”时，按RD键进行导入，听到锋鸣器响声后，此时显示屏显示的是时间常数。电脑便进行储能电压, 储能电容，放电电阻的选取及对所选定的储能电容充电,当充电电压稳定到所设置的电压值后， 按D键进行导入,立即向输出端（包括导入盒和所选定的放

12、电电阻的并联电路）释放高压脉冲,进行有一定时间常数的放电过程，即电击穿、融合、导入过程.(选择储能电压值、电容值和放电电阻值,是为了选取恰当的电能量和放电（R)时间常数，以期获得刚好使细胞壁可逆击穿，基因导入融合的最佳效果。这是十分重要的。因为影响因素很多，要想获得高的转换率，必须依靠自己长期实践经验的积累。）4、 若需二次放电，只要按U，然后再次按RD键即可。若要修改参数，则重复上述（3）的操作过程，可获得多次放电效果。5、 若停止使用，可关电源开关，切断输入电源，取出导入杯。为安全起见,应在关断电源后，再取出为妥.九、大肠杆菌基因导入（参考资料) 用基因导入仪进行基因转化很有效。用生长旺盛

13、的细胞,可使1ug质粒DNA材料E coi单菌落LB培养基10冰冷的甘油(丙三醇)Sietz-2C基因导入仪含抗菌素的LB平板冰水SO培养基（。5%酵母提取物,2蛋白胨，10mmol/LNacl，20mmo/gS，2mmol/L Kl，20o/L葡萄糖，0mml/L MC）方法（)将Eci单菌落接种于5lL培养基中，在37下振荡培养过夜.取2。5m新鲜培养液倒入500mlLB培养基(用2L三角瓶）中，在37下振荡(00rpm）培养至细胞对数生长期（D60为0.5-6)。（2） 将培养物在冰水中放置3分钟使细胞停止生长，然后倒入预冷的离心管中，在4下500g离心10分钟,弃去上清液。（3） 用1

14、00预冷1甘油重悬细胞，4 500离心1分钟，弃去上清液。（4） 重复步骤(3)。（5） 用-10ml预冷10甘油重悬细胞,0000l/管分装于无菌的1。5ml eppndor管中,保存于-80。()将基因导入仪的参数调至25Kv，2uF，脉冲阻抗控制在200-000欧姆。（7)加入不大于5l质粒A（5pg-0.ug）和步骤（）处理的新鲜细胞或冰冻细胞（融化后置冰上)混合(增加NA样品体积会盐浓度加大，易产生电弧，转化率下降)。将混合液转到预冷的导入杯中，抹去杯外冰水后放入样品槽中。（8） 释放电脉冲,取出导入杯立即加入1mSOC培养基，并用吸管将菌液转至无菌小管中。在7下，缓慢振荡培养30-

15、分钟。（9） 将上述转化细胞的培养液涂于抗菌素的L平板上。注意（1）该法的关键是用适当的电压、电容值和适当时间常数的电脉冲.用对数生长的细胞进行的转化效率比稳定生长期的细胞高。（2） 该法的优点是:转化效率高。尤其对一些较大的质粒，采用该法可获得较好的结果。实践已经证明，当质粒达14kb时,转化效率不会产生明显下降.（3） 释放电脉冲,取出导入杯立即加入1mlO培养基,并用吸管将菌液转至无菌的小管中。在3下，缓慢振荡培养060分钟.（4） 将上述转化细胞的培养液涂于抗菌素的LB平板上。实验结果（使用Scietz2C基因导入仪） 材料： PUC1质粒1UL0.1UD 转化率 BL 21 2-31

16、 JM 09 2310 H 5a 1 B 101 310 应用举例条件：导入杯m （一次性使用） 电压 .v 电容 2u 电阻400-1000UC 1质粒转化率(BL21菌株） 电 阻 00 800 1000 转化率 110 。510 2310 十、装 箱 清 单1、CIENTZ-C基因导入仪主机 1台2、保险管 只3、质量保证书（保修卡） 1份4、合格证 1份5、使用说明书 份、2mm基因导入盒(进口） 1只7、电源线及连接线 各副Sntz-2基因导入仪简易实验步骤1、收集细胞:用胰酶消化细胞，将细胞培养液吸入到5ml离心管中，分为管，900rpm 5min，弃其上清.、用不含血清的培养液洗一次，弃上清.3、各取5ul质粒Red 分别加入到0u电缓冲液中，充分混匀.、分别各用10u混有质粒Red的电转缓冲液充分溶解细胞，转入2m电转导入杯中。5、将电转导入杯放入样品槽中，释放电脉冲。6、立即取出电击杯，分别用一次性吸管将混和液转移至加有DEM培养基的一次性细胞培养瓶中，放入细胞培养箱中培养。备注:为了使实验达到更好的效果可以选购晶赛公司的电转缓冲液.例：做23细胞，设电阻为00,电容为500F,电压为2V,成活率较高。文中如有不足，请您指教！9 / 9