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1、BCA蛋白浓度测定Pierce BCA Protein Assay Kit（试剂盒室温保存）1,准备BSA标准品按Table 1配制一系列的蛋白标准品.原液（stock）:取出一个ample（内含2mg/mL的白蛋白标准品（此量足够3个replication)Table Preparation of Diluted Albmuiii (BSA) StandardsDili血 11 Scheme for Standard Test Tube Protocol aiidMicropIfite Procetae (Workins Range 二 20-2.000 peiiiliVhlVdiimp o
2、f DihieutVoh 皿 制 d Som 舵 of BSAFinM BSA Conreiih ationA0300 ul of Stock2.00A ug/mlB125111375 ul of SlockL5fl0 阐mlC325 pl325 ill of Stock1.000 ug.mlD175115 pl of vial B dilution75D ug.mlE325 4325 iilofvialC dilution500 闸mlF325 pl325 pl of nal E dilution250 ug.mlG325 pl325 pil of vial F dilution125 ug
3、.mlH400 pl100 ulofvialGdil 血 u25 pg/mlI400 pl00 阐ml 二 Blank2.准备 BCA 工作液(Working Reagent,WR)（1）用公式计算总工作液量（标准品数+待测样品数）*（复制数）*（每个工作液的量）二总的需要的工作液的量例子：3个待测样品，每个样品2个复制所需的工作液量(9个标准品+3个待测样品)*(2个复制数)*(2ml)=48ml工作液Note:试管法:每个试管需2ml工作液微孔板:每个孔需200ul工作液(例子中需共4.8ml)(2) BCA试剂A:B=50:1配制适量BCA工作液，充分混匀。对于上面的例子，试管法需要50
4、ml BCA A液+1ml BCA B液微孔板法需5ml A液 和1mlB液.B液加到A液中时，迅速浑浊,但是通过混匀立即变成清澈 绿色的工作液.工作液 在密闭室温下可以保存数天.3.微孔板步骤(样品与工作液比例=1:8).标准液和样品各25ul加入微孔板中Note:若样品有限,可各加10ul(样品与工作液比例=1:20).每孔加200ul的工作液并且充分震荡30s。(3) .在37度孵育样品30min，或室温2h。(4) .冷却至室温。(5) .在酶标仪中测量562nm时的吸光值(6) .绘制标准曲线，再用标准曲线判断出样品的蛋白浓度。Note:540-590nm的波长均可BCA Protein AssayProtein Concentration in iigAnlFigure 1: Typical color response curves for BSA and BGG using the Standard Test TubeProtocol (37C/30-minute incubation).如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合!
BCA蛋白浓度测定
