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1、实验1实验室环境和人体表面的微生物检查一、实验目的1、证实实验室环境和人体表面存在微生物。2、观察不同类群微生物的菌落形态特征。3、比较不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。4、体会无菌操作的重要性。二、基本原理通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个聚集在一起的肉眼可见的菌落。平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在37C温度下培养，12天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。三、实验
2、器材1、培养基牛肉膏蛋白胨培养基2、溶液和试剂无菌水3、仪器和其他用品平板，试管，灭菌棉签(装在试管内)，试管架，漏斗，止水夹，煤气灯或酒精灯，记号笔，接种环，标签纸，废液缸等。四、实验操作1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备：(1) 称量：准确称取牛肉膏1.8克、蛋白胨6.0克、Nacl3.0克放入烧杯中。(2) 熔化：在上述烧杯中加入少于所需的水量(所需水量为600ml)，用玻璃棒搅匀，补充水到所需的总体积600ml。(3) 调pH：用1mol/LNaOH和1mol/LHCI进行调节，直至溶液pH达到7.07.2。(4) 分装：将其中300ml溶液装入500ml三角瓶中，向三角瓶中加入6.0克琼脂
3、，向烧杯剩余液体中加入6.0克琼脂，在石棉网上加热烧杯，使琼脂溶解，将烧杯中溶液分装到10支试管中，每支试管中加入体积为试管总体积的1/5左右。(5)加塞：在三角瓶口上塞上棉塞，防止外界微生物进入造成污染。(6) 包扎：加塞后，在棉塞外包一层牛皮纸，将全部试管用麻绳捆好(还有一支装有无菌水的试管)，同样的方法把三角瓶包好，扎好。用记号笔注明培养及名称、组别、配制日期。(7) 灭菌：将上述培养基以0.1MPa，121C，90min高压蒸汽灭菌。(8) 搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷却至50C左右，将试管口端搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管的总长的一般为宜。2、倒平板：
4、点燃酒精灯，右手握住三角瓶底部，用左手小指将棉塞夹住，拔出，随之将瓶口边缘在火焰上过一下，杀死粘在瓶口外的杂菌。左手拿起一套平皿，用无名指和小指托住平皿底部，用中指和大拇指夹住皿盖并开启一缝，恰好能让三角瓶伸入，随后倒出培养基。倒入1520ml培养基，铺满整个皿底。盖上皿盖，置水平位置待凝。重复上述操作，共倒平皿18个。3、微生物采集：(1) 空气将6个平板在实验室环境中移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中。5min后，将其中三个盖上皿盖，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源、暴露时间和编号，10min后，将剩余三个盖上皿盖，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源、暴露时间和编号。(2)
5、桌面用无菌水湿润棉签，用棉签在实验台面擦拭约2cm2的范围，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源和编号。(3) 洗手前用无菌水湿润棉签，用棉签在手表面擦拭，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源和编号。(4) 洗手后用肥皂和刷子用力刷手，在水流中冲洗干净，干燥后用无菌水湿润棉签，用棉签在手表面擦拭，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖
6、。共做三套相同平皿，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源和编号。(5) 硬币用无菌水湿润棉签，用棉签擦拭硬币表面，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源和编号。4、微生物培养：将每一组(3个)中编号为1的平板放在28环境培养箱中培养，将编号为2和3的平板放在37C的环境培养箱中培养，时间为一周。5、菌落特征描述方法：(a) 大小：大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、小的标准，或由教师指出一个大小范围。(b) 颜色：黄色、金黄色、白色、乳白色、灰色、红色、
7、粉红色等。(c) 干湿：干燥、湿润、粘稠。(d) 形态:圆形、不规则等。(e) 边缘：整齐、不整齐等。(f) 表面：高度扁平、隆起、凹下。五、实验报告1、结果（1）菌落描述样品、样品、样品样品样品来源菌落描述菌落数记录人1-4-空10-3-37C大、白、干、圆、整齐、扁平3李龙1-4-空5-2-37C小、黄、干、圆、整齐、扁平4商倩倩1-4-空10-3-37C中、淡黄、湿、圆、整齐、隆起1泮力菁1-4-空5-2-37C大、乳白、湿、不规则、锯齿、扁平1汤艳楠1-4-手后-3-37C小、白、湿、圆、整齐、外凸内凹1泮力菁1-4-手前-3-37C小、乳白、湿、不规则、锯齿、隆起1吴彤（2）比较1-
8、4-空10-37C1-4-空5-37C1-4-洗手前一28C1-4-洗手后一28C样品来源菌落数量（总数）种类（形态不一致）1-4-空10-37C2261-4-空5-37C1561-4-洗手前一28C1241-4-洗手后一28C96（3）相似菌样品来源菌落数菌落特征第1组1-4-空5-2-37C4小、黄、干、圆、整齐、扁平1-4-空5-3-37C1第2组1-4-手前-2-37C1小、乳白、湿、不规则、锯齿、隆起1-4-手前-1-28C12、思考题(1) 列举23类微生物，说明它们在本实验条件下(肉膏蛋白胨琼脂平板，37C)不能生长。答：病毒，因为病毒必须寄生在其他活生物体内；厌氧细菌，肉膏蛋白
9、胨琼脂培养基不是无氧环境;极端环境下生存的细菌，因为肉膏蛋白胨培养基不能满足它们对环境的需求。(2) 比较各种来源的样品，哪一种菌落数和菌落类型最多，为什么？答：空气中的菌落数和菌落类型最多。因为细菌体积小、重量轻，很容易就悬浮于空气中，并且由于空气中含有很多的微粒，细菌往往会结合微粒形成泡团，这种泡团又可以从空气悬浮物中摄取水分和营养，使得细菌可以长期生存下去。(3) 比较洗手前后菌落数的变化，谈谈你的体会。洗手后仍有少量细菌，你认为是什么原因？答：洗手后细菌数量明显减少。人的一只手大约沾附有40多万个细菌，两只手发挥着无法替代的拿取接送等作用。被污染的手拿取食品去吃，病菌都是经过手接送进口中去的，可以说是“病经手入”。所以我们一定要经常洗手。因为自来水、肥皂和刷子上都会带有细菌，所以洗手后仍有少量细菌。(4) 完成本实验后，你是否已体会到我们生活在微生物的包围中？你如何体会“微生物既是我们的朋友又是我们的敌人？答：我已体会到我们生活在微生物的包围中，微生物给我们的生活带来了很多的好处，比如说，蒸馒头需要酵母菌、制酸奶需要乳酸菌、产生沼气需要沼气杆菌；同时微生物也给我们的生活带来了很多麻烦，一些微生物可以使人患病，比如炭疽杆菌、结核分枝杆菌、SARS病毒、艾滋病毒等等。所以说微生物既是我们的朋友又是我们的敌人。
实验一实验室环境和人体表面的微生物检查
