微生物的实验室培养(人教版)

《微生物的实验室培养(人教版)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物的实验室培养(人教版)（88页珍藏版）》请在装配图网上搜索。

1、专题1 传统发酵技术的应用课题 1 果酒的和果醋的制作课题 2 腐乳的制作课题 3 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 专题专题2 2 微生物的培养与应用微生物的培养与应用 课题课题1 1 微生物的实验室培养微生物的实验室培养需要为微生物提供合适的营养和环境条件需要为微生物提供合适的营养和环境条件 需要无菌操作需要无菌操作 课题目标：课题目标：1.1.了解了解有关微生物种类、培养方法和培养基有关微生物种类、培养方法和培养基的基础知识。的基础知识。2 2进行进行无菌技术的操作。无菌技术的操作。3 3进行微生物的培养。进行微生物的培养。生物技术实践：生物技术实践：微生物培养与利用：微生物培养与利用：利用微

2、生物进行发酵生产特定的产物。利用微生物进行发酵生产特定的产物。生物学研究中的科学思想和一般方法：生物学研究中的科学思想和一般方法：设计可行的实验方案和实验装置设计可行的实验方案和实验装置 对简单的实验方案做出恰当的评价和修订对简单的实验方案做出恰当的评价和修订考试说明考试说明从近年情况看，这部分知识在各区的模从近年情况看，这部分知识在各区的模拟考查中多次涉及！尤其是关于拟考查中多次涉及！尤其是关于灭菌方法灭菌方法和和接种方法接种方法的选择是高频考点的选择是高频考点微生物是一切肉眼看不见微生物是一切肉眼看不见（但有些微生（但有些微生物是可以看见的，像属于真菌的蘑菇、物是可以看见的，像属于真菌的蘑

3、菇、灵芝等。）灵芝等。）或看不清的微小生物，个体或看不清的微小生物，个体微小（微小（一般一般0.1mm 0.1mm），结构简单，结构简单（有有单细胞的，简单多细胞的，非细胞的）单细胞的，简单多细胞的，非细胞的），通常要用光学显微镜和电子显微镜才能通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物，统称为微生物。看清楚的生物，统称为微生物。微生物的概念：微生物的概念：知识梳理：细菌知识梳理：细菌大肠杆菌大肠杆菌淋病球菌淋病球菌肉毒梭菌肉毒梭菌霍乱弧菌霍乱弧菌（单单细胞细胞原核原核生物）生物）1.1.细菌的形态细菌的形态（球、球、杆、杆、弧、弧、旋旋）知识梳理：细菌知识梳理：细菌 芽孢：芽孢：某些细菌

4、在其生长发育后期，在细胞内形某些细菌在其生长发育后期，在细胞内形成一个圆形或椭圆形、成一个圆形或椭圆形、厚壁厚壁、含水量极低含水量极低、抗逆抗逆性极强性极强的的休眠体休眠体，称为芽孢，称为芽孢(内生孢子）。内生孢子）。能够使能够使细菌度过不良的环境细菌度过不良的环境。每一个细菌形成一个芽孢，。每一个细菌形成一个芽孢，所以其所以其没有没有繁殖功能。繁殖功能。孢子：孢子：细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖或休眠作用的种有繁殖或休眠作用的生殖细胞生殖细胞。能直接发育成。能直接发育成新个体。新个体。知识梳理：细菌知识梳理：细菌2.2.细菌的结构细菌的结构

5、芽孢芽孢3.3.菌落菌落（高三考查较多）（高三考查较多）（1 1）定义：是一个细胞繁殖而来的肉眼可见）定义：是一个细胞繁殖而来的肉眼可见子细胞群体子细胞群体。P18P18举例：有荚膜细菌：菌落光滑。举例：有荚膜细菌：菌落光滑。S S型型 无荚膜细菌：菌落粗糙。无荚膜细菌：菌落粗糙。R R型型（2 2）特征：表现在菌落的）特征：表现在菌落的大小、形状、光泽大小、形状、光泽度、颜色、硬度透明度度、颜色、硬度透明度等方面。等方面。（3 3）功能：菌落特征是）功能：菌落特征是鉴别菌种鉴别菌种的重要依据的重要依据 知识梳理：细菌知识梳理：细菌(二二)微生物培养基微生物培养基1.1.培养基概念：培养基概念

6、：人们按照人们按照微生物微生物对对营养物质营养物质的的不同需求不同需求，配制出供其配制出供其生长繁殖生长繁殖的的营养基质营养基质。2.2.培养基的成分：培养基的成分：微生物的元素组成：微生物的元素组成：C C、H H、O O、N N、P P、S S微生物生长需要的物质微生物生长需要的物质营养要素营养要素(一般含有碳源、氮源、无机盐和水等四类一般含有碳源、氮源、无机盐和水等四类)(二二)微生物培养基微生物培养基2.2.培养基的成分：培养基的成分：（1 1）碳源）碳源n概念：能为微生物提供所需碳元素的营养概念：能为微生物提供所需碳元素的营养 物质，需要量物质，需要量最大最大。n种类：种类：无机碳源

7、无机碳源 COCO2 2、NaHCONaHCO3 3 有机碳源有机碳源(有机物有机物)糖类糖类、脂肪酸等、脂肪酸等 有机物；有机物；(天然成分混合物天然成分混合物)花生粉饼花生粉饼 石油等石油等l常用的碳源：常用的碳源：糖类（尤其是糖类（尤其是葡萄糖葡萄糖）(二二)微生物培养基微生物培养基2.2.培养基的成分：培养基的成分：（1 1）碳源）碳源n功能：功能：构成微生物的细胞质和一些代谢产物；构成微生物的细胞质和一些代谢产物；异养微生物异养微生物主要能源物质主要能源物质u思考：思考：大肠杆菌，硝化细菌，蓝细菌，乳酸菌大肠杆菌，硝化细菌，蓝细菌，乳酸菌分别选用哪种碳源？分别选用哪种碳源？糖类，二氧

8、化碳，二氧化碳，糖类糖类，二氧化碳，二氧化碳，糖类(二二)微生物培养基微生物培养基2.2.培养基的成分：培养基的成分：（2 2）氮源）氮源n概念：能为微生物提供所需氮元素的营养物质概念：能为微生物提供所需氮元素的营养物质n种类：种类：无机氮源：无机氮源：N N2 2、NHNH3 3、铵盐、硝酸盐；铵盐、硝酸盐；有机氮源：有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸。氨基酸。n功能：合成功能：合成蛋白质蛋白质、核酸核酸以及含氮的代谢产物以及含氮的代谢产物（“含含C C、H H、O O、N”N”的有机物既可以作为的有机物既可以作为碳源碳源，又可以作为又可以作为氮源氮源，如氨基酸等），如氨基酸等

9、）p培养根瘤菌、大肠杆菌、硝化细菌时分培养根瘤菌、大肠杆菌、硝化细菌时分别需要哪一类氮源？别需要哪一类氮源？u思考：思考：N N2 2，铵盐或硝酸盐、牛肉膏或蛋白胨等，铵盐或硝酸盐、牛肉膏或蛋白胨等，NHNH3 3(二二)微生物培养基微生物培养基2.2.培养基的成分：培养基的成分：u注意：关于能源物质注意：关于能源物质自养型：自养型：光能自养：太阳光光能自养：太阳光 化能自养：无机物（氧化放能）化能自养：无机物（氧化放能）【例例】硝化细菌硝化细菌 氨的氧化氨的氧化异养型：异养型：有机物（氧化分解放能）有机物（氧化分解放能）（3 3）水）水（4 4）无机盐）无机盐u思考思考p若乳酸菌、根瘤菌、固

10、氮蓝藻、硝化细菌若乳酸菌、根瘤菌、固氮蓝藻、硝化细菌混合在一起，我们配制什么样的培养基可混合在一起，我们配制什么样的培养基可以将三种微生物分离？以将三种微生物分离？碳源碳源氮源氮源能源能源(物质物质)乳酸菌乳酸菌根瘤菌根瘤菌固氮蓝藻固氮蓝藻硝化细菌硝化细菌光能光能糖类等含糖类等含碳有机物碳有机物N N2 2有机物有机物 COCO2 2铵盐、硝酸盐、铵盐、硝酸盐、有机氮有机氮糖类等含糖类等含碳有机物碳有机物有机物有机物氨氨氨氨COCO2 2N N2 2(二二)微生物培养基微生物培养基3.3.满足微生物生长的条件：满足微生物生长的条件：培养基除培养基除要提供上述几种主要营养物质外，要提供上述几种主

11、要营养物质外，还还满足微生物生长的满足微生物生长的 pH pH、特殊营养物质特殊营养物质 和和氧气氧气 等要求。等要求。pHpH：真菌：真菌 5.06.0 细菌细菌 6.57.5 放线菌放线菌 7.58.5(二二)微生物培养基微生物培养基3.3.满足微生物生长的条件：满足微生物生长的条件：特殊营养物质特殊营养物质 n概念：概念：某些微生物正常生长代谢过程中必某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子须从培养基中吸收的微量有机小分子；n添加原因添加原因：微生物自身：微生物自身缺乏合成这些物质缺乏合成这些物质的酶的酶或或合成能力有限合成能力有限n种类：种类：各种各种维生素维生素

12、、氨基酸氨基酸、碱基、核苷酸碱基、核苷酸等等n例如：培养乳酸菌时需要添加例如：培养乳酸菌时需要添加维生素维生素生长因子生长因子(二二)微生物培养基微生物培养基4.4.培养基的配制培养基的配制原则：原则：（1 1）目的明确选材料（代谢特征、用途）目的明确选材料（代谢特征、用途）（2 2）营养协调（）营养协调（注意营养物质的注意营养物质的浓度浓度和和比例比例）（3 3）pHpH适宜适宜(二二)微生物培养基微生物培养基（1 1）按物理性质划分：）按物理性质划分：5.5.培养基的种类：培养基的种类：u（固体、半固体培养基需添加（固体、半固体培养基需添加凝固剂凝固剂，如如琼脂琼脂；两者的差别是添加量的；

13、两者的差别是添加量的多、少多、少）液体培养基液体培养基半固体半固体培养基培养基固体培养基固体培养基（用于工业生产）（用于工业生产）（用于观察微生物的运动、（用于观察微生物的运动、鉴定菌种）鉴定菌种）（用于微生物的（用于微生物的分离、计数分离、计数）微生物在其表面生长可形成菌落微生物在其表面生长可形成菌落(二二)微生物培养基微生物培养基5.5.培养基的种类：培养基的种类：（2 2）按化学成分划分：）按化学成分划分：合成合成培养基培养基 天然天然培养基培养基用化学成分已知的化合物用化学成分已知的化合物配制配制含化学成分不明的含化学成分不明的天然物天然物质质，如酵母膏、牛肉膏，如酵母膏、牛肉膏前者前

14、者常用于实验室中对微生物的常用于实验室中对微生物的分类、鉴分类、鉴别；别；后者后者常用于常用于大规模工业生产大规模工业生产。进行选择培养可以进行选择培养可以增增加所需目的菌的浓度加所需目的菌的浓度(二二)微生物培养基微生物培养基5.5.培养基的种类：培养基的种类：选择培养基：选择培养基：鉴别培养基：鉴别培养基：加入加入某化学物质某化学物质，以，以抑制抑制不需要的微生物不需要的微生物的生长，的生长，促进促进所需要微生物的生长。所需要微生物的生长。加入某种加入某种指示剂或化学药品指示剂或化学药品配制而成的，配制而成的，用以用以鉴定鉴定不同种类的微生物。特定菌种显色，不同种类的微生物。特定菌种显色，

15、其他菌种其他菌种不受抑制不受抑制、但不显色。、但不显色。（3 3）按用途划分：）按用途划分：（作用：（作用：分离微生物、分离微生物、进行选择培养进行选择培养）（作用：（作用：鉴别微生物鉴别微生物）青霉素青霉素抗青霉素基因抗青霉素基因选择培养基选择培养基在基因工程中，对导入重组质粒的大肠杆菌的筛选在基因工程中，对导入重组质粒的大肠杆菌的筛选伊红美蓝伊红美蓝鉴别培养基鉴别培养基大肠杆菌大肠杆菌在在伊红美蓝伊红美蓝培养基上菌落呈现培养基上菌落呈现黑色黑色 u常见的选择培养基举例：常见的选择培养基举例：（1 1）添加：）添加：青霉素青霉素 ：抑制细菌、放线菌抑制细菌、放线菌保留（分离）真菌，如霉菌、酵

16、母菌保留（分离）真菌，如霉菌、酵母菌高浓度高浓度NaClNaCl：抑制多种细菌，：抑制多种细菌，分离分离金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(二二)微生物培养基微生物培养基5.5.培养基的种类：培养基的种类：（3 3）按用途划分：）按用途划分：u常见的选择培养基举例：常见的选择培养基举例：（2 2）缺少：）缺少：培养基培养基缺少有机碳源缺少有机碳源分离分离自养型微生物自养型微生物（利用（利用COCO2 2 ）培养基培养基缺少氮源缺少氮源分离分离固氮微生物固氮微生物（利用（利用N N2 2 ）(二二)微生物培养基微生物培养基5.5.培养基的种类：培养基的种类：（3 3）按用途划分：）按用途划分：划分标准

17、划分标准培养基种类培养基种类特点特点用途用途物理性质物理性质化学成分化学成分天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基用途用途鉴别培养基鉴别培养基培养基的种类培养基的种类不加凝固剂不加凝固剂加凝固剂，如加凝固剂，如琼脂琼脂工业生产工业生产观察微生物的运动、观察微生物的运动、分类鉴定分类鉴定微生物分离、鉴定、微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌活菌计数、保藏菌种种含化学成分不明确的天然物含化学成分不明确的天然物质质工业生产工业生产培养基成分明确培养基成分明确分类、鉴定分类、鉴定在培养基中加入某种化学物在培养基中加入某种化学物质质,以抑制不需要的微生物以抑制不需要的微生物的生长的生长,促进所需要的微生

18、促进所需要的微生物的生长物的生长培养、分离出特培养、分离出特定微生物定微生物在培养基中加入某种指示剂在培养基中加入某种指示剂或化学药品或化学药品,用以鉴别不同用以鉴别不同种类的微生物种类的微生物鉴别不同种类微鉴别不同种类微生物生物选择培养基选择培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基固体培养基固体培养基练习1.1.不能作为异养微生物碳源的是（不能作为异养微生物碳源的是（）A A牛肉膏牛肉膏B B含碳有机物含碳有机物C C石油石油D D含碳无机物含碳无机物2.2.自养型微生物与异养型微生物的培养基的自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是（主要差别是（）A A碳源碳源B B氮源氮

19、源C C无机盐无机盐D D生长因子生长因子解析：解析：自养型微生物与异养型微生物的主要差自养型微生物与异养型微生物的主要差别在于自养型微生物可以利用无机碳，异养型别在于自养型微生物可以利用无机碳，异养型微生物只能以有机碳作为碳源所以两种培养微生物只能以有机碳作为碳源所以两种培养基的主要差别在于碳源基的主要差别在于碳源3.3.下列关于生长因子的说法中，不正确的一下列关于生长因子的说法中，不正确的一项是（项是（）A A是微生物生长不可缺少的微量有机物是微生物生长不可缺少的微量有机物B B是微生物生长不可缺少的微量矿质元素是微生物生长不可缺少的微量矿质元素C C主要包括维生素、氨基酸和碱基等主要包括

20、维生素、氨基酸和碱基等D D一般是酶和核酸的组成成分一般是酶和核酸的组成成分4 4.通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在碳源为纤维素的培养基上，大部分出所需的微生物。在碳源为纤维素的培养基上，大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素，可以抑制细微生物无法生长；在培养基中加入青霉素，可以抑制细菌和放线菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分菌和放线菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出（）别分离出（）大肠杆菌霉菌放线菌纤维素分解菌大肠杆菌霉菌放线菌纤维素分解菌A.A.B.B.C.C.D.D.解析：解析：选选A A。本题

21、考查了微生物分离知识。纤维素分解菌可。本题考查了微生物分离知识。纤维素分解菌可以利用纤维素，大部分微生物却不能；培养基中加入青霉素可以利用纤维素，大部分微生物却不能；培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌，但霉菌能够生长。以抑制细菌和放线菌，但霉菌能够生长。（三）无菌技术（三）无菌技术 获得纯净培养物的关键获得纯净培养物的关键(目的）是目的）是 防止防止外来杂菌的入侵外来杂菌的入侵 。1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌技术泛指无菌技术泛指在培养微生物的操在培养微生物的操作中，所有防止杂作中，所有防止杂菌污染的方法。菌污染的方法。（三）无菌技术（三）无菌技术2.2.无菌技术包括：无菌技术

22、包括：（1 1）对实验操作空间、操作者的衣着和手）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行进行 清洁和消毒清洁和消毒 ；（2 2）将培养器皿、接种用具和培养基等器）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行具进行 灭菌灭菌 ；（3 3）为避免周围微生物污染，实验操作应）为避免周围微生物污染，实验操作应在在 酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近 旁进行；旁进行；（4 4）避免已灭菌处理的材料用具与）避免已灭菌处理的材料用具与 周围物周围物品品 相接触。相接触。u思考思考p无菌技术除了防止培养物被污染外，还具无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有什么目的？有什么目的？P15P15旁栏思考旁栏思考有效避免操作者自身

23、被微生物感染有效避免操作者自身被微生物感染u思考：思考：p消毒和灭菌的区别？哪一个更彻底？消毒和灭菌的区别？哪一个更彻底？p什么时候需要消毒，什么时候需要灭菌？什么时候需要消毒，什么时候需要灭菌？消毒消毒是指使用较为温和的物理或化学方法是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的仅杀死物体表面或内部的部分微生物营养体部分微生物营养体（不包括（不包括芽孢和孢子芽孢和孢子）。）。灭菌灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内是指使用强烈的理化因素杀死物体内外外所有的微生物所有的微生物，包括芽孢和孢子。，包括芽孢和孢子。灭菌灭菌效果更彻底，用于各种效果更彻底，用于各种金属、金属、玻璃器玻璃器具具

24、。消毒消毒用于各种用于各种实验操作空间、操作者的实验操作空间、操作者的衣衣着和手着和手。（三）无菌技术（三）无菌技术2.2.无菌技术包括：无菌技术包括：比比较较项项理化因素的理化因素的作用强度作用强度消灭微生物的消灭微生物的数量数量芽孢和孢子能芽孢和孢子能否被消灭否被消灭消消毒毒较为温和较为温和部分生活状态部分生活状态的微生物的微生物不能不能灭灭菌菌强烈强烈全部微生物全部微生物能能消毒与灭菌的比较消毒与灭菌的比较3.3.消毒方法：消毒方法：煮沸消毒法：煮沸消毒法：巴氏消毒法：巴氏消毒法：化学药剂消毒法化学药剂消毒法:紫外线消毒法：紫外线消毒法：煮沸消毒法：煮沸消毒法：在在100100煮煮沸沸5

25、 56min6min可以杀死微可以杀死微生物细胞和生物细胞和一部分芽孢一部分芽孢。3.3.消毒方法：消毒方法：巴氏消毒法：巴氏消毒法：对于一些不耐高温对于一些不耐高温的液体，如牛奶，的液体，如牛奶，在在70-75 70-75 煮煮30min30min或在或在80 80 煮煮15min15min，可以杀，可以杀死牛奶中的微生物。死牛奶中的微生物。化学药剂消毒法化学药剂消毒法:用用70%70%酒精酒精擦拭双手、用擦拭双手、用氯气氯气消毒水源。消毒水源。紫外线消毒法：紫外线消毒法：表面灭菌和空气表面灭菌和空气灭菌等使用灭菌等使用 紫紫外线外线 灭菌法，灭菌法，所用器械是所用器械是 紫紫外灯外灯 。照

26、射。照射30min30min，可先喷，可先喷洒石炭酸或煤酚洒石炭酸或煤酚皂皂溶液加强消毒溶液加强消毒效果。效果。（三）无菌技术（三）无菌技术4.4.灭菌方法：灭菌方法：（1 1）灼烧灼烧灭菌法：用于金属用具（灭菌法：用于金属用具（接种环接种环、接种针、接种针）、）、试管口和瓶口试管口和瓶口的灭菌；的灭菌；灼烧灭菌灼烧灭菌微生物的微生物的接种工具接种工具(接接种环、接种针种环、接种针)或其或其他金属用具直接在火他金属用具直接在火焰的焰的充分燃烧层充分燃烧层灼烧灼烧注意适用范围注意适用范围(1)灼烧灭菌灼烧灭菌 (2)干热灭菌干热灭菌(3)高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌（三）无菌技术（三）无菌技术4.4

27、.灭菌方法：灭菌方法：（2 2）干热干热灭菌法：灭菌法：能耐高温的需要保持干燥能耐高温的需要保持干燥的物品的物品,如如玻璃器皿、金属用具的灭菌玻璃器皿、金属用具的灭菌 ，所，所用设备是用设备是 干热灭菌箱干热灭菌箱 ；160170，12小时小时（三）无菌技术（三）无菌技术4.4.灭菌方法：灭菌方法：（3 3）高压蒸汽高压蒸汽灭菌法：用于灭菌法：用于培养基、无菌水培养基、无菌水等的灭菌等的灭菌 ，所用设备是，所用设备是 高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅 。高压灭菌锅高压灭菌锅121121，100kPa100kPa，15-3015-30分钟分钟本实验用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养，可分

28、为制备培养基和纯化大肠杆菌两个阶段。二、实验操作二、实验操作 又称牛肉浸膏，是采用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。牛肉膏二、实验操作二、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨（一）制备牛肉膏蛋白胨固体固体培养基培养基1.1.计算：计算：2.2.称量：称量：3.3.溶化：溶化：加水定容，加水定容，调调pHpH4.4.灭菌：灭菌：5.5.倒平板：（或搁置斜面）倒平板：（或搁置斜面）包好再高压蒸汽灭菌（包好再高压蒸汽灭菌（121121，100100kPakPa，15-3015-30分钟）。分钟）。斜面培养基需先斜面培养基需先分装分装，加，加棉塞棉塞，再包好、灭菌。，

29、再包好、灭菌。培养基冷却到培养基冷却到5050 ，酒精灯火焰酒精灯火焰旁操作。旁操作。称量称量调调pHpH培养基分装培养基分装1/51/5加棉塞加棉塞2/32/3包扎包扎灭菌灭菌搁置斜面搁置斜面斜面不超过试管总长的斜面不超过试管总长的1/21/2倒平板倒平板夹夹倒倒灼灼倒倒 关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是（关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是（）A.A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B.B.牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸C.C.待培养基冷却至待培养基冷却至5

30、050左右时，进行倒平板左右时，进行倒平板D.D.待平板冷却凝固约待平板冷却凝固约5min5min10min10min后，将平板倒过来放置后，将平板倒过来放置解析：解析：选选A A。本题考查了牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备过。本题考查了牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备过程。其顺序为：计算程。其顺序为：计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板，故倒平板，故A A项错误。项错误。【提醒关于斜面培养的问题提醒关于斜面培养的问题】l配制斜面培养基中，试管要加塞棉塞的配制斜面培养基中，试管要加塞棉塞的目的是目的是保持通气并防止杂菌感染保持通气并防止杂菌感染。l试管培养基形成斜面的作用是试管培养基形成斜面的作用是增大

31、接种增大接种面积面积。（二）纯化大肠杆菌：（二）纯化大肠杆菌：1.1.纯化培养技术：纯化培养技术：自然环境中，微生物混在一起生长，要想自然环境中，微生物混在一起生长，要想纯培养，首先要纯培养，首先要将单个细胞与其他细胞分离将单个细胞与其他细胞分离开，进而培养成可见的群体（即菌落）开，进而培养成可见的群体（即菌落）。2.2.常见接种方法：常见接种方法：（高频考点）（高频考点）平板划线法平板划线法：主要用于纯化培养主要用于纯化培养稀释涂布平板法稀释涂布平板法：主要用于分离菌种并计数主要用于分离菌种并计数（二）纯化大肠杆菌：（二）纯化大肠杆菌：其他接种方法：其他接种方法：斜面接种、穿刺接种斜面接种、

32、穿刺接种这些技术的操作方法各不相同，但其这些技术的操作方法各不相同，但其核心都是：核心都是：_防止杂菌污染，保证培养物的纯度防止杂菌污染，保证培养物的纯度（二）纯化大肠杆菌：（二）纯化大肠杆菌：2.2.常见接种方法：常见接种方法：(1)(1)平板划线法：平板划线法：通过接种环在通过接种环在固体固体培养基表面培养基表面连续划线连续划线操操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在表面。在数次划线数次划线后培养，可分离到由后培养，可分离到由一个一个细胞细胞繁殖而来的菌落。繁殖而来的菌落。此法此法主要用于主要用于纯化培养纯化培养接种环接种环.连续划线，连续划

33、线，.逐步稀释逐步稀释.将接种环放在火将接种环放在火焰上灼烧，直到焰上灼烧，直到接种环接种环_在在_旁冷旁冷却接种环，并却接种环，并打开棉塞打开棉塞 将试管口通过火焰将试管口通过火焰 .将已将已_的接种环伸的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液入菌液中蘸取一环菌液 左手将皿盖打开一条缝隙，右手左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，板内，划划_条平行线，条平行线，盖上皿盖。注意盖上皿盖。注意不要划破培养基不要划破培养基。.将试管通过火将试管通过火焰，并塞上棉塞焰，并塞上棉塞 火焰火焰冷却冷却三至五三至五灼烧接种环，待其冷却后，从灼烧接种环，待其冷却后，

34、从第一区域划线的第一区域划线的_开始开始往第二区域内划线。重复以上往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划操作，在三、四、五区域内划线。注意线。注意不要将最后一区的划不要将最后一区的划线与第一区相连线与第一区相连。末端末端烧红烧红将平板将平板_放放入培养箱中培养。入培养箱中培养。倒置倒置 平板划线平板划线（二）纯化大肠杆菌：（二）纯化大肠杆菌：2.2.常见接种方法：常见接种方法：(1)(1)平板划线法：平板划线法：p接种过程中哪些步骤保证了无菌操作？接种过程中哪些步骤保证了无菌操作？对接种环、瓶对接种环、瓶(皿皿)口及时进行灼烧灭菌；口及时进行灼烧灭菌；迅速进行操作；迅速进行操作；

35、将划线后的平板倒置。将划线后的平板倒置。u思考思考为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？接种环吗？为什么？第一步灼烧：第一步灼烧：消灭接种环上的微生物避免污染培消灭接种环上的微生物避免污染培养物；养物；每次划线前灼烧：每次划线前灼烧：为了杀死上一次划线结束后，为了杀死上一次划线结束后，接种环残留的菌种，使下一次划线时，接种环上接种环残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线

36、次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。少，以便得到菌落。操作结束后灼烧：操作结束后灼烧：杀死接种环上残留的菌种，避杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境及感染操作者。免细菌污染环境及感染操作者。u思考思考在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？再进行划线？避免接种环温度太高，杀死菌种避免接种环温度太高，杀死菌种在作第二次及其后的划线操作时，为什么在作第二次及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始划线后，

37、线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。（二）纯化大肠杆菌：（二）纯化大肠杆菌：2.2.常见接种方法：常见接种方法：(2)(2)稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：将将菌液菌液进行进行一系列的梯度稀释一系列的梯度稀释后，分别涂后，分别涂布到布到固体固体培养基表面。稀释度足够高时，能培养基表面。稀释度足够高时，能培养出培养出单个菌落单个菌落。主要用于主要用于分离菌种并计数分离菌种并计数。

38、涂布器涂布器.梯度稀释，梯度稀释，.分别涂布分别涂布.将涂布器浸将涂布器浸在盛有酒精在盛有酒精的烧杯中的烧杯中 取少量稀释液滴取少量稀释液滴加到培养基表面加到培养基表面 待酒精燃尽后待酒精燃尽后冷却冷却8 810s 10s 将沾有少量酒将沾有少量酒精的涂布器在精的涂布器在火焰上引燃火焰上引燃灼灼烧烧用涂布器将菌液均匀地用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使布时可转动培养皿，使涂布均匀涂布均匀稀稀释释涂涂布布平平板板法法u思考：思考：对涂布器、瓶对涂布器、瓶(皿皿)口及时进行灼烧灭菌；口及时进行灼烧灭菌；吸管头不要接触任何物体；吸管头不要接触任何物体；在

39、火焰周围迅速操作。在火焰周围迅速操作。p接种过程中如何进行无菌操作？接种过程中如何进行无菌操作？三、结果分析与评价三、结果分析与评价u思考：思考：若将接种后的培养基和一个未接种的培养基若将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放在都放在37 37 恒温箱中，培养一天，观察到如恒温箱中，培养一天，观察到如下结果，请分析可能的原因。下结果，请分析可能的原因。1.1.在培养时，培养皿是否需要倒置？在培养时，培养皿是否需要倒置？需要需要三、结果分析与评价三、结果分析与评价未接种培养基的作用未接种培养基的作用是是对照对照，应该没有菌，应该没有菌落生长，落生长，若有菌落若有菌落，说明培养基灭菌不彻底说明培养

40、基灭菌不彻底或被污染或被污染。2.2.未接种的培养基表面有菌落生长，说明了未接种的培养基表面有菌落生长，说明了什么？什么？三、结果分析与评价三、结果分析与评价3 3在培养基上观察到了不同形态的菌落，在培养基上观察到了不同形态的菌落，可能的原因是？可能的原因是？不同的菌落代表不同的菌落代表不同的微生物；不同的微生物；产生原因产生原因可能是可能是培养基或接种过程中有其它微生物污培养基或接种过程中有其它微生物污染。染。4.4.培养培养12h12h和和24h24h后后观察到的实验结果相同观察到的实验结果相同吗？吗？菌落大小菌落大小：变大变大；菌落分布位置；菌落分布位置：不变不变。四、课题延伸：四、课题

41、延伸：1 1菌种的临时保存：菌种的临时保存：将菌种接种到将菌种接种到试管的固体斜面培养基试管的固体斜面培养基，放，放入入44冰箱冰箱中保存。以后每中保存。以后每3636个月，要将个月，要将菌种转移到新的培养基。菌种转移到新的培养基。四、课题延伸：四、课题延伸：2 2菌种的长期保存：菌种的长期保存：3ml3ml甘油瓶中装入甘油瓶中装入1ml1ml甘油甘油后灭菌，后灭菌，再加入再加入1ml1ml菌液菌液，混匀后放入，混匀后放入-20-20冷冻冷冻箱保存。箱保存。纯化分解尿素纯化分解尿素的细菌的细菌系列系列稀释稀释平板平板涂布涂布平板划线法平板划线法稀释涂布平稀释涂布平板法板法计算计算称量称量溶化溶

42、化调调pH（分装分装加棉加棉塞）塞）灭菌灭菌倒平板倒平板培养基配制原则培养基配制原则培养基配制方法培养基配制方法例例2.下面对灭菌的理解不正确的是下面对灭菌的理解不正确的是()A.防止杂菌污染防止杂菌污染B.消灭杂菌消灭杂菌C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前B编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO

43、100ml100ml右表是某微生物培养基右表是某微生物培养基成分，请据此回答：成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培养）右表培养基可培养的微生物类型的微生物类型是是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。如不加入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加想浪费此培养基，可再加入入 ，用于，用于培养培养 ，自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌（3 3）若除去成分，加入）若除去成分，加入（CH2OCH2O），该培养基可用于培），该培养基可用于培养养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，

44、在各种成）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的分都溶化后分装前，要进行的是是 。（6 6）右表中各成分重量确定的原）右表中各成分重量确定的原则是则是 。（7 7）若右表培养基用于菌种鉴定，）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分应该增加的成分 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂）编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100m100ml l