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1、安县中学安县中学水生耐热细菌Taq(Thermus aquaticus)耐高温的Taq DNA聚合酶美国微生物学科布鲁克（T.Brock)1966年发现耐热细菌筛选菌株1.自然界筛选：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。2.实验室筛选：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。测定微生物数量的方法：测定微生物数量的方法：1 1、直接计数法：最常用的、直接计数法：最常用的显微镜直接计数显微镜直接计数。先将
2、待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数（微镜下进行计数（）。）。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。体积内的微生物总数。优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。缺点：不能区分死菌和活菌；不适于运动的细菌计数缺点：不能区分死菌和活菌；不适于运动的细菌计数 难以计数微小的细菌。难以计数微小的细菌。应用：一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计应用：一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。数。（二）统计菌落数目（二）统计菌
3、落数目第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。这个实例启示学生，在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。（三）设置对照（三）设置对照1、对照实验：、对照实验：指除了被测试条件以外，其他条件都相同的实验，作用是比照实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是
4、所测试条件引起的相应结果。2、对照实验的目的：、对照实验的目的：排除实验组中非测试因素对实验结果 的影响，提高实验结果的可信度。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实验方案有两种。是可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。（小结）操作：设置重复组，（小结）操作：设置重复组，增强实验的说增强实验的说服力和准确性。将待测样品经过一系列的稀服力和准
5、确性。将待测样品经过一系列的稀释，然后选择三个释，然后选择三个稀释度的菌液均匀涂布在稀释度的菌液均匀涂布在平板上，然后培养。平板上，然后培养。（注意）：为了结果接近真实值，可将同（注意）：为了结果接近真实值，可将同一稀释度菌液涂布到一稀释度菌液涂布到3 3个或个或3 3个以上的平板上个以上的平板上，经培养，计算出菌落的平均数。，经培养，计算出菌落的平均数。对照原则：对照原则：判断培养基中是否有杂菌污染判断培养基中是否有杂菌污染，将未接种的培养基同时进行培养。，将未接种的培养基同时进行培养。判断判断选择培养基选择培养基是否具有筛选作用，是否具有筛选作用，对对照培养基照培养基接种后培养观察菌落数目
6、。接种后培养观察菌落数目。计算公式：每克样品中的菌株数计算公式：每克样品中的菌株数=（C/VC/V）*M M（1）原理：尿素是一种重要的农业氮肥，只有当土壤中 的 细菌将尿素分解成氨之后，才能 被植物利用。尿素细菌能合成脲酶，在脲酶的作用下尿素被分解成氨。CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3二、实验设计（2）实验设计的内容包括实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。（3）实验流程：土壤取样土壤取样 样品系列稀释样品系列稀释 涂布平板与培养涂布平板与培养 观察并记录结果观察并记录结果 菌落计数菌落计数 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土土3cm3c
7、m左右，再取样，将样品装入事先准备好的左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。前都要灭菌。制备以尿素为唯一氮源的制备以尿素为唯一氮源的选择培养基选择培养基。为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？实验时要实验时要对培养皿作对培养皿作好标记。注好标记。注明培养基类明培养基类型、培养时型、培养时间、稀释
8、度间、稀释度、培养物等、培养物等。1 1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。2 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。形瓶中，塞好棉塞。3 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。1 1、结合对照，分析培养物中是否有杂菌污染以及选、结合对照，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出
9、一些菌落。择培养基是否筛选出一些菌落。2 2、是否获得了某一稀释度下，菌落数目在、是否获得了某一稀释度下，菌落数目在3030300300的平板。在这稀释度下，是否至少有两个平板的的平板。在这稀释度下，是否至少有两个平板的菌落数相近？菌落数相近？3 3、你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌的菌、你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学的结果接近吗？如果差异落数是多少？与其他同学的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？很大，可能是什么原因引起的？（一）空气中微生物总数的检测（二）水中细菌总数的检测（三）牛奶中细菌的分离与计数（四）土壤中真菌（或放线菌）的分离与计
10、数1.1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（）A.A.在液体培养基上进行在液体培养基上进行 B.B.至少接种一种细菌至少接种一种细菌 C.C.接种一个细菌接种一个细菌 D.D.及时补充消耗的营养物质及时补充消耗的营养物质 2.2.使用选择培养基的目的是（使用选择培养基的目的是（）A.A.培养细菌培养细菌 B.B.培养真菌培养真菌 C.C.使需要的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖 D.D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别3.3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是能合成脲酶的微生物所需要的碳源
11、和氮源分别是()A.CO A.CO2 2和和N N2 2 B.B.葡萄糖和葡萄糖和NHNH3 3 C.COC.CO2 2和尿素和尿素 D.D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素A AC CD D4.4.下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（）A.A.科学家从科学家从70708080度热泉中分离到耐高温的度热泉中分离到耐高温的TaqDNATaqDNA聚聚合酶合酶 B.B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作为该样品菌落数的估计值作为该样品菌落数的估计值 C.C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中
12、非测试因设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。种类最多。5.5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）加入（）A.A.较多的氮源物质较多的氮源物质 B.B.较多的碳源物质较多的碳源物质 C.C.青霉素类药物青霉素类药物 D.D.高浓度食盐高浓度食盐B BC C例例3 3（20052005年江苏）抗生素作为治疗细菌感年江苏）抗生素作为治疗细菌感染的
13、药物，其高效性和巨大的经济价值使抗生素工业染的药物，其高效性和巨大的经济价值使抗生素工业经久不衰。其中青霉素的发现和应用具有划时代的意经久不衰。其中青霉素的发现和应用具有划时代的意义。义。青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型是是 ，青霉素是青霉菌的，青霉素是青霉菌的 代谢产物。代谢产物。在生产和科研中，常选用处于在生产和科研中，常选用处于 期的青霉菌作期的青霉菌作为菌种或研究材料，因为此时的青霉菌代谢旺盛，为菌种或研究材料，因为此时的青霉菌代谢旺盛，和和 比较稳定。比较稳定。对青霉菌菌体生长情况的测定：取一定体积的发对青霉菌菌体生长情况的测定：取
14、一定体积的发酵液，经离心分离、反复洗涤后，酵液，经离心分离、反复洗涤后，再计算，再计算发酵罐中菌体的总重量。发酵罐中菌体的总重量。异养需氧型异养需氧型次级次级对数对数个体的形态个体的形态生理特性生理特性称菌体的湿重称菌体的湿重（称烘干后的重量）（称烘干后的重量）下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是()A.KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水、葡萄糖、尿素、琼脂、水 B.KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、葡萄糖、琼脂、水、葡萄糖、琼脂、水 C.KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、尿素、琼脂、水、尿素、琼脂、水 D.KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水水练一练：练一练：A
专题22土壤中分解尿素的细菌的分离与计数安中
