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1、实验一实验一 普通光学显微镜的使用及细菌形态的普通光学显微镜的使用及细菌形态的观察观察主主 讲讲:文晴文晴生命科学学院生命科学学院2022-9-9实验课要求 作图要求：实验报告要求用蓝色或黑色钢 笔、圆珠笔或签字笔撰写，要 求用铅笔作图（包括视野、观 察结果、放大倍数等；值日要求：每四人一组，包括物品归位、黑板、地面、台面等，值日结 束后经老师同意方可离开。一、实验目的一、实验目的 了解显微镜的构造和各部分的作用，掌握了解显微镜的构造和各部分的作用，掌握显微镜的使用方法显微镜的使用方法 学习并掌握油镜的原理和使用方法学习并掌握油镜的原理和使用方法 了解并观察细菌的三种基本形态了解并观察细菌的三
2、种基本形态目镜目镜镜筒镜筒转换器转换器物镜物镜通光孔通光孔聚光器聚光器压片夹压片夹反光镜反光镜镜座镜座粗准焦螺旋粗准焦螺旋细准焦螺旋细准焦螺旋 镜臂镜臂 镜柱镜柱载物台载物台 机械部分和光学部分机械部分和光学部分普通光学显微镜的构造可分为两部分：普通光学显微镜的构造可分为两部分：一、普通光学显微镜的基本结构一、普通光学显微镜的基本结构二、实验原理：显微镜的工作原理二、实验原理：显微镜的工作原理物镜上的标识物镜上的标识 显微镜的总放大倍数显微镜的总放大倍数=物镜放大倍数物镜放大倍数X目镜放大倍数目镜放大倍数油镜的放大倍数可达油镜的放大倍数可达100100 ，放大倍数这样大的镜头，放大倍数这样大的
3、镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。由低倍镜转为高倍镜时，通过增加照明强度和开大虹彩光圈，以增大高倍镜及油镜下视野的亮度。从标本玻片透过来的光从标本玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像时会因射入的光线较少，物像显现不清。显现不清。为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时需在油镜和为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时需在油
4、镜和玻片之间加入与玻片之间加入与玻璃的折射率玻璃的折射率相仿的镜油（通常使用相仿的镜油（通常使用香柏香柏油油，其折射率，其折射率n=1.52n=1.52）。）。增加了视野的进光量，从而使增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。物象更加清晰。显微镜的分辨率或分辨力（显微镜的分辨率或分辨力（resolution or resolution or resolving powerresolving power）是指）是指显微镜能辨别两点之间最显微镜能辨别两点之间最小距离的能力小距离的能力。从物理学角度看，光学显微镜的。从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，分辨率受光的干
5、涉现象及所用物镜性能的限制，可表示为：可表示为：式中：式中：D=D=显微镜分辨两点间的最短距离显微镜分辨两点间的最短距离 =光波波长光波波长（平均（平均0.550.55 m)m)NA=NA=物镜的数值孔径值。物镜的数值孔径值。2DNA显微镜的性能显微镜的性能 数值孔径数值孔径则取决于物镜的则取决于物镜的镜口镜口角角和玻片与镜头间和玻片与镜头间介质的折射率介质的折射率，可表示为：可表示为：NA=NA=n n sin(/2 sin(/2）n:n:物镜和被检标本间介质的折射率物镜和被检标本间介质的折射率：镜口角。镜口角。物质物质折射率折射率物质物质折射率折射率空气空气1亚麻油亚麻油1.47水水1.3
6、3石蜡油石蜡油1.487甘油甘油1.487香柏油香柏油1.515玻璃玻璃1.52丁香油丁香油1.535冬青油冬青油1.536浓松节油浓松节油1.542以香柏油为介质的油镜所能达到的数值孔径（以香柏油为介质的油镜所能达到的数值孔径（NANA一般在一般在1.21.21.41.4）要高于低倍镜、高倍镜等物镜（要高于低倍镜、高倍镜等物镜（NANA都低于都低于1.01.0）。）。数值孔径通常在数值孔径通常在0.650.65左右的高倍镜只能分辨距离不小于左右的高倍镜只能分辨距离不小于0.40.4m m的物体，而油镜的的物体，而油镜的分辨率却可达到分辨率却可达到0.20.2m m左右。左右。三、实验器材三、
7、实验器材1 1、标本片：四联球菌、标本片：四联球菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌2 2、试剂：、试剂：香柏油、二甲苯香柏油、二甲苯3 3、仪器及其它用具：、仪器及其它用具：显微镜、擦镜纸等显微镜、擦镜纸等四、实验步骤四、实验步骤1 1、显微观察步骤、显微观察步骤 1 1）低倍镜观察）低倍镜观察（1010）：）：2 2）高倍镜观察）高倍镜观察（4040）：）：3 3）油镜观察）油镜观察（100100）：）：2 2、显微镜用毕后的处理、显微镜用毕后的处理低倍镜的操作低倍镜的操作右手握住镜臂，左手拖住镜座，将显微镜放在自己身体的右手握住镜臂，左手拖住镜座，将显微镜放在自己身体的前方，离实验台边缘前方，
8、离实验台边缘10 cm10 cm左右处；左右处；接通电源，打开显微镜电源开关；接通电源，打开显微镜电源开关；3.3.旋动转换器，将低倍镜移到镜筒正下方；旋动转换器，将低倍镜移到镜筒正下方；4.4.调节光源强度，同时用眼对准目镜，仔细观察，视野亮度调节光源强度，同时用眼对准目镜，仔细观察，视野亮度均匀；均匀；5.5.将标本放在载物台上，旋转推动器，使观察的目的物置于将标本放在载物台上，旋转推动器，使观察的目的物置于圆孔的正中央；圆孔的正中央；6.6.转动粗准焦螺旋，上升载物台至距离物镜约转动粗准焦螺旋，上升载物台至距离物镜约0.5 cm0.5 cm（注意：注意：眼睛注视物镜，以防物镜和载玻片相碰
9、眼睛注视物镜，以防物镜和载玻片相碰）；）；7.7.左眼观察目镜，调节粗、细准焦螺旋直至目的物清晰为止。左眼观察目镜，调节粗、细准焦螺旋直至目的物清晰为止。高倍镜的操作高倍镜的操作转换物镜。旋动转换器将低倍镜换成高倍镜转换物镜。旋动转换器将低倍镜换成高倍镜（注意：（注意：在转换物镜时要从侧面观察，以防镜头与标本片相撞，在转换物镜时要从侧面观察，以防镜头与标本片相撞，如果高倍镜触及标本片，应立即停止旋转，并重新用如果高倍镜触及标本片，应立即停止旋转，并重新用低倍镜调焦）低倍镜调焦）；调焦。调节光圈，使光线亮度合适，再调节调焦。调节光圈，使光线亮度合适，再调节细准焦螺细准焦螺旋旋直至目的物清晰；直至
10、目的物清晰；观察。移动推动器，找到合适的目的物，并移至视野观察。移动推动器，找到合适的目的物，并移至视野的中心进行观察。的中心进行观察。（如果用高倍镜未能看清目的物，则可换用油镜观察）（如果用高倍镜未能看清目的物，则可换用油镜观察）油镜的操作油镜的操作1.1.转换油镜。调节粗准焦螺旋，转换油镜。调节粗准焦螺旋，下降载物台约下降载物台约2 cm，转，转换油镜镜头；换油镜镜头；2.2.加香柏油。加香柏油。在标本片的镜检部位滴一滴香柏油；从侧在标本片的镜检部位滴一滴香柏油；从侧面注视，用面注视，用粗准焦螺旋粗准焦螺旋缓慢上升载物台，使油镜头浸没缓慢上升载物台，使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片；在油
11、中，刚好贴近载玻片；3.3.调焦。上升聚光器，将虹彩光圈开大，使光线充分照调焦。上升聚光器，将虹彩光圈开大，使光线充分照明；缓慢调节明；缓慢调节细准焦螺旋细准焦螺旋，直至物像清晰。，直至物像清晰。4.4.观察。观察。多观察几个视野，选取菌体分布均匀的视野多观察几个视野，选取菌体分布均匀的视野进行菌体形态和排列方式观察。进行菌体形态和排列方式观察。2 2、显微镜用毕后的处理、显微镜用毕后的处理将光强调节至最弱将光强调节至最弱 关闭电源开关关闭电源开关 拔掉拔掉电源插头电源插头 下降载物台下降载物台 取干净擦镜纸取干净擦镜纸拭去镜头上的香柏油拭去镜头上的香柏油 取干净擦镜纸蘸少许二取干净擦镜纸蘸少
12、许二甲苯擦去镜头上的残留油迹甲苯擦去镜头上的残留油迹 取干净擦镜纸擦取干净擦镜纸擦去残留的二甲苯去残留的二甲苯 将显微镜的各部位还原将显微镜的各部位还原，物，物镜转成镜转成“八八”字形，擦干净镜体，罩上防尘罩。字形，擦干净镜体，罩上防尘罩。绘出你在油镜下观察到的两种细菌绘出你在油镜下观察到的两种细菌的形态及其不同细菌细胞的排列方式。的形态及其不同细菌细胞的排列方式。四联球菌（10100）杆菌120（10100）用油镜观察时应注意哪些问题？在载用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油？起什么作玻片和镜头之间加滴什么油？起什么作用？用？实验报告格式实验报告格式一、实验项目名称一、实验项目名称二、实验目的二、实验目的三、实验基本原理三、实验基本原理四、主要仪器设备及耗材四、主要仪器设备及耗材五、实验步骤五、实验步骤六、实验数据及处理结果六、实验数据及处理结果七、思考讨论题七、思考讨论题下次实验项目名称：细菌的简单染色和革兰下次实验项目名称：细菌的简单染色和革兰氏染色氏染色
微生物学 实验1普通光学显微镜的使用及细菌形态的观察
