临床微生物检验

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1、临床微生物检验 临床微生物检验是人体的各种物质进行微生物学检验，为临床诊断和治疗提供依据。整个检验过程包括病人样品的采集、运送、处理，样品中致病微生物的分离、培养、鉴定，药物敏感试验，出具检验报告。微生物学检验程序 合格标本的采集（标本的采集和运输）接种（选择合适的培养基、正确的接种方法）阳性菌的选择（微生物工作者的重点）鉴定及药敏 报告结果一、血液检验 正常人血液是无菌的，目前败血症一词不用，常用菌血症和脓毒症，脓毒症是指全身性炎症反应。菌血症是指细菌侵入血循环，在血液中可检测到细菌，包括一过性和持续性，有明显感染症状。血液感染是一种危重的全身感染，提供病原学的诊断极为重要。1.1.常见病原

2、菌常见病原菌种类病 原 菌G+球菌金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓链球菌、草绿色链球菌、肠球菌G+杆菌结核分枝杆菌、产单核李斯特菌、阴道加特纳菌G-球菌脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，卡他布兰汉菌G-杆菌大肠埃希菌、铜绿假单胞苗、克雷伯杆菌、肠杆菌、变形杆菌、沙雷菌、沙门菌、不动杆菌、嗜肺军团菌、嗜血杆菌真菌念珠菌、曲霉菌、隐球菌、球孢子菌厌氧菌拟杆菌、产气荚膜梭菌2.2.血液标本的病原菌的检验血液标本的病原菌的检验3.3.病原菌的检验程序病原菌的检验程序 1.标本采集 2.标本直接检查 (1)直接显微镜检查;(2)抗原检测;(3)核酸检测;3.分离培养与鉴定 (1)培养基选择;

3、(2)分离培养与鉴定;4.抗体检测 常用ELISA、间接免疫荧光技术等方法;5.药物敏感性试验4.临床意义 1.葡萄球菌菌血症 由耐甲氧西林金黄色萄球菌(MRSA)及凝固酶阴性葡萄球菌引起 的逐年增多，占1015。2.肠球菌菌血症 约占10,常见泌尿生殖道、消化道和腹腔感染的病人。3.G-杆菌菌血症 主要侵犯免疫功能低下的病人。4.L型菌感染菌血症 使用抑制细胞壁的抗生素，由缺损细胞壁的细菌感染所致。5厌氧菌菌血症 常合并需氧菌感染，症状重而复杂。6真菌血症 常由条件致病性真菌引起，有念珠菌、曲霉和毛霉等。7医院感染菌血症 近年来明显增多，占3060。二、中枢神经系统感染1.常见病原体G+菌

4、葡萄球菌，肺炎链球菌，B群、A群链球 菌，消化链球菌，结核分枝杆菌，产单核细胞李斯特菌、炭疽芽胞杆菌;G-菌 脑膜炎奈瑟菌，大肠埃希菌，铜绿假单胞菌，卡他布兰汉菌，类杆菌，不动杆菌，肺炎克雷白杆菌;病毒 乙型脑炎病毒,柯萨奇病毒A B,脊髓灰质炎病毒,新肠道病毒6871,狂犬病毒;真菌及其他 新生隐球菌,白假丝酵母菌,钩端螺旋体2.微生物检验程序 对婴幼儿不能腰穿时，用PCR技术检测外周血，对脑膜炎条瑟菌感染者的阳性率为100，且不受抗生素药物治疗的影响；涂片和结核分枝杆菌培养阳性率有限，且时间长，用 PCR技术检测脑脊液中结核分枝杆菌DNA，检出率高，快速灵敏和特异，但要严格操作规程，避免假

5、阳性。3.抗体检测 为病毒检测的快速诊断方法，较常用。(1)中和试验：主要检测中和抗体lgG，此抗 体持续时间长有诊断意义，阳性率和特异性均高。双份血清效价4倍增高。(2)特异性IgM抗体测定：此抗体在病后4天即可出现，2周可达高峰，常用于早期诊断。用 ELISA、间接免疫荧光法等检测，敏感性和特异性较高。(3)补体结合试验：补体结合抗体为lgG抗体，常在病后第二周出现，56周达高峰，单份血清1：4为阳性，双份血清效价增高4倍为阳性，用于回顾 性诊断或流行病学调查。(4)血凝抑制试验：可用于临床诊断及流行病学调查。血凝抑制抗体在病后5天出现，2周时达高峰，双份血清抗体效价增高4倍以上有诊断价值

6、，阳性率高于补体结合试验，但可出现假阳性。4.临床意义 1细菌性脑膜炎是常见类型，其中以流行性脑脊髓膜炎为常见，结核性脑膜炎呈回升趋势，为防治重点。肺炎球菌、链球菌脑膜炎仍常见，流感嗜血杆菌脑膜炎以及其他G-杆菌性脑膜炎有增多趋势。2 2真菌性脑膜炎最常见是隐球菌脑膜炎，其他真真菌性脑膜炎最常见是隐球菌脑膜炎，其他真菌性脑膜炎如白假丝酵母菌、球孢子菌渐增多，菌性脑膜炎如白假丝酵母菌、球孢子菌渐增多，免疫功能低下患者易并发。免疫功能低下患者易并发。3流行性乙型脑炎是人兽共患的自然疫源性疾病。4肠道病毒对中枢神经系统的危害性已逐渐引起人们的关注和重视。还不断发现新肠道病毒68-71型引起的脑膜炎及

7、脑炎。三、创伤和外科感染1.常见病原菌种类种类革兰阳性革兰阳性革兰阴性革兰阴性球菌球菌金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、化脓链球菌、肺炎葡萄球菌、化脓链球菌、肺炎链球菌、肠球菌、消化链球菌链球菌、肠球菌、消化链球菌脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布兰汉菌卡他布兰汉菌杆菌杆菌结核分枝杆菌、非结核分枝杆结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌、破伤风杆菌、产气荚膜梭菌、破伤风杆菌、产气荚膜梭菌、炭疽芽胞杆菌菌、炭疽芽胞杆菌大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、拟杆菌、梭杆流感嗜血杆菌、拟杆菌、梭杆菌、肺炎克雷白杆菌、变形杆菌、肺炎

8、克雷白杆菌、变形杆菌菌其他其他衣氏放线菌、诺卡菌衣氏放线菌、诺卡菌2.微生物检验程序 见第一节血液感染或有关章节。取创伤分泌物和脓液作标本；放线菌首先要检出标本中的硫磺颗粒；检测结核分枝杆菌作抗酸染色镜检；检测厌氧菌要作厌氧培养。由创伤、手术、侵人性器械操作等外科治疗引起的感染最为常见，并日渐增多。四、上呼吸道感染(一)常见病原体 1.革兰阳性 金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、化脓 链球菌、肺炎链球菌、结核分枝杆菌、白喉棒 状杆菌、厌氧菌、炭疽芽胞杆菌、白假丝酵母 菌、放线菌、奋森螺旋体;2.革兰阴性 脑膜炎奈瑟菌、大肠埃希菌、肺炎克雷白杆菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、肠杆菌、不动 杆菌

9、、百日咳杆菌、军团菌、肺炎支原体(二)细菌学检验程序1.细菌学检验见第一节血液感染及有关章节。2.病原体检测只对某些疾病诊断具有意义。由于菌群复杂，正常寄生菌和种类繁多，一份咽拭子分离出来的细菌不一定与疾病有关，另外由于接受药物治疗，使某些细菌受到抑制，可影响阳性检出率。因此，在分析结果时应紧密结合临床。3.鼻咽拭子标本的检测有助于猩红热、风湿热、急性肾小球肾炎病人的临床诊断；还可检出化脓链球菌、奋森螺旋体、脑膜炎奈瑟菌、麻风杆菌等以协助诊断；对白喉、百日咳或口腔念珠菌感染的诊断有意义，应结合临床。4.4.呼吸道还可见病毒感染，常见普通感冒呼吸道还可见病毒感染，常见普通感冒或流行性感冒，咽炎和

10、扁桃腺炎等，均应或流行性感冒，咽炎和扁桃腺炎等，均应结合临床进行诊断。结合临床进行诊断。五、下呼吸道感染(一)常见病原体1.革兰阳性 金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、A群链球菌、肠球菌、结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌、炭疽芽胞杆菌、白假丝酵母菌、毛霉、曲霉;2.2.革兰阴性革兰阴性 脑膜炎奈瑟菌、黄色球菌、大肠埃希菌、脑膜炎奈瑟菌、黄色球菌、大肠埃希菌、克雷克雷白杆菌、白杆菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、百日咳铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、百日咳杆菌、军团菌、支原体杆菌、军团菌、支原体 (二)病原学检验程序(1)要严格无菌操作,收集晨起第一次清洁中段尿标本，其结果才可靠。(2)标本直

11、接显微镜检查 可用1滴尿涂片作染色镜检是有意义的方法。如平均每个视野1个细菌(表示细菌定量培养 105ml)率达90以上。(3)尿细菌定量培养诊断标准是以细菌数 105ml为真性细菌尿,104-105ml为可疑阳性，需再复查。抗菌药物敏感性试验（ASTAST）近年来，由于抗菌药物的广泛使用，导近年来，由于抗菌药物的广泛使用，导致耐药菌株不断出现，尤其滥用抗生素造成致耐药菌株不断出现，尤其滥用抗生素造成抗药突变菌株的大量出现。抗药突变菌株的大量出现。加强抗菌药物的实验室监测，测定细菌加强抗菌药物的实验室监测，测定细菌对抗菌药物的敏感程度，是摆在临床医生和对抗菌药物的敏感程度，是摆在临床医生和微生

12、物工作者面前的一项艰巨任务，对于临微生物工作者面前的一项艰巨任务，对于临床治疗中合理选择用药、避免滥用药物、及床治疗中合理选择用药、避免滥用药物、及时有效的控制感染，以及细菌鉴定具有重要时有效的控制感染，以及细菌鉴定具有重要的意义。的意义。一、意义一、意义可预测抗菌治疗的效果，可预测抗菌治疗的效果，“敏感敏感”治疗可能有效；治疗可能有效；“耐药耐药”肯定失败；肯定失败；指导医生选择使用抗生素，指导医生选择使用抗生素，ASTAST的结果为的结果为“耐药耐药”，即应更换药物；即应更换药物；提供所选择药物的依据；提供所选择药物的依据；监测耐药性，分析耐药菌变迁，掌握耐药菌感染监测耐药性，分析耐药菌变

13、迁，掌握耐药菌感染 病流行病学，控制和预防耐药菌感染发生和流行。病流行病学，控制和预防耐药菌感染发生和流行。二、试验常规抗菌药物选择二、试验常规抗菌药物选择 所选用的药物是根据各类细菌对抗菌药所选用的药物是根据各类细菌对抗菌药物的敏感性和临床用药的具体情况决定。物的敏感性和临床用药的具体情况决定。通常同类药物只选择一到两种代表药物。通常同类药物只选择一到两种代表药物。三、纸片琼脂扩散法三、纸片琼脂扩散法 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成琼脂中

14、水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度在纸片周围抑菌浓度范围内递减的梯度浓度在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的菌的MICMIC呈负相关关系。呈负相关关系。四、肉汤稀释法四、肉汤稀释法 将抗菌药物作不同浓度的定量稀释，然后将抗菌药物作不同浓度的定量稀释，然后与被测菌作用，测定抗菌药物对细菌的最小与被测菌作用，测定抗菌药物对细菌的最小抑制浓度（抑制浓度（MICMIC）或最

15、小杀菌浓度（）或最小杀菌浓度（MBC)MBC)。抗菌药物最高稀释度仍能抑制细菌生长者，抗菌药物最高稀释度仍能抑制细菌生长者，该管含药浓度即为被测菌株的敏感度。该管含药浓度即为被测菌株的敏感度。五、药物敏感试验结果解释五、药物敏感试验结果解释“敏感敏感”即表示测试菌可被测定药物常规剂即表示测试菌可被测定药物常规剂 量给药后在体内达到的血药浓度所抑制；量给药后在体内达到的血药浓度所抑制；“耐药耐药”即表示测试菌不能被在体内感染部即表示测试菌不能被在体内感染部 位可能达到的抗菌药物浓度所抑制，临位可能达到的抗菌药物浓度所抑制，临 床治疗无效。床治疗无效。“中介中介”者提示该细菌对常规用药体液或组者提示该细菌对常规用药体液或组 织中的药物浓度的反应率低于敏感株，使织中的药物浓度的反应率低于敏感株，使 用高于正常给药量有疗效用高于正常给药量有疗效。当细菌对多种药物敏感时，应根据感染部位、病情、药物抗菌作用、及药物动力学特点选择抗菌药物。