沙门氏菌的检测鉴定教学课件

《沙门氏菌的检测鉴定教学课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《沙门氏菌的检测鉴定教学课件（37页珍藏版）》请在装配图网上搜索。

1、2021/4/261沙门氏菌的检测及鉴定 2021/4/262设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1 冰箱：2 5。2.2 恒温培养箱：36 1，42 1。2.3 均质器。2.4 振荡器。2.5 电子天平：感量0.1 g。2.6 无菌锥形瓶:容量500 mL，250 mL。2.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。2.8 无菌培养皿：直径90 mm。2.9 无菌试管：3 mm50 mm、10 mm75 mm。2.10 无菌毛细管。2.11 pH计或pH比色管或精密pH试纸。2.12 全自动微生物生

2、化鉴定系统。2021/4/2633 培养基和试剂 3.1 缓冲蛋白胨水（BPW）。3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液。3.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液。3.4 亚硫酸铋（BS）琼脂。3.5 HE琼脂：见附录A中A.5。3.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂。3.7 沙门氏菌属显色培养基。3.8 三糖铁（TSI）琼脂。3.9 蛋白胨水、靛基质试剂。3.10 尿素琼脂（pH 7.2）。3.11 氰化钾 （KCN）培养基。3.12 赖氨酸脱羧酶试验培养基。3.13 糖发酵管。3.14 邻硝基酚-D半乳糖苷（ONPG）培养基。3.15 半固体琼脂。3.16 丙二酸钠培养基。3.17 沙门氏菌

3、O和H诊断血清。3.18 生化鉴定试剂盒。2021/4/264A.1 缓冲蛋白胨水（BPW）A.1.1成分 蛋白胨10.0 g氯化钠5.0 g磷酸氢二钠（含12个结晶水）9.0 g磷酸二氢钾1.5 g蒸馏水1 000 mLpH 7.20.2 A.1.2 制法 将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10 min，煮沸溶解，调节pH，高压灭菌121，15 min。2021/4/265A.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液 A.2.1基础液 蛋白胨10.0 g、牛肉膏5.0 g、氯化钠3.0 g、碳酸钙45.0 g、蒸馏水1 000 mL、pH 7.00.2 除碳酸钙外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶

4、解，再加入碳酸钙，调节pH，高压灭菌121，20 min。A.2.2硫代硫酸钠溶液 硫代硫酸钠（含5个结晶水）50.0 g，馏水 加至100 mL，高压灭菌121，20 min。A.2.3碘溶液 碘 片20.0 g、碘化钾25.0 g、蒸馏水 加至100 mL，将碘化钾充分溶解于少量的蒸馏水中，再投入碘片，振摇玻瓶至碘片全部溶解为止，然后加蒸馏水至规定的总量，贮存于棕色瓶内，塞紧瓶盖备用。A.2.4 0.5煌绿水溶液煌绿0.5 g、蒸馏水100 mL溶解后，存放暗处，不少于1d，使其自然灭菌。A.2.5牛胆盐溶液 牛胆盐10.0 g，蒸馏水100 mL加热煮沸至完全溶解，高压灭菌121，20

5、min。A.2.6 制法 基础液900 mL、硫代硫酸钠溶液100 mL、碘溶液20.0 mL、煌绿水溶液2.0 mL牛胆盐溶液50.0 mL临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加入另一种成分。2021/4/266A.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液 A.3.1成分蛋白胨5.0 g乳糖4.0 g磷酸氢二钠10.0 g亚硒酸氢钠4.0 gL-胱氨酸0.01 g蒸馏水1 000 mLpH 7.00.2 A.3.2 制法 除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，冷至55 以下，以无菌操作加入亚硒酸氢钠和1 g/L L-胱氨酸溶液10 mL（

6、称取0.1 g L-胱氨酸，加1 mol/L氢氧化钠溶液15 mL，使溶解，再加无菌蒸馏水至100 mL即成，如为DL-胱氨酸，用量应加倍）。摇匀，调节pH。2021/4/267A.4 亚硫酸铋（BS）琼脂 A.4.1成分 蛋白胨10.0 g牛肉膏5.0 g葡萄糖5.0 g硫酸亚铁0.3 g磷酸氢二钠4.0 g煌 绿0.025 g或5.0gL水溶液5.0mL柠檬酸铋铵2.0 g亚硫酸钠6.0 g琼 脂18.0 g20 g蒸馏水1 000 mLpH 7.50.2 A.4.2 制法 将前三种成分加入300 mL蒸馏水（制作基础液），硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20 mL和30 mL蒸馏水中，柠檬酸

7、铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20 mL和30 mL蒸馏水中，琼脂加入600 mL蒸馏水中。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。冷至80 左右时，先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀，倒入基础液中，混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混匀。调节pH，随即倾入琼脂液中，混合均匀，冷至50 55。加入煌绿溶液，充分混匀后立即倾注平皿。注：本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，贮于室温暗处，超过48 h会降低其选择性，本培养基宜于当天制备，第二天使用。2021/4/268注：本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，贮于室温暗处，超过48 h会降低其

8、选择性，本培养基宜于当天制备，第二天使用。A.5 HE 琼脂（Hektoen Enteric Agar）A.5.1成分 蛋白胨 12.0 g 牛肉膏3.0 g乳糖12.0 g蔗糖12.0 g水杨素 2.0 g 胆盐20.0 g氯化钠5.0 g琼脂18.0 g20.0 g蒸馏水1 000 mL0.4溴麝香草酚蓝溶液16.0 mLAndrade指示剂20.0 mL甲液20.0 mL乙液20.0 mLpH 7.50.2 2021/4/269A.5.2 制法 将前面七种成分溶解于400 mL蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于600 mL蒸馏水内。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。加入甲液和乙液于基础液内,调节

9、pH。再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至50 55 倾注平皿。注:本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性。甲液的配制硫代硫酸钠34.0 g柠檬酸铁铵4.0 g蒸馏水100 mL乙液的配制去氧胆酸钠 10.0 g 蒸馏水 100 mL Andrade 指示剂酸性复红 0.5 g 1mol/L氢氧化钠溶液 16.0 mL 蒸馏水 100 mL 将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1 mL2 mL。2021/4/26106、木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂 A.6.1成分 酵母膏3.0 gL-赖氨酸5.0 g木糖3.75 g乳

10、糖7.5 g蔗糖7.5 g去氧胆酸钠2.5 g柠檬酸铁铵0.8 g硫代硫酸钠6.8 g氯化钠5.0 g琼脂15.0 g酚红0.08 g蒸馏水1 000 mLpH 7.40.2 A.6.2制法 除酚红和琼脂外，将其他成分加入400 mL蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。另将琼脂加入600 mL蒸馏水中，煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后，再加入指示剂，待冷至50 55 倾注平皿。注:本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，贮于室温暗处。本培养基宜于当天制备，第二天使用。9、人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2022-8-292022-8-29Monday,August 2

11、9,202210、低头要有勇气，抬头要有低气。2022-8-292022-8-292022-8-298/29/2022 10:40:14 AM11、人总是珍惜为得到。2022-8-292022-8-292022-8-29Aug-2229-Aug-2212、人乱于心，不宽余请。2022-8-292022-8-292022-8-29Monday,August 29,202213、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2022-8-292022-8-292022-8-292022-8-298/29/202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年8月29日星期一2022-8-292022-8-2920

12、22-8-2915、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。2022年8月2022-8-292022-8-292022-8-298/29/202216、业余生活要有意义，不要越轨。2022-8-292022-8-29August 29,202217、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2022-8-292022-8-292022-8-292022-8-292021/4/2612A.7 三糖铁（TSI）琼脂 A.7.1成分 蛋白胨20.0 g牛肉膏5.0 g乳 糖10.0 g蔗 糖10.0 g葡萄糖1.0 g硫酸亚铁铵（含6个结晶水）0.2 g酚 红0.025 g或5.0 g/L溶液5.0 mL氯

13、化钠5.0 g硫代硫酸钠0.2 g琼 脂12.0 g蒸馏水1 000 mL pH 7.40.2 A.7.2 制法 除酚红和琼脂外，将其他成分加入400 mL蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。另将琼脂加入600 mL蒸馏水中，煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后，再加入指示剂，混匀，分装试管，每管约2 mL4 mL，高压灭菌121 10 min或115 15 min，灭菌后置成高层斜面，呈桔红色。2021/4/2613A.8 蛋白胨水、靛基质试剂 A.8.1 蛋白胨水 蛋白胨（或胰蛋白胨）20.0 g 氯化钠 5.0 g 蒸馏水1 000 mLpH 7.40.2 将上述成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，调节p

14、H，分装小试管,121 高压灭菌15 min。A.8.2 靛基质试剂A.8.2.1 柯凡克试剂：将5 g对二甲氨基甲醛溶解于75 mL戊醇中,然后缓慢加入浓盐酸25 mL。A.8.2.2 欧-波试剂：将1 g对二甲氨基苯甲醛溶解于95 mL95乙醇内。然后缓慢加入浓盐酸20 mL。A.8.3 试验方法挑取小量培养物接种,在36 1 培养1 d2 d，必要时可培养4 d5 d。加入柯凡克试剂约0.5 mL，轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧-波试剂约0.5 mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。注：蛋白胨中应含有丰富的色氯酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴

15、定后方可使用。2021/4/26149 尿素琼脂（pH 7.2）A.9.1成分 蛋白胨1.0 g氯化钠5.0 g葡萄糖1.0 g磷酸二氢钾2.0 g0.4酚 红3.0 mL琼 脂20.0 g蒸馏水1 000 mL20%尿素溶液 100 mL pH7.20.2 A.9.2制法 除尿素、琼脂和酚红外，将其他成分加入400 mL蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。另将琼脂加入600 mL蒸馏水中，煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后，再加入指示剂后分装，121 高压灭菌15 min。冷至50 55,加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2。分装于无菌试管内，放成斜面备用。A.9.3试验方法 挑取琼脂培养物

16、接种,在36 1 培养24 h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。2021/4/2615.10 氰化钾（KCN）培养基 A.10.1成分 蛋白胨10.0 g氯化钠5.0 g磷酸二氢钾0.225 g磷酸氢二钠5.64 g蒸馏水1 000 mL0.5氰化钾20.0 mLA.10.2 制法 将除氰化钾以外的成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，分装后121 高压灭菌15 min。放在冰箱内使其充分冷却。每100 mL培养基加入0.5氰化钾溶液2.0 mL（最后浓度为1:10 000），分装于无菌试管内,每管约4 mL,立刻用无菌橡皮塞塞紧,放在4 冰箱内,至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的

17、培养基作为对照培养基,分装试管备用。A.10.3 试验方法 将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成为稀释菌液，挑取1环接种于氰化钾（KCN）培养基。并另挑取1环接种于对照培养基。在36 1 培养1 d2 d，观察结果。如有细菌生长即为阳性（不抑制），经2 d细菌不生长为阴性（抑制）。注:氰化钾是剧毒药,使用时应小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分装培养基应在冰箱内进行。试验失败的主要原因是封口不严,氰化钾逐渐分解，产生氢氰酸气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生长，因而造成假阳性反应。试验时对每一环节都要特别注意。2021/4/2616A.11 赖氨酸脱羧酶试验培养基 A.11.1成分 蛋白胨5.0 g酵母浸

18、膏3.0 g葡萄糖1.0 g蒸馏水1 000 mL 1.6溴甲酚紫-乙醇溶液1.0 mLL-赖氨酸或DL-赖氨酸 0.5 g/100 mL或1.0 g/100 mLpH 6.80.2 A.11.2制法 除赖氨酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100 mL，分别加入赖氨酸。L-赖氨酸按0.5加入，DL-赖氨酸按1加入。调节pH。对照培养基不加赖氨酸。分装于无菌的小试管内，每管0.5 mL，上面滴加一层液体石蜡，115 高压灭菌10 min。A.11.3试验方法 从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36 1 培养18 h24 h，观察结果。氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因

19、葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管应为黄色。2021/4/2617A.12 糖发酵管 A.12.1成分 牛肉膏5.0 g蛋白胨10.0 g氯化钠3.0 g磷酸氢二钠（含12个结晶水）2.0 g0.2溴麝香草酚蓝溶液12.0 mL蒸馏水1 000 mLpH 7.40.2 A.12.2 制法 A.12.2.1葡萄糖发酵管按上述成分配好后，调节pH。按0.5加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121 高压灭菌15 min。A.12.2.2 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100 mL，121 高压灭菌15 min。另将各种糖类分别配好10溶液，同时高压灭菌。将5 mL糖溶液加入

20、于100 mL培养基内，以无菌操作分装小试管。注：蔗糖不纯,加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。A.12.3 试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36 1 培养,一般2 d3 d。迟缓反应需观察14 d30 d。2021/4/2618A.13 ONPG 培养基 A.13.1 成分 邻硝基酚-D半乳糖苷（ONPG）（O-Nitrophenyl-D-galactopyranoside）60.0 mg0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.5）10.0 mL 1蛋白胨水（pH7.5）30.0 mL A.13.2制法 将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于无菌的小试管内，

21、每管0.5 mL，用橡皮塞塞紧。A.13.3试验方法 自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种于36 1 培养1 h3 h和24 h观察结果。如果-半乳糖苷酶产生，则于1 h3 h变黄色，如无此酶则24 h不变色。2021/4/2619A.14 半固体琼脂 A.14.1成分 牛肉膏0.3 g蛋白胨1.0 g氯化钠0.5 g琼脂0.35g0.4 g蒸馏水100 mLpH 7.40.2 A.14.2 制法 按以上成分配好,煮沸溶解,调节pH。分装小试管。121 高压灭菌15 min。直立凝固备用。注:供动力观察、菌种保存、H抗原位相变异试验等用。2021/4/2620A.15 丙二酸钠培养基 A.15.1

22、成分 酵母浸膏1.0 g 硫酸铵 2.0 g 磷酸氢二钾 0.6 g 磷酸二氢钾 0.4 g 氯化钠 2.0 g 丙二酸钠 3.0 g 0.2溴麝香草酚蓝溶液12.0 mL 蒸馏水1 000 mL pH 6.80.2 A.15.2制法 除指示剂以外的成分溶解于水，调节pH，再加入指示剂，分装试管，121 高压灭菌15 min。A.15.3试验方法 用新鲜的琼脂培养物接种，于36 1 培养48 h，观察结果。阳性者由绿色变为蓝色。2021/4/26214 检验程序 2021/4/26225 操作步骤 5.1 前增菌 称取25 g（mL）样品放入盛有225 mL BPW的无菌均质杯中，以8 000

23、 r/min10 000 r/min均质1 min2 min，或置于盛有225 mL BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH值，用1 mol/mL无菌NaOH或HCl调pH 至6.80.2。无菌操作将样品转至500 mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36 1 培养8 h18h。如为冷冻产品,应在45 以下不超过15 min,或2 5 不超过18 h解冻5.2 增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL，转种于10 mL TTB 内，于421 培养18 h24 h。同时，另取1 mL，转种于10 mL SC内

24、，于36 1 培养18 h24 h。2021/4/26235.3 分离 2021/4/26242021/4/26252021/4/26262021/4/26272021/4/26285.5 血清学鉴定 5.5.1 抗原的准备 一般采用1.21.5琼脂培养物作为玻片凝集试验用的抗原。O血清不凝集时，将菌株接种在琼脂量较高的 （如23）培养基上再检查；如果是由于Vi抗原的存在而阻止了O凝集反应时，可挑取菌苔于1 mL生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮沸后再检查。H抗原发育不良时，将菌株接种在0.550.65半固体琼脂平板的中央，俟菌落蔓延生长时，在其边缘部分取菌检查；或将菌株通过装有0.30.

25、4半固体琼脂的小玻管1次2次，自远端取菌培养后再检查。5.5.2 多价菌体抗原（O）鉴定 在玻片上划出2个约1 cm2 cm的区域，挑取1环待测菌，各放1/2环于玻片上的每一区域上部，在其中一个区域下部加1滴多价菌体（O）抗血清，在另一区域下部加入1滴生理盐水，作为对照。再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合1 min，并对着黑暗背景进行观察，任何程度的凝集现象皆为阳性反应。5.5.3 多价鞭毛抗原（H）鉴定 同5.5.2。2021/4/26295.5.4 血清学分型（选做项目）5.5.4.1 O 抗原的鉴定 用AF多价O血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水做对

26、照。在生理盐水中自凝者为粗糙形菌株，不能分型。被AF多价O血清凝集者，依次用O4；O3、O10；O7；O8；O9；O2和O11因子血清做凝集试验。根据试验结果，判定O群。被O3、O10血清凝集的菌株，再用O10、O15、O34、O19单因子血清做凝集试验，判定E1、E2、E3、E4各亚群，每一个O抗原成分的最后确定均应根据O单因子血清的检查结果，没有O单因子血清的要用两个O复合因子血清进行核对。不被AF多价O血清凝集者，先用9种多价O血清检查，如有其中一种血清凝集，则用这种血清所包括的O群血清逐一检查，以确定O群。每种多价O血清所包括的O因子如下：O多价1 A，B，C，D，E，F，群 （并包括

27、6,14群）O多价2 13，16，17，18，21群O多价3 28，30，35，38，39群O多价4 40，41，42，43群O多价5 44，45，47，48群O多价6 50，51，52，53群O多价7 55，56，57，58群O多价8 59，60，61，62群O多价9 63，65，66，67群2021/4/26302021/4/2631不常见的菌型，先用8种多价H血清检查，如有其中一种或两种血清凝集，则再用这一种或两种血清所包括的各种H因子血清逐一检查，以第1相和第2项的H抗原。8种多价H血清所包括的H因子如下：H多价1 a，b，c，d，i H多价2 eh，enx，enz15，fg，gms，

28、gpu，gp，gq，mt，gz51H多价3 k，r，y，z，z10，lv，lw，lz13，lz28，lz40H多价4 1,2；1,5；1,6；1,7；z6H多价5 z4z23，z4z24，z4z32，z29，z35，z36，z38H多价6 z39，z41，z42，z44H多价7 z52，z53，z54，z55H多价8 z56，z57，z60，z61，z62每一个H抗原成分的最后确定均应根据H单因子血清的检查结果，没有H单因子血清的要用两个H复合因子血清进行核对。检出第1相H抗原而未检出第2相H抗原的或检出第2相H抗原而未检出第1相H抗原的,可在琼脂斜面上移种12代后再检查。如仍只检出一个相的H

29、抗原，要用位相变异的方法检查其另一个相。单相菌不必做位相变异检查。2021/4/2632位相变异试验方法如下：小玻管法：将半固体管（每管约1 mL2 mL）在酒精灯上溶化并冷至50，取已知相的H因子血清0.05 mL0.1 mL，加入于溶化的半固体内，混匀后，用毛细吸管吸取分装于供位相变异试验的小玻管内，俟凝固后，用接种针挑取待检菌，接种于一端。将小玻管平放在平皿内，并在其旁放一团湿棉花，以防琼脂中水分蒸发而干缩，每天检查结果，待另一相细菌解离后，可以从另一端挑取细菌进行检查。培养基内血清的浓度应有适当的比例，过高时细菌不能生长，过低时同一相细菌的动力不能抑制。一般按原血清1：2001：800

30、的量加入。小倒管法：将两端开口的小玻管 （下端开口要留一个缺口，不要平齐）放在半固体管内,小玻管的上端应高出于培养基的表面，灭菌后备用。临用时在酒精灯上加热溶化，冷至50，挑取因子血清1环，加入小套管中的半固体内，略加搅动，使其混匀，俟凝固后，将待检菌株接种于小套管中的半固体表层内，每天检查结果，待另一相细菌解离后，可从套管外的半固体表面取菌检查，或转种1软琼脂斜面，于37 培养后再做凝集试验。简易平板法：将0.350.4半固体琼脂平板烘干表面水分，挑取因子血清1环，滴在半固体平板表面，放置片刻，待血清吸收到琼脂内，在血清部位的中央点种待检菌株，培养后，在形成蔓延生长的菌苔边缘取菌检查。202

31、1/4/26335.5.4.3 Vi 抗原的鉴定 用Vi因子血清检查。已知具有Vi抗原的菌型有：伤寒沙门氏菌，丙型副伤寒沙门氏菌,都柏林沙门氏菌。5.5.4.4 菌型的判定 根据血清学分型鉴定的结果，按照附录B或有关沙门氏菌属抗原表判定菌型。6 结果与报告 综合以上生化试验和血清学鉴定的结果，报告25 g（mL）样品中检出或未检出沙门氏菌。2021/4/2634提问答疑Question and answerQuestion and answer2021/4/2635谢谢大家！作者：杨淑霞微博：霞日里的阳光THANKS9、人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。22.8.2922.8.29Monda

32、y,August 29,202210、低头要有勇气，抬头要有低气。*8/29/2022 10:40:16 AM11、人总是珍惜为得到。22.8.29*Aug-2229-Aug-2212、人乱于心，不宽余请。*Monday,August 29,202213、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。22.8.2922.8.29*August 29,202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年8月29日星期一*22.8.2915、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。2022年8月*22.8.29*August 29,202216、业余生活要有意义，不要越轨。*8/29/202217、一个人即使已登上

33、顶峰，也仍要自强不息。*22.8.29谢谢大家谢谢大家2021/4/26379、人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2022-8-292022-8-29Monday,August 29,202210、低头要有勇气，抬头要有低气。2022-8-292022-8-292022-8-298/29/2022 10:40:16 AM11、人总是珍惜为得到。2022-8-292022-8-292022-8-29Aug-2229-Aug-2212、人乱于心，不宽余请。2022-8-292022-8-292022-8-29Monday,August 29,202213、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2022-8-292022-8-292022-8-292022-8-298/29/202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年8月29日星期一2022-8-292022-8-292022-8-2915、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。2022年8月2022-8-292022-8-292022-8-298/29/202216、业余生活要有意义，不要越轨。2022-8-292022-8-29August 29,202217、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2022-8-292022-8-292022-8-292022-8-29谢谢大家谢谢大家