《血清碱性磷酸酶活性测定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血清碱性磷酸酶活性测定（15页珍藏版）》请在装配图网上搜索。
1、宁夏医科大学宁夏医科大学 王国宁王国宁血清血清碱性磷酸酶碱性磷酸酶活性测定活性测定磷酸苯二钠法主要内容：主要内容：实验目的 实验原理 实验器材与试剂 实验操作 计算 临床意义 注意事项 酶活力：也称酶活性，是表示催化某一特定反应的能 力。可以用在一定条件下所催化的某一特定化学速度表示。酶催化反应速度越快，酶活力升高，反之活力愈低。底物减少量或生成物增加量酶促反应速度=单位时间基本概念掌握酶活力测定的一般方法掌握血清中ALP活力测定方法与临床意义如何测定酶活力的大小？酶活力：常用单位时间内底物的减少量或产物的生成量来表示碱性磷酸酶（ALP）是一组在碱性环境中水解磷酸酯的酶类。来源：广泛分布于人体
2、的骨、肾、肝、肠、血清、胆汁等部位，但骨骼、牙齿、肾和肝脏中含量较多。正常人血清中ALP主要来源于肝脏。是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，即通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基，这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。而该脱去磷酸基团的过程称为去磷酸化或脱磷酸化。碱性磷酸酶在碱性环境中有最大活力。碱性磷酸酶在碱性环境中作用于磷酸苯二钠，使之水解生成酚和磷酸。酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色醌类化合物，其颜色深浅与ALP活性成正比。磷酸苯二钠+H2O 苯酚+磷酸氢二钠苯酚+4-氨基安替比林 红色醌亚胺衍生物ALPpH=10铁氰化钾 器材：
3、5ml移液管，1ml移液管，100或200ul微量可调式移液器，721E分光光度计，1cm比色皿，37 恒温水浴 试剂：10.1mol/L碳酸盐缓冲液(pH10.0)无水碳酸钠6.36g，碳酸氢钠3.36g，4-氨基安替比林1.5g，溶于800mL蒸馏水中，定容至1L。置棕色瓶中保存。220mmol/L磷酸苯二钠溶液 先将500ml蒸馏水煮沸，迅速加入磷酸苯二钠2.18g(磷酸苯二钠如含2分子结晶水，则应称取2.54g)，冷却后加氯仿2ml防腐，在4冰箱保存。（用剩的溶液不应再倒回瓶中）3显色液（铁氰化钾的硼酸溶液）称取铁氰化钾2.5g，硼酸17g，各自溶于蒸馏水400ml中，两液混合后，加蒸
4、馏水至1L，置棕色瓶中避光保存(如出现蓝绿色即弃去)。4酚标准工作液（0.05mg/ml）购买合格的二级标准品。ALP 活力=（A测定A对照）（A标准A空白）X 0.05X100（kings单位）酚标准液开后不能久置。底物液不能含有酚，若含酚则显红色，说明磷酸苯二钠已分解，不宜使用。加入铁氰化钾后必须迅速混匀(为了改变PH来终止酶促反应），否则有影响，偏大。铁氰化钾溶液中加入硼酸有稳定最后所显色的作用。此液应避光保存，如出现蓝绿色即作废。1.本次实验是用的什么方法？终止剂是什么？为什么加入铁氰化钾硼酸液后必须迅速混匀？有何影响？答：终止法；终止剂是 铁氰化钾硼酸液；硼酸改变了PH，使其不再处于最适PH。谢谢 谢谢
血清碱性磷酸酶活性测定
