色谱峰的前沿与拖尾问题

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1、1. 产生前沿和拖尾的原因一般有哪些？拖尾：1干扰峰，优化条件分离2色谱柱塌陷，更换色谱柱3流动相pH不合适，调节pH值4管路没有接好，存 在较大的死体积，可以重新接一下前沿：1溶剂选择不合适，选择合适的溶剂2样品过载，降低进样量3柱温太低，升高柱温4色谱柱损坏，更换色 谱柱5干扰峰，优化色谱条件分离可能的问题：1.柱子问题2.流动相不恰当3.定容样品的溶剂不合适产生峰前沿的原因：柱过载，柱头塌陷，溶剂选择不对产生峰拖尾的原因：存在杂质未分开，柱污染，柱子选择不对。拖尾峰与柱子有关，可能是过载，稀释样品再做，或换新柱做吧一般产生托尾峰往往是有机性相近杂质没有分开，可以优化分析方法，或更换柱子试

2、一试；也可能由于柱子使用时间 太久柱效下降出现塌陷等原因；再有也会根样品本身性质有关，基团需要流动相中添加能与之结合优化峰形的化学物 质，要根据具体情况而定。柱子可能污染了吧，溶剂也可能有，或柱效下降。图谱前沿和拖尾的原因主要是流动相选择不合适，可以相应调整流动相的极性，或者适当加入酸来调整，可以得到较 好的改善。一般来讲，酸碱在流动相中对于前沿和拖尾影响较大。柱前沿是可能因为柱超载，拖尾是可能因为样品被污染，选择合适的流动相，调节好PH能够改善这以情况。液相拖尾峰出现原因及解决办法：1.柱头有空隙。解决办法：使用填料或玻璃珠填充柱顶部。2 .柱上样品超载。解决办 法：使用更高负载量的固定相。

3、增加色谱柱内径、减少样品量。3.单峰-存在干扰性组分。解决办法：净化样品；预 分离。4.存在未扫的死体积。解决办法：减少接头的数量、确保进样器密封垫紧密、确保接头正确固定。5.碱性化合物 -硅醇相互作用。解决办法：换成聚合物固定相。6.碱性基质-硅醇相互作用。解决办法：使用更强的流动相或添加竞 争碱（例如，三甲胺）。7.硅胶基-柱降解。解决办法：使用特种色谱柱；聚合物柱或空间位阻。8.溶剂相极性不匹配。 较早流出的峰或靠近溶剂前沿的峰更容易出现拖尾，解决办法：改变样品溶剂。另外，为减少拖尾，可以选择设计优 良的封端色谱柱，且使用象三乙胺（TEA，较少需要）等添加剂，或使用“极性”键合相。峰拖尾

4、可能的原因：解决方法1. 柱超载：降低样品量，增加柱直径采用较高容量的固定相2. 峰干扰：清洁样品，调整流动相3. 硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值，钝化样品4. 柱内烧结不锈钢失效：更换烧结不锈钢,加在线过滤器，过滤样品5. 柱塌陷或形成短路通道：更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件6.死体积或柱外体积过大：连接点降至最低，对所有连 接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降：用较低腐蚀条件，更换柱,采用保护柱。可能两种情况：1.柱效低，需老化或用甲醇冲洗。2.有杂质峰在条件（流动相、固定相、温度和压力等）一定，样品浓度很低时（Cs、Cm很小）时，K只

5、取决于组分的性质，而与浓度无关。这只是理想状态下的色谱条件，在这种条件下，得到的色谱峰为正常峰；在许多情况下，随着浓度的增 大，K减小，这时色谱峰为拖尾峰；而有时随着溶质浓度增大，K也增大，这时色谱峰为前延峰。因此，只有尽可能 减少进样量，使组分在柱内浓度降低，K恒定时，才能获得正常峰。平衡分配系数K是指在固液两相体系达平衡状态时，溶质在两相中的浓度的比值。分配系数反映了溶质在两相中的迁 移能力及分离效能，是描述物质在两相中行为的重要物理化学特征参数。峰前延原因解决方法1、柱温低：升高柱温2、样品溶剂选择不恰当：使用流动相作为样品溶剂3、样品过载：降低样品含量4、筛板阻塞：a、反冲色谱柱b、更

6、换进口筛板c、更换色谱柱5、色谱柱塌陷：填充色谱柱避免拖尾：加入二丁胺等扫尾剂、调整流动相pH较强的酸类或碱类物质都会产生拖尾现象，一般的解决办法是调节流动相的pH值，对于酸性物质拖尾，一般是加入 乙酸调节流动相的pH值到酸性，一般在2-3左右，对于碱性物质拖尾，一般是加入三乙胺等碱性物质，调节pH至到 碱性峰拖尾的可能的原因：1流动相的选择有问题2柱超载3柱间的死体积太大在吸附色谱中，前沿峰一般来说比较少见，它是由于色谱柱对被分离组分的吸附能力先弱后强造成的（比如溶质浓度 等因素），其吸附等温曲线为凹型；拖尾则比较常见，与前沿峰相反，其吸附能力是先强后弱，因此其吸附等温曲线为 凸。柱温选择不

7、正确调节柱温，拖尾首先考虑柱子的问题，换根柱子试试，其次就是流动相的?日，选择合适的PH至关重 要，一般用磷酸盐缓冲液及磷酸调PH23会有改善吧。如果是碱性样品，可适当的加入三乙胺来竞争一下。我试过同一张谱图中，有前伸峰，也有拖尾峰，后来发现是柱子选择的问题，样品中成分的极性不一样 拖尾和被测定组分、色谱柱、流动相有很大关系。峰拖尾有可能是:1.阀连接处出现死区；2.进样器内有污染或不干净；3.色谱柱选择不当；4.进样技术差；5.样品在流动 相中溶解度小；6.进样量太大。1. 原因：进样体积太大或样品浓度太高，样品过载致使平衡被破坏；解决办法：减小进样量或稀释样品2. 对于流动相来讲样品溶剂太

8、强；解决办法：用流动相溶解样品3. 柱或保护柱被污染解决办法：清洗柱或保护柱，必要时更换4. 柱性能下降解决办法：检查柱效，对色谱柱进行再生处理，必要时更换流动相的比例对样品分离影响很大，比例不适当就会产长拖尾，所以要调整流动相的比例；再就是调整流速。基本上没有完全对称的峰，大多数峰都拖尾，拖尾的原因很大程度是柱头污染和板结造成的，趋势是柱子拖尾越来越 严重，我曾经将拖尾十分严重的色谱柱打开，发现柱子入口端的填料颜色非常深，而且填料靠近管壁的一层已经结成 了一圈硬壳，新柱子前沿的多一些，理论上分配系数等于1的组分无论如何分离都是对称的，分配系数不为1的情况峰型都不对称， 在塔板数非常高的时候，

9、峰型近似于正态分布曲线。拖尾有可能是柱效不高，使用的柱子不合理；当然也可能是配试液的溶剂有问题，再有就是流动相了。色谱峰拖尾原因：产生的死体积太大，样品浓度太高，流速、柱效也不排除柱子污染。可能柱子超载，稀释一下就好了；或是柱效不行了，需要换新柱子；也有可能是柱子的极性不合适，调调pH应该就 好。从原理上说，拖尾和前沿都是不可避免的，因为绝对线性的吸附（分配）等温线是没有的，而且色谱柱这种多塔板的 结构也会导致色谱峰的展宽会越来越大，所以通常的峰都是后面比前面宽，也就是拖尾。只能说通过改善条件来优化。 柱子或保护柱被污染，柱子性能下降，保护柱失效都可能造成前沿和拖尾。前沿的原因还可能是进样体积

10、太大或样品浓度过高，造成样品过载，平衡被破坏。简单的从色谱柱分离机理角度谈一下：造成拖尾的原因多数是因为要分离的化合物是碱性的。硅胶表面的硅羟基pKa 值是2-3，也就是当流动相的pH值大于这个值，硅羟基就会解离，这时这个氧带的外层电子对碱的吸附是特别强的， 很多人知道硅羟基对碱性物质吸附，就是这个原因。那么就应选择封尾的柱子，但是即使封尾，不管工艺怎么好，都 不会是100%能封住。那么就争取从pH值角度考虑，减小流动相pH，或者说加三乙胺，三乙胺容易被这个解离的硅 羟基吸附，其实作用相当于对色谱柱封尾。从流动相的角度考虑用甲醇做碱性物质要相对比乙腈好，因为甲醇含有-OH， 多少能抑制硅羟基解

11、离，加缓冲盐的目的也是抑制硅羟基解离。所以说种种方法都是抑制硅羟基解离或竞争吸附，尽 量减少解离的硅羟基对碱性物质的吸附。前面第二个前沿峰图，非常有可能是色谱柱的硅胶溶解造成的。前沿峰还有可能是由溶解性效应引起，就是溶解样品 的溶液对样品的溶解性远大于流动相。现在市场上有种色谱柱经过表面处理之后残留的硅羟基pKa值能达到5.5-6我不说哪家生产的，用这种柱子做你的流 动相pH控制在5.5以下拖尾的效果非常好，另外建议做碱性化合物时选择色谱柱尽量选择比表面积小，含碳量低些的 色谱柱，效果会好。色谱柱的柱效、流动相的组成、流动相的PH、柱温的控制、进样器等问题原因很多：分析物本身的性质；色谱柱问题

12、；流动相问题分析物本身的性质。柱子问题，柱子选择不当，分析的样品极性过强碱性物质。色谱柱老化，柱效降低，柱流失严重；流动相问题，PH值 选择不当，有机相比例过低等。2. 怎样避免拖尾和前沿，有何措施？选择合适的色谱条件和色谱柱，就可以避免峰拖尾和前沿在处理样品时选择合适的流动相最为重要，所以在实验设计时充分了解所要分离的物质的化学性质和溶解度、极性等 相关问题，摸条件时找到较好的流动相，是避免拖尾峰出现的最好方法。避免拖尾和前沿主要要控制好溶质的量，每种色谱方法有一定的线性范围，超过这一范围不对称峰则会出现。要看是由于什么原因造成的：分析物本身的性质：这类问题首先要选择合适的色谱柱，另样品的前

13、处理非常重要，部分样品在分析过程中分解，那 肯定是拖尾的。色谱柱问题：主要由于色谱柱柱效下降等引起，维护色谱柱或者更换流动相：流动相未起到抑制拖尾或者前沿的作用，应添加适当缓冲剂如三乙胺、醋酸等。3. 般拖尾比较厉害的是生物碱类成分的检测，你对此类物质防止拖尾有什么好的建议吗？对于生物碱类，应该选用封端了的色谱柱，减少硅羟基的作用，还有就是调节流动相的PH值来避免拖尾 对于生物碱类成分的分离关键在于加入的酸的量，因为你得让成分被色谱柱吸附后，能够很好的溶解在流动相中，即 解吸附下来才行啊，所以注意你的酸的加入量吧！还有就是选择合适的色谱柱，最重要喽！分离碱性物质，易产生拖尾，一般我们都是在流动

14、相中加点三乙胺（即碱性物质）.生物碱类液相色谱一般都会在流动相里加入少量碱（二乙胺或氨水等），使流动相的PH偏碱性。不过用普通的C18 柱来分析可能进不了几针柱效就不行了，考虑使用宽PH范围的C18柱。关于生物碱薄层问题，可以对于薄层板的话可以用10%NaOH+CMC-Na溶液进行铺板，还可以适当调节展开剂PH值 来防治生物碱拖尾。应该加三乙胺吧，及三氟乙酸等调节PH值，使用氨基的色谱柱啊，不管怎么说首先考虑的是色谱柱的选择。4. 用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？关于漂移问题： 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定 流动相发生变化，

15、解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定 泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。 流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合5. 液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？ 筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。 存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子 可能柱超载，减少进样量。6. HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 样品量不足，解决办法为增加样品量 样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱

16、子 样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器 检测器衰减太多。调整衰减即可。 检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数 检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。 检测池中有气泡。解决办法为排气。 记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。 流动相流量不合适。调整流速即可。 检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。7. 做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？ 泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理； 比例阀失效，更换比例阀即可； 泵密封垫损坏，更换密封垫即可； 溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法； 系统

17、检漏，找出漏点，密封即可； 梯度洗脱，这时压力波动是正常的。8. 我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ODS 填料表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号 的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺（TEA），将会使硅醇基的成键能 力饱和，从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。如分离情况可以，系统稳定，达到系统适用性要求，就不必保留时间的重现。

18、9. 我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查 问题的起因。 拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查； 把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查； 将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒 进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查；只用于使用过的柱子。 更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。

19、若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE 提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。10. 色谱双峰产生的可能及判断和处理HPLC分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下（不包括梯度）峰 型应对称而尖锐。但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不 到的问题，而对色谱峰难以作出合理的解释，尤其对于新手更是如此。下面根据本人几年工作的体会，提出一些看法， 向同仁指教。色谱双峰指的是明是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二

20、种物质。我将这种情况分为四种原因。1 色谱柱如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少），尤其采用单一纯物质时，可 以肯定色谱柱出问题一柱头受损或柱头固定相变脏或流失。如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大 峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头受堵，将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头 的残留物冲掉，再反过来，一般情况下就行了。当然不反冲，正冲有时也会正常的。如果峰拖尾，双峰强弱相差不大， 柱头固定相变脏或流失可能性更大，这是可以将进样那头拧开，将微孔滤片超声，柱头刮去一部分填料，重新填上新 填料拧紧，不过这种活，需要一定技术，同

21、时不能老干那种事，否则用不了几次，色谱柱就会应柱效很低而报废。2溶剂极性及进样量许多HPLC分析者对此可能不以为然，一般的HPLC的书籍和文献都不会提到这方面的内容，而这确是双峰产 生的一个很重要的原因。目前HPLC分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能。 样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。最佳的溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。当用溶剂极性强 度大的试剂，如纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大，如定量管为20ul，此条件下完全 可以肯定，单一的纯物质出双峰，第二峰比第一峰小（每次都不太一样），且拖尾，保留时间会提前（相对进样

22、量少而 言），将进样量减少一半以上，峰型将变为正常。这是样品的溶剂与流动相极性相差太大，而流动相来不及将其稀释达 到平衡造成的。上面提到进样量造成双峰的一个原因，另一个原因是，进样量不一定大，但绝对量很大，色谱图上的 双峰紧靠在一起，基本上齐高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色谱柱问题）将样品稀释再进样就可以了，这是由 于进样量过大，色谱柱过载造成的。3样品的特性有些样品由于其化学结构的特点，存在互变异构现象，而这种互变异构体无法分开，而是以一个动态平衡存在。 在色谱分析时，在一个特定的条件下，一种物质将出现双峰，双峰靠的很近，基本齐高，不拖尾，条件稍一变化，尤 其pH，双峰现象将消失，如红霉素等。有的样品紫外的色谱图上看不到双峰，但在LC-MS下，用质谱检测器，其 质谱的总离子流图上较明显，例如我分析过的农药啶虫眯（毗虫清）。4参数记录的参数一般都内定的，不必修改，但GC和HPLC的参数是不完全一致的，例如C-R3A数据记录 仪上的一般记录时间间隔GC为2ms，HPLC为5ms，如果记录间隔时间缩短，一个峰将变为二个峰或更多。