achr亚基片段联合il6dna免疫大鼠建立实验性重症肌无力模型

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1、免疫学专业毕业论文 精品论文 AChR亚基片段联合IL-6 DNA免疫大鼠建立实验性重症肌无力模型关键词：重症肌无力 DNA免疫 乙酰胆碱受体1亚基 自身免疫性疾病重症肌无力摘要：目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)1亚基。用来自不同物种的包含AChR1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白或肽段免疫一些品系的动物，可以建立实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(EAMG)，供研究重症肌无力的发病机制和寻找有效治疗方法使用。但现阶段使用的模型建立方法或材料来源缺乏，或成本高昂，成功率也相差较大。本研究用DNA免疫方法探索一种更简便、实用的E

2、AMG模型建立方法。 方法： 将含人乙酰胆碱受体亚基N端主要免疫区(AchR205)的基因、含大鼠白介素-6(IL-6)cDNA序列的基因分别亚克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒，转化DH5菌，筛选阳性克隆，进行测序鉴定。pcDNA3.1(+)/AchR a205质粒存在两处碱基突变，采用定点突变技术纠正后获得了含正确基因序列的重组质粒。构建的pcDNA3.1(+)/IL-6质粒经测序鉴定无突变。用重组质粒pcDNA3.1(+)/AchR205单独或与pcDNA3.1(+)/IL-6联合免疫雌性Lew

3、is大鼠，对照组用pcDNA3.1(+)免疫。免疫后观察实验大鼠的临床症状，并对血清抗AChR抗体、肌电图、组织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录进行检测与评估。 结果： 实验组动物出现了临床肌无力症状；肌电图重复神经电刺激(RNS)呈衰减反应；血清AChR抗体滴度增高，最高77.82pmol/L；组织学检查有肌细胞横断面钝圆、肌间隙少量淋巴细胞浸润和肌细胞中心核，酶免疫组织化学检测少部分肌细胞膜受体着色稀少；超微结构发现有线粒体空泡样变、突触后膜皱褶变少、变浅、结构简单化等退行性改变；这些变化在pcDNA3.1(+)/AchR205与pcDNA3.1(+)/IL-6双质粒共注射建模组更

4、明显。 结论： 以人AChR205基因为目的基因、大鼠IL-6基因为细胞因子佐剂、pcD-NA3.1(+)为表达载体重组的质粒pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG动物模型。正文内容 目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)1亚基。用来自不同物种的包含AChR1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白或肽段免疫一些品系的动物，可以建立实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(EAMG)，供研究重症肌无力的发病机制和寻找有效治疗方法使用。但现阶段使用的模型建立方法或材料来源缺乏，或成本

5、高昂，成功率也相差较大。本研究用DNA免疫方法探索一种更简便、实用的EAMG模型建立方法。 方法： 将含人乙酰胆碱受体亚基N端主要免疫区(AchR205)的基因、含大鼠白介素-6(IL-6)cDNA序列的基因分别亚克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒，转化DH5菌，筛选阳性克隆，进行测序鉴定。pcDNA3.1(+)/AchR a205质粒存在两处碱基突变，采用定点突变技术纠正后获得了含正确基因序列的重组质粒。构建的pcDNA3.1(+)/IL-6质粒经测序鉴定无突变。用重组质粒pcDNA3.1(+)/A

6、chR205单独或与pcDNA3.1(+)/IL-6联合免疫雌性Lewis大鼠，对照组用pcDNA3.1(+)免疫。免疫后观察实验大鼠的临床症状，并对血清抗AChR抗体、肌电图、组织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录进行检测与评估。 结果： 实验组动物出现了临床肌无力症状；肌电图重复神经电刺激(RNS)呈衰减反应；血清AChR抗体滴度增高，最高77.82pmol/L；组织学检查有肌细胞横断面钝圆、肌间隙少量淋巴细胞浸润和肌细胞中心核，酶免疫组织化学检测少部分肌细胞膜受体着色稀少；超微结构发现有线粒体空泡样变、突触后膜皱褶变少、变浅、结构简单化等退行性改变；这些变化在pcDNA3.1(+)

7、/AchR205与pcDNA3.1(+)/IL-6双质粒共注射建模组更明显。 结论： 以人AChR205基因为目的基因、大鼠IL-6基因为细胞因子佐剂、pcD-NA3.1(+)为表达载体重组的质粒pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG动物模型。目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)1亚基。用来自不同物种的包含AChR1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白或肽段免疫一些品系的动物，可以建立实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(EAMG)，供研究重症肌无力的发病机制和寻找有效治

8、疗方法使用。但现阶段使用的模型建立方法或材料来源缺乏，或成本高昂，成功率也相差较大。本研究用DNA免疫方法探索一种更简便、实用的EAMG模型建立方法。 方法： 将含人乙酰胆碱受体亚基N端主要免疫区(AchR205)的基因、含大鼠白介素-6(IL-6)cDNA序列的基因分别亚克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒，转化DH5菌，筛选阳性克隆，进行测序鉴定。pcDNA3.1(+)/AchR a205质粒存在两处碱基突变，采用定点突变技术纠正后获得了含正确基因序列的重组质粒。构建的pcDNA3.1(+)/IL-

9、6质粒经测序鉴定无突变。用重组质粒pcDNA3.1(+)/AchR205单独或与pcDNA3.1(+)/IL-6联合免疫雌性Lewis大鼠，对照组用pcDNA3.1(+)免疫。免疫后观察实验大鼠的临床症状，并对血清抗AChR抗体、肌电图、组织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录进行检测与评估。 结果： 实验组动物出现了临床肌无力症状；肌电图重复神经电刺激(RNS)呈衰减反应；血清AChR抗体滴度增高，最高77.82pmol/L；组织学检查有肌细胞横断面钝圆、肌间隙少量淋巴细胞浸润和肌细胞中心核，酶免疫组织化学检测少部分肌细胞膜受体着色稀少；超微结构发现有线粒体空泡样变、突触后膜皱褶变少、变

10、浅、结构简单化等退行性改变；这些变化在pcDNA3.1(+)/AchR205与pcDNA3.1(+)/IL-6双质粒共注射建模组更明显。 结论： 以人AChR205基因为目的基因、大鼠IL-6基因为细胞因子佐剂、pcD-NA3.1(+)为表达载体重组的质粒pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG动物模型。目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)1亚基。用来自不同物种的包含AChR1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白或肽段免疫一些品系的动物，可以建立实验性自身免疫性重症肌无力

11、动物模型(EAMG)，供研究重症肌无力的发病机制和寻找有效治疗方法使用。但现阶段使用的模型建立方法或材料来源缺乏，或成本高昂，成功率也相差较大。本研究用DNA免疫方法探索一种更简便、实用的EAMG模型建立方法。 方法： 将含人乙酰胆碱受体亚基N端主要免疫区(AchR205)的基因、含大鼠白介素-6(IL-6)cDNA序列的基因分别亚克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒，转化DH5菌，筛选阳性克隆，进行测序鉴定。pcDNA3.1(+)/AchR a205质粒存在两处碱基突变，采用定点突变技术纠正后获得了含

12、正确基因序列的重组质粒。构建的pcDNA3.1(+)/IL-6质粒经测序鉴定无突变。用重组质粒pcDNA3.1(+)/AchR205单独或与pcDNA3.1(+)/IL-6联合免疫雌性Lewis大鼠，对照组用pcDNA3.1(+)免疫。免疫后观察实验大鼠的临床症状，并对血清抗AChR抗体、肌电图、组织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录进行检测与评估。 结果： 实验组动物出现了临床肌无力症状；肌电图重复神经电刺激(RNS)呈衰减反应；血清AChR抗体滴度增高，最高77.82pmol/L；组织学检查有肌细胞横断面钝圆、肌间隙少量淋巴细胞浸润和肌细胞中心核，酶免疫组织化学检测少部分肌细胞膜受体

13、着色稀少；超微结构发现有线粒体空泡样变、突触后膜皱褶变少、变浅、结构简单化等退行性改变；这些变化在pcDNA3.1(+)/AchR205与pcDNA3.1(+)/IL-6双质粒共注射建模组更明显。 结论： 以人AChR205基因为目的基因、大鼠IL-6基因为细胞因子佐剂、pcD-NA3.1(+)为表达载体重组的质粒pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG动物模型。目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)1亚基。用来自不同物种的包含AChR1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白

14、或肽段免疫一些品系的动物，可以建立实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(EAMG)，供研究重症肌无力的发病机制和寻找有效治疗方法使用。但现阶段使用的模型建立方法或材料来源缺乏，或成本高昂，成功率也相差较大。本研究用DNA免疫方法探索一种更简便、实用的EAMG模型建立方法。 方法： 将含人乙酰胆碱受体亚基N端主要免疫区(AchR205)的基因、含大鼠白介素-6(IL-6)cDNA序列的基因分别亚克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒，转化DH5菌，筛选阳性克隆，进行测序鉴定。pcDNA3.1(+)/AchR

15、a205质粒存在两处碱基突变，采用定点突变技术纠正后获得了含正确基因序列的重组质粒。构建的pcDNA3.1(+)/IL-6质粒经测序鉴定无突变。用重组质粒pcDNA3.1(+)/AchR205单独或与pcDNA3.1(+)/IL-6联合免疫雌性Lewis大鼠，对照组用pcDNA3.1(+)免疫。免疫后观察实验大鼠的临床症状，并对血清抗AChR抗体、肌电图、组织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录进行检测与评估。 结果： 实验组动物出现了临床肌无力症状；肌电图重复神经电刺激(RNS)呈衰减反应；血清AChR抗体滴度增高，最高77.82pmol/L；组织学检查有肌细胞横断面钝圆、肌间隙少量淋巴

16、细胞浸润和肌细胞中心核，酶免疫组织化学检测少部分肌细胞膜受体着色稀少；超微结构发现有线粒体空泡样变、突触后膜皱褶变少、变浅、结构简单化等退行性改变；这些变化在pcDNA3.1(+)/AchR205与pcDNA3.1(+)/IL-6双质粒共注射建模组更明显。 结论： 以人AChR205基因为目的基因、大鼠IL-6基因为细胞因子佐剂、pcD-NA3.1(+)为表达载体重组的质粒pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG动物模型。目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)1亚基。用来

17、自不同物种的包含AChR1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白或肽段免疫一些品系的动物，可以建立实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(EAMG)，供研究重症肌无力的发病机制和寻找有效治疗方法使用。但现阶段使用的模型建立方法或材料来源缺乏，或成本高昂，成功率也相差较大。本研究用DNA免疫方法探索一种更简便、实用的EAMG模型建立方法。 方法： 将含人乙酰胆碱受体亚基N端主要免疫区(AchR205)的基因、含大鼠白介素-6(IL-6)cDNA序列的基因分别亚克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒，转化DH5菌，筛

18、选阳性克隆，进行测序鉴定。pcDNA3.1(+)/AchR a205质粒存在两处碱基突变，采用定点突变技术纠正后获得了含正确基因序列的重组质粒。构建的pcDNA3.1(+)/IL-6质粒经测序鉴定无突变。用重组质粒pcDNA3.1(+)/AchR205单独或与pcDNA3.1(+)/IL-6联合免疫雌性Lewis大鼠，对照组用pcDNA3.1(+)免疫。免疫后观察实验大鼠的临床症状，并对血清抗AChR抗体、肌电图、组织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录进行检测与评估。 结果： 实验组动物出现了临床肌无力症状；肌电图重复神经电刺激(RNS)呈衰减反应；血清AChR抗体滴度增高，最高77.8

19、2pmol/L；组织学检查有肌细胞横断面钝圆、肌间隙少量淋巴细胞浸润和肌细胞中心核，酶免疫组织化学检测少部分肌细胞膜受体着色稀少；超微结构发现有线粒体空泡样变、突触后膜皱褶变少、变浅、结构简单化等退行性改变；这些变化在pcDNA3.1(+)/AchR205与pcDNA3.1(+)/IL-6双质粒共注射建模组更明显。 结论： 以人AChR205基因为目的基因、大鼠IL-6基因为细胞因子佐剂、pcD-NA3.1(+)为表达载体重组的质粒pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG动物模型。目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要

20、免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)1亚基。用来自不同物种的包含AChR1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白或肽段免疫一些品系的动物，可以建立实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(EAMG)，供研究重症肌无力的发病机制和寻找有效治疗方法使用。但现阶段使用的模型建立方法或材料来源缺乏，或成本高昂，成功率也相差较大。本研究用DNA免疫方法探索一种更简便、实用的EAMG模型建立方法。 方法： 将含人乙酰胆碱受体亚基N端主要免疫区(AchR205)的基因、含大鼠白介素-6(IL-6)cDNA序列的基因分别亚克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChR205、p

21、cDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒，转化DH5菌，筛选阳性克隆，进行测序鉴定。pcDNA3.1(+)/AchR a205质粒存在两处碱基突变，采用定点突变技术纠正后获得了含正确基因序列的重组质粒。构建的pcDNA3.1(+)/IL-6质粒经测序鉴定无突变。用重组质粒pcDNA3.1(+)/AchR205单独或与pcDNA3.1(+)/IL-6联合免疫雌性Lewis大鼠，对照组用pcDNA3.1(+)免疫。免疫后观察实验大鼠的临床症状，并对血清抗AChR抗体、肌电图、组织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录进行检测与评估。 结果： 实验组动物出现了临床肌无力症状；肌电图重复神经电刺激

22、(RNS)呈衰减反应；血清AChR抗体滴度增高，最高77.82pmol/L；组织学检查有肌细胞横断面钝圆、肌间隙少量淋巴细胞浸润和肌细胞中心核，酶免疫组织化学检测少部分肌细胞膜受体着色稀少；超微结构发现有线粒体空泡样变、突触后膜皱褶变少、变浅、结构简单化等退行性改变；这些变化在pcDNA3.1(+)/AchR205与pcDNA3.1(+)/IL-6双质粒共注射建模组更明显。 结论： 以人AChR205基因为目的基因、大鼠IL-6基因为细胞因子佐剂、pcD-NA3.1(+)为表达载体重组的质粒pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG

23、动物模型。目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)1亚基。用来自不同物种的包含AChR1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白或肽段免疫一些品系的动物，可以建立实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(EAMG)，供研究重症肌无力的发病机制和寻找有效治疗方法使用。但现阶段使用的模型建立方法或材料来源缺乏，或成本高昂，成功率也相差较大。本研究用DNA免疫方法探索一种更简便、实用的EAMG模型建立方法。 方法： 将含人乙酰胆碱受体亚基N端主要免疫区(AchR205)的基因、含大鼠白介素-6(IL-6)cDNA序列的基因分别亚克隆人真核表达载体pcDN

24、A3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒，转化DH5菌，筛选阳性克隆，进行测序鉴定。pcDNA3.1(+)/AchR a205质粒存在两处碱基突变，采用定点突变技术纠正后获得了含正确基因序列的重组质粒。构建的pcDNA3.1(+)/IL-6质粒经测序鉴定无突变。用重组质粒pcDNA3.1(+)/AchR205单独或与pcDNA3.1(+)/IL-6联合免疫雌性Lewis大鼠，对照组用pcDNA3.1(+)免疫。免疫后观察实验大鼠的临床症状，并对血清抗AChR抗体、肌电图、组织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录进行检测与评估。

25、结果： 实验组动物出现了临床肌无力症状；肌电图重复神经电刺激(RNS)呈衰减反应；血清AChR抗体滴度增高，最高77.82pmol/L；组织学检查有肌细胞横断面钝圆、肌间隙少量淋巴细胞浸润和肌细胞中心核，酶免疫组织化学检测少部分肌细胞膜受体着色稀少；超微结构发现有线粒体空泡样变、突触后膜皱褶变少、变浅、结构简单化等退行性改变；这些变化在pcDNA3.1(+)/AchR205与pcDNA3.1(+)/IL-6双质粒共注射建模组更明显。 结论： 以人AChR205基因为目的基因、大鼠IL-6基因为细胞因子佐剂、pcD-NA3.1(+)为表达载体重组的质粒pcDNA3.1(+)/AChR205、pc

26、DNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG动物模型。目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)1亚基。用来自不同物种的包含AChR1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白或肽段免疫一些品系的动物，可以建立实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(EAMG)，供研究重症肌无力的发病机制和寻找有效治疗方法使用。但现阶段使用的模型建立方法或材料来源缺乏，或成本高昂，成功率也相差较大。本研究用DNA免疫方法探索一种更简便、实用的EAMG模型建立方法。 方法： 将含人乙酰胆碱受体亚基N端主要免疫区(AchR205)的基因、含大鼠白介素-6(

27、IL-6)cDNA序列的基因分别亚克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒，转化DH5菌，筛选阳性克隆，进行测序鉴定。pcDNA3.1(+)/AchR a205质粒存在两处碱基突变，采用定点突变技术纠正后获得了含正确基因序列的重组质粒。构建的pcDNA3.1(+)/IL-6质粒经测序鉴定无突变。用重组质粒pcDNA3.1(+)/AchR205单独或与pcDNA3.1(+)/IL-6联合免疫雌性Lewis大鼠，对照组用pcDNA3.1(+)免疫。免疫后观察实验大鼠的临床症状，并对血清抗AChR抗体、肌电图、组

28、织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录进行检测与评估。 结果： 实验组动物出现了临床肌无力症状；肌电图重复神经电刺激(RNS)呈衰减反应；血清AChR抗体滴度增高，最高77.82pmol/L；组织学检查有肌细胞横断面钝圆、肌间隙少量淋巴细胞浸润和肌细胞中心核，酶免疫组织化学检测少部分肌细胞膜受体着色稀少；超微结构发现有线粒体空泡样变、突触后膜皱褶变少、变浅、结构简单化等退行性改变；这些变化在pcDNA3.1(+)/AchR205与pcDNA3.1(+)/IL-6双质粒共注射建模组更明显。 结论： 以人AChR205基因为目的基因、大鼠IL-6基因为细胞因子佐剂、pcD-NA3.1(+)为表

29、达载体重组的质粒pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG动物模型。目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)1亚基。用来自不同物种的包含AChR1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白或肽段免疫一些品系的动物，可以建立实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(EAMG)，供研究重症肌无力的发病机制和寻找有效治疗方法使用。但现阶段使用的模型建立方法或材料来源缺乏，或成本高昂，成功率也相差较大。本研究用DNA免疫方法探索一种更简便、实用的EAMG模型建立方法。 方法： 将含人乙酰胆碱受体亚

30、基N端主要免疫区(AchR205)的基因、含大鼠白介素-6(IL-6)cDNA序列的基因分别亚克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒，转化DH5菌，筛选阳性克隆，进行测序鉴定。pcDNA3.1(+)/AchR a205质粒存在两处碱基突变，采用定点突变技术纠正后获得了含正确基因序列的重组质粒。构建的pcDNA3.1(+)/IL-6质粒经测序鉴定无突变。用重组质粒pcDNA3.1(+)/AchR205单独或与pcDNA3.1(+)/IL-6联合免疫雌性Lewis大鼠，对照组用pcDNA3.1(+)免疫。免疫

31、后观察实验大鼠的临床症状，并对血清抗AChR抗体、肌电图、组织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录进行检测与评估。 结果： 实验组动物出现了临床肌无力症状；肌电图重复神经电刺激(RNS)呈衰减反应；血清AChR抗体滴度增高，最高77.82pmol/L；组织学检查有肌细胞横断面钝圆、肌间隙少量淋巴细胞浸润和肌细胞中心核，酶免疫组织化学检测少部分肌细胞膜受体着色稀少；超微结构发现有线粒体空泡样变、突触后膜皱褶变少、变浅、结构简单化等退行性改变；这些变化在pcDNA3.1(+)/AchR205与pcDNA3.1(+)/IL-6双质粒共注射建模组更明显。 结论： 以人AChR205基因为目的基因、

32、大鼠IL-6基因为细胞因子佐剂、pcD-NA3.1(+)为表达载体重组的质粒pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG动物模型。目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)1亚基。用来自不同物种的包含AChR1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白或肽段免疫一些品系的动物，可以建立实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(EAMG)，供研究重症肌无力的发病机制和寻找有效治疗方法使用。但现阶段使用的模型建立方法或材料来源缺乏，或成本高昂，成功率也相差较大。本研究用DNA免疫方法探索一种更简便

33、、实用的EAMG模型建立方法。 方法： 将含人乙酰胆碱受体亚基N端主要免疫区(AchR205)的基因、含大鼠白介素-6(IL-6)cDNA序列的基因分别亚克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒，转化DH5菌，筛选阳性克隆，进行测序鉴定。pcDNA3.1(+)/AchR a205质粒存在两处碱基突变，采用定点突变技术纠正后获得了含正确基因序列的重组质粒。构建的pcDNA3.1(+)/IL-6质粒经测序鉴定无突变。用重组质粒pcDNA3.1(+)/AchR205单独或与pcDNA3.1(+)/IL-6联合免疫

34、雌性Lewis大鼠，对照组用pcDNA3.1(+)免疫。免疫后观察实验大鼠的临床症状，并对血清抗AChR抗体、肌电图、组织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录进行检测与评估。 结果： 实验组动物出现了临床肌无力症状；肌电图重复神经电刺激(RNS)呈衰减反应；血清AChR抗体滴度增高，最高77.82pmol/L；组织学检查有肌细胞横断面钝圆、肌间隙少量淋巴细胞浸润和肌细胞中心核，酶免疫组织化学检测少部分肌细胞膜受体着色稀少；超微结构发现有线粒体空泡样变、突触后膜皱褶变少、变浅、结构简单化等退行性改变；这些变化在pcDNA3.1(+)/AchR205与pcDNA3.1(+)/IL-6双质粒共注

35、射建模组更明显。 结论： 以人AChR205基因为目的基因、大鼠IL-6基因为细胞因子佐剂、pcD-NA3.1(+)为表达载体重组的质粒pcDNA3.1(+)/AChR205、pcDNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG动物模型。特别提醒：正文内容由PDF文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 。如还不能显示，可以联系我q q 1627550258 ，提供原格式文档。 垐垯櫃换烫梯葺铑?endstreamendobj2x滌?U閩AZ箾FTP鈦X飼?狛P?燚?琯嫼b?袍*甒?颙嫯?4)=r宵?i?j彺帖B3锝檡骹笪yLrQ#?0

36、鯖l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛渓?擗#?#綫G刿#K芿$?7.耟?Wa癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb皗E|?pDb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$F?責鯻0橔C,f薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵秾腵薍秾腵%?秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍G?螪t俐猻覎?烰:X=勢)趯飥?媂s劂/x?矓w豒庘q?唙?鄰爖媧A|Q趗擓蒚?緱鳝嗷P?笄nf(鱂匧叺9就菹$