饲料中粗蛋白质的测定

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1、畜禽生产与疾病防治畜禽营养与饲料加工技术饲料中粗蛋白质的测定、实验目的1. 了解饲料中粗蛋白质的测定方法的适用范围、仪器设备的使用方法2. 掌握饲料中粗蛋白质的测定的原理和方法3. 学会饲料中粗蛋白质的测定的实验操作及结果的分析E3二、适用范本法适用于配合饲料和单一饲料。三、原理本法采用凯氏半微量定氮法，其原理是试样在催化剂作用下，用 浓硫酸破坏饲料中的有机物质，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进 行蒸馏，使氨逸出，同时用硼酸溶液吸收并与之结合成为四硼酸铵， 然后以甲基红一溴甲酚绿混合作指示剂，用盐酸标准溶液滴定，测出 氮的含量，根据不同的饲料再乘以一定的系数（通常用系数6. 25计 算），计算

2、出这一数据占样品质量的百分比，以此作为粗蛋白质的含量。本法不能区别蛋白氮和非蛋白氮，在测定结果中除蛋白质外，还 有氨基酸、酰胺、铵盐和部分硝酸盐、亚硝酸盐等，故以粗蛋白质表 /示之o四、仪器设备1.实验室用样品粉碎机或研钵。52分样筛孔径0J3分析天平 感量0000 1 g。装置半微量水蒸气蒸馏式4.凯氏烧瓶100 mLo6容量瓶100 mLo7移液管10 mLo8mL 或 250 mLo10其他 试剂瓶、洗瓶、消煮炉或电炉。五、化学试剂1硫酸(GB 625)分析纯，含量为98%，无氮。2混合催化剂04g硫酸铜，5个结晶水(GB 665), 6g硫酸钾(HG3-920)或硫酸钠(HG3-908

3、)，均为分析纯，磨碎混匀。3.氢氧化钠(GB 628)分析纯，配成40%氢氧化钠溶液。4硼酸(GB 628)分析纯，配成2%硼酸溶液。5.混合指示剂 甲基红(HG3-958)0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿(HG3 -1220)0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为3个月。 6盐酸标准溶液硼砂或无水碳酸钠标定0.1 mol/L盐酸(HC1)标准溶液：8.3 mL盐酸(GB 622)，分析纯, 注入1000 mL蒸馏水中。0.02 mol/L盐酸(HCl)标准溶液：1.67 mL盐酸(GB 622)，分析 纯，注入1000 mL蒸馏水中。7硫酸铵(GB 1396)分析纯，干燥。六、测定步

4、骤1 消化准确称取试样021 g （含氮量580 mg）准确至0.000 2 g,无 损失地放入凯氏烧瓶中，加入6.4 g混合催化剂，与试样混合均匀， 再加12 mL硫酸和两粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于消煮炉或电炉上加热， 开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360410C）,直 至溶液呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。2 蒸馏将上述消化液冷却，加入20 mL蒸馏水，转入100 mL容量瓶中， 洗净，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。将半微量蒸 馏装置的冷凝管末端浸入装有20 mL、2%硼酸吸收液和2滴混合指示 剂的锥形瓶内。用移液管准确移取10 mL试样分解液，注入蒸

5、馏装置 的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10 mL、40%氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞 好，并在入口处加水密封，防止漏气。加热蒸馏4 min,降下锥形瓶， 使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1 min，用蒸馏水冲洗冷凝管末 端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。3 滴定蒸馏后的吸收液立即用01 mol/L或0.02 mol/L盐酸标准液滴 定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点。4. 空白测定在测定饲料样品中含氮量的同时，应做一空白对照测定，即各种 试剂的用量同，但不加样品，这样可以校正因试剂不纯所发生的误差。消耗0.1 moI/L盐酸标准溶液的体积

6、应不超过0.2 mL。消耗0.02 mol/L盐酸标准溶液的体积应不超过0.3 mL。七、结果计算1 计算公式饲料中粗蛋白质的质量分数(%) = (V -V ) X cX 0. 0140X 6.2530X (V /V ) X(100/m)1 2式中：m样品的质量，g;V试样分解液总体积，mL；1V 试样分解液蒸馏用体积(mL)；2V 试样滴定时所需酸标准溶液的体积(mL)；3V 空白滴定时所需酸标准溶液的体积(mL)；0C盐酸标准溶液的浓度(mol/L)；0. 0140每ml HCl标准溶液相当于N的克数；6.25氮换算成蛋白质的平均系数。2 重复性每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。当粗蛋白质含量在25%以上，允许相对偏差为1%。当粗蛋白质含量在10%25%时，允许相对偏差为2%。当粗蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差为3%。3蒸馏步骤的检验精确称取02g硫酸铵，代替试样，按上述步骤操作，测得硫酸铵 含氮量为21.19 %0.2%,否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否 正确。作业 学生完成玉米中蛋白质含量的测定配音 文本无制作 说明无