蛋白质浓度的测定实验报告
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1、 蛋白质浓度的测定一 试验原理考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合,这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色,最大吸收峰在465nm。当他与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色,其最大吸收峰改变为595nm。考马斯亮蓝G250蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感性。在一定范围内,考马斯亮蓝G250蛋白质复合物呈色后,在595nm下,吸光度与蛋白质含量呈线性关系。故可用于蛋白质浓度的测定。二 试验设备与试剂设备:普通离心机,721型分光光度计试剂:标准蛋白液(100ug/ml)三 实验材料新鲜绿豆芽四 实验内容1. 标准曲线的制备取9支干净的试管,按表进行编号并加入试剂
2、。管试剂1(空白)23456789标准蛋白液/ml0.9%nacl/ml考马斯亮蓝染液/ml蛋白质含量/(ug/ml)01.04.000.10.94.0100.20.84.0200.30.74.0300.40.64.0400.50.54.0500.60.44.0600.80.24.0801.004.01002. 样品蛋白的测定(1) 样品蛋白液制备 准确称取2g新鲜绿豆芽胚轴的部分,研磨成匀浆,离心分离(4000r/min,10min)。取上清液用0.9%nacl定容到10ml。(2) 含量测定 另取两只干净的试管,加入样品液0.1ml,0.9mlnacl和考马斯亮蓝染液4.0ml,混匀。室温
3、静置3min,与波长595nm处比色,读取吸光度。五 实验结果1. 标准曲线结果如表所示,并以吸光度为纵坐标,个标准液含量为横坐标做标准曲线。试管号1234567899蛋白质含量010203040506080100A5950.0000.0690.0890.2260.3390.4000.4700.5700.730 2. 样品蛋白含量的测定样品蛋白的比色结果如表,根据直线方程求出每支试管中蛋白质含量。试管号A595蛋白质含量100.18625.15110.17924.17 根据公式求出样品绿豆芽蛋白质含量 六结果与讨论 结果: 绿豆芽蛋白质含量=1233.0ug/g 讨论:1.试液为混合均与就取样2.量取溶液时读数有误差3.读取A值时有读数误差4.比色杯中的误差
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