新型ZnSCds-C纳米复合材料的制备及其在污染物去除中的应用研究

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1、复口人学硕士学位论文中文摘要新型PT乏氧显像剂8F4的临床研究第一部分新型PET乏氧显像剂18FmHX4的 制备及临床应用安全性评价【摘要】目的：评价新型ET乏氧显像剂18H4的标记方法，并观 察其临床应用安全性。材料与方法：本研究方案经复旦大学附属华山医院伦理委员会批准，检查前均征得患者知情同意,并签署知情同意书.以新型硝基咪唑类化合物标记前体X4（一（一硝基一1H一咪唑基）甲基。H,2，3。三唑3。(硝基苯磺酰氧基)丙醇乙酯）为原料，通过博F离子亲核取代反应标记，最终产物博FX4用标准品坤FHX4在PLC下 对照确认，记录标记次数及每次的标记率和产率。209年6月至10年月1例肿瘤患者入组

2、本研究.所有患者行18FH4 PETC显像，分别于FX4注射后0及20min进行图像采集，观察8F-X的临床应用安全性及图像质量。结果:共进行18.H4标记15次,标记时间约为55min,平均产率为5士5(ES）；质量控制结果均在正常范围内.16例患者注射F。HX4后均未出现任何不良反应。显像清晰, 1F。H4能选择性地浓聚于肿瘤组织内。结论：1FX标记方法可靠、 方便，HX4临床应用安全,显像清晰,并能选择性地在肿瘤内浓聚，为 进一步临床研究打下了坚实的基础。【关键词】18F-HX4;放射性核素标记:安全性；PE；肿瘤乏氧【中图分类号】R8第二部分新型PET乏氧显像剂1FH4的 肿瘤乏氧显像

3、评价【摘要】目的：对比新型PET乏氧显像剂1-HX4与传统PET乏氧显 像剂18F-MSO在恶性肿瘤患者的PET/T显像,并与内源性乏氧标志 物CAX的表达水平进行相关性分析，评价18F-H4作为PT乏氧显88 / 88复旦大学硕士学位论文像剂的乏氧检测能力。材料与方法：2009年6月至2010年1月6例行F。H PET/乏氧显像的患者入组本研究。所有患者于FHT/T显像第二天行FFMSOET/T显像。其中10例择日行手术, 手术切除肿瘤送病理科作CA 免疫组化染色和表达分析。比较FHx4及博F.FMISO显像SUVmax与T/M值，并分别与C IX表达水平进行相关性分析。结果：18F。HX与

4、18FMISO显像均表现为例 （11个病灶)显像阳性，7例(9个病灶)显像阴性。1个阳性病灶”FHX4 90m及120min显像的UVmax及TM值分别为1.3l士033、1.6士42 （90in）、129士0.、17士0。32(12min）。FSO 20mi显像的UVax及/值分别为73士01、士0.65。CA X免疫组化染 色分析，10位患者的1个标本中总阳性表达率为818%，表达(.)（+) (+)(+)者分别为2、3、3例。比较MFH4 90in显像与120a显像，SUVmx、TM值间的差异均无统计学意义（t0。2，06；t=。771，=。11)。F.MIS显像的SUVma及T/值均高

5、于18FHX4。X显像SUx与A IX表达水平高度相关，18FMSO显像的SUax与CAIX表达水平中度相关，两者的 值均与IX表达水平无显著相关性.结论：18FHX49mi显像与 120min显像无显著差异，18FFSO显像SUmax及T值高于 ”F4,但8HX显像与C IX表达水平关系更密切,1F。HX4可 作为PET乏氧显像剂应用于肿瘤乏氧显像,比8F-FIS更真实反应肿瘤乏氧情况。【关键词】18H;18FMI;PT；C IX;肿瘤乏氧【中图分类号】R8第三部分8F-FDG与肿瘤乏氧检测【摘要】 目的：分析8FG显像与乏氧显像及CAX表达水平的相关性，探讨8F显像与乏氧显像及肿瘤乏氧的关

6、系，评价8FH4 的临床应用价值.材料与方法:200匀z 月至210年1月2例行18FHX4 及1 8F。FMISO PT/CT乏氧显像的患者于第三天行1 F-FD PET/C显 像。其中7例患者,显像后择同行手术.分析18DG显像SUVm3复旦人学硕_J学位论文与18.HX4、储FIO显像SVmx、TM值的相关性及其与CA IX 表达水平的相关性。结果:FDG显像，12例患者的6个病灶均表 现为阳性,SUVx平均值为1。4+.71。FFDG显像SUVx与 1FHX4、MFMISO显像的Uma、TM值以及C X表达水平无明显相关性。结论：培F。DG P显像不能特异性反映肿瘤乏氧情况, 与8FH

7、X4联合应用，能够提供更完整的肿瘤信息。【关键词l坶FHX;1 8F。G；PE；AI；肿瘤乏氧【中图分类号】R8复旦大学硕士学位论文En is AstractThe ClinicaI Reerc nA New HypoxiaTracer18FHX4Pat ITe Radiolabeli and Clnical SfetyEluatonof 18FHX4Prse：Evalatio the radiobelati eto adcincal safety fsFHX4aterialsMetho：s thnw nitroimdzoe compoud,4,spreursor,Faiolabeledvan

8、uclepilicsubstituo，The ial dct,FHX4,was cmfir b copaisonwith tandd 19Xnde HPLCTimes of rdiolbelation，aiolabeling efiiencynd prouctivit f ach ti wee crd16 caesof to atit om June 2009o Jauary 20 1 wer nrl in。Allthe atentunderwent the FHX4 P/Tscan adinordonsnsweesnedn advancemagesere aquired 90min and

9、1 2min at1ij ein of8FHX4respectivelyObserethe clinicl saty8F-HX4 andge quality of 18HX4 PE/Tesults:FX4 a adolabe1 tetotally。T reenio tim of raioacte pea oF-HX4 was cositentwhthe UV pak stndrd 1 9F-X4Radiochemical prty98an pecificactity50GB/m1Qulityotol esutwere al iin thenmaeNvr eation was bseredate

10、r inj etion an all e 1 6 paietsTe images acquired er clea whichshht 18F。H ccumuled in tr tisue seetivl.Concuio：heradoabeaomthodof埔FHwaseableonvein。he appction 18F-HX4 is clincal saf.Key words：FHX4,rdiolel，linial safety，PET，tuo hypxa Chinese book cIasiicatOn cde:85复旦人学硕1:学位论文Prtlvluation of18F。HX4 a

11、New PET xi ImaingPuros:Compe博FHwh trdtinal E ypimaging aget，博F。MIS ad compare bth f theimgng aget ith he endogeous hpxiaarkers，CA tevaluae einiclpplication f埔X4 Meralsand thos：Te 16 patts ergong哺HX4 PET/CT in1artI underwnt 8FFISO PETCT the secod ayTn O he 1 6ptetsha sugey ater and e umoresctionswere

12、sent to patoogyaafo imnohitochicalasis o CA IX expeonomparte SUVmax ad /M 1FHX4 and博-MI。Crelato analses bete th imging agnts andAIX wer doerespectively。Rsult：n both F-HX4and 18FMISO PE/CT,lesons o sevpatients show egtive nd lss ofeother nine paet shw oitive.Whilen8FPE/C the eageUVmax an TM a 90minan

13、120min othe11ositive eisions were 31士0。33，1.6 4-（90mi)and.9 4 0.37,16士O3(20in)，thearag SVm andTMa 10min in8F-FMISOere1。73+0.1,2。00土0.65Theimuohitheialanalyis f C Iexpesonshowed theositive ate as 81。for1 1 lesons fo ptents an nmbrs f（），（),（+）,（+）ere 2，3,sepatdlyere ws no significa differnce betwn e i

14、mages1aqreat 90 n and at 1 0nafer njetin o HX4（=062,p=0.66：t771，p-0。1 ).he avea SUVmax andTM ofFFMSOwerehiher han to of陪F-Hhe SUVmax of F-X whighycrrlad with CA X epressonand tat of 8FFMIO wa moderatelycorrelae wtCA IX exprsinThe TM both te iming agnts werencorrelate wth CA IXpresion。Conclusn：Ahough

15、th SUVmaan M of FISO were higer thanhose of FHX4e corlation1etween8FHX4 and CA I as iherthan thatewee 8FFMIO andA F-H4a be used as ypoxa iaging agentwich ay beIbetter tsFFMISO。Ky wo:18F-HX:8F-FMSO；PE;CA IX：tmor ypoxaCine bokcassficatOncode:6复旦大学硕士学位论文Part18FGad Tumrypoxa nAsesment moHypxiaupse：omre

16、18-FDG with 18X4 and CA IX。Analyze erlatinsipamog1FFDG，18HX4 ad A I xpresion.Merals1ad eds:12 ofthe 16 patients undegoin8F-HX4ECT i PtI1underwntFFD PETCThehrdayevenof the 2tintsha1surgeynalze t orreltion of SVmx of 8FFG with SUma aT/Mof-X4 fr all te 12paients。Fr thos tht ad urgery，als analyzthe corr

17、elatin beteenSUVax of18FDG n CA IX prion Resuls:16eionsrom 2 patsallowFFDG upta and the eae SUVmx w 1 145。1。Sgnifcancrrelto ws fudnetheeteen8DG and8F.H4。nor btwen 18FFG a CA IXepessionCnclsi：博F。FG canotrefect thsituton oftuourypxiaCmbinede o18F-HX4 an18F-FDG ride ore cplt uminformaioeadin moreappopi

18、at theapeut planandpromisigprogosKy ords：18FH4；18FFG;PET；A IX；umoryoxaChnes ookcassfctioncode：87复旦大学硕士学位论文中英文缩写词英文缩写英文全称中文名称A IXCrboni AnhydaseIX碳酸酐酶9CDCCelivisincl roten细胞分裂周期蛋白 CTComputeid mography计算机断层扫描 EPOrythrpoitin促红细胞生成素FF1orodexglucose氟脱氧葡萄糖FMISOForomionidazoe1-H1.（318F】氟2羟基 丙基）一2一硝基咪唑GLUT

19、luco poter 葡萄糖转运蛋白HGF HpatocytGrwth Factr 肝细胞生长因子 HIF一1 yxaiucedactor 缺氧诱导因子一1 MIH Intensi odated Radion调强放射治疗ThepyPTPostron Emsion Tmorah正电子发射计算机断层显像DGlatelet。derved Growh Facto血小板源性生长因子SPStrepavidinpersidas链霉素亲和过氧化物酶SPCTSngle photon missioncomute单光子发射计算机断层tomgray显像VStdardieUpake Valu标准摄取值VVacularE

20、ndothelGrowt血管内皮细胞生长因子FacorVoolum f Interst三维感兴趣区复口人学颁1学位论义鸪E刍刖昌乏氧,是指可利用的氧减少或氧分压降到临界值以下的状态，限制 甚至终止细胞、组织和器官的生理功能。肿瘤乏氧，即肿瘤供氧不足， 在实体肿瘤中是一个常见现象,亦是恶性肿瘤的一个重要特征【。1955 年,Thominson和ra在分析163例肺鳞癌新鲜手术标本时首次发现 乏氧细胞。在显微镜下他们发现：肿瘤细胞是以血管为中心呈环状排列, 在靠近血管的那些细胞由于氧和营养物质供应充分，细胞增殖迅速:在 离血管半径超过00肛m的区域,细胞大量坏死形成坏死区;而介于这两者之间有一层厚

21、度约为10Um20pm的细胞层,由于距离血管有一定距离，使氧扩散的速率逐渐减慢,氧张力下降,导致这部分细胞氧供不足， 即为乏氧细胞jj。根据形成机制的不同，肿瘤乏氧可分为慢性乏氧和急性乏氧两种4】。 远离血管的肿瘤细胞因超过了氧的有效弥散距离而处于乏氧状态，这种 由于超过了功能性血管有效供氧范围而引起的乏氧称为慢性乏氧;由于 肿瘤血管网结构和功能异常或肿瘤组织间液压升高使血管内血流暂时 减少或阻滞，导致血管周围细胞缺氧，这种由血管原因所致的短暂血流 中断,引起血管周围细胞乏氧称为急性乏氧”，6】.实验观察及研究表明:乏氧可诱导肿瘤细胞内生长因子(HG一1 【、 HGF.2a)、血管内皮生长因子

22、（EF）和细胞分裂周期蛋白(CDC） 的表达，导致细胞对放疗、化疗及生物治疗的敏感性显著降低,从而大 大降低射线、药物等对肿瘤细胞的杀伤力71 。此外,乏氧细胞由于处于严重的缺氧状态,主要依靠糖的无氧酵解维持存活,此时的肿瘤细胞无分裂能力，但仍保持其增殖能力，一旦乏氧状况得到改善即可分裂, 成为肿瘤复发及转移的重要危险因素（H,】.目前有不少针对肿瘤乏氧的治疗措施，包括利用先进的调强放疗 (IRT）技术给予乏氧肿瘤区域高剂量的照射【6,t7】、通过确定再氧合状态调整放疗分割方式【l819】、针对性地应用乏氧增敏剂，并进行有效的监控和评估等【0211。此外,些能在乏氧条件下被激活或是能特异性地聚

23、集于乏氧组织中的新型化疗药物也正在研发中【221。因此,如果能在治 疗前检测肿瘤的乏氧范围和程度，并根据肿瘤的乏氧状态信息制定出个 体化的治疗方案,将有可能改善疗效及预后2引.近年来，随着影像学、免疫学、分子生物学以及计算机技术的发展,已建立了多种较可靠的恶性肿瘤乏氧检测方法。其中，应用较广泛的具复旦大学硕士学位论文体方法主要有以下四种：（1)氧电极测定;（2)组织形态学分析；（3) DNA带断裂分析；(4）乏氧标志物的测定。但各方法均存在一定的局限性。氧电极测定是目前唯一能够直接测定肿瘤含氧状况的方法,被视为肿瘤乏氧检测的“金标准2,5,但此法具有工作量大、创伤性大、结果较实际情况偏高、反映

24、肿瘤整体乏氧状况能力差以及增加肿瘤转移机 会等不足，使其实际应用受到限制【6.291。组织形态分析通过分析肿瘤的供血情况（肿瘤组织内毛细血管间 距、血管密度、肿瘤坏死程度、周围正常组织内的血管与肿瘤最近的距 离等）间接反映肿瘤的含氧量【30,31】，是最早应用于临床的方法，但是当 供应肿瘤的血管内血液携氧不足时,其分析结果可能无法真实反映肿瘤 的含氧情况132】.NA断裂带分析则是根据有氧细胞与乏氧细胞受到电离辐射后 DN损伤程度的不同(有氧细胞约为乏氧细胞的34倍）判断肿瘤的 乏氧状况【33，34】，但此方法只适用于单次大剂量（4Gy）的电离辐射后， 这在很大程度上限制了临床应用【35。近年

25、来,现代分子生物学和功能性影像学迅速发展,乏氧标志物的检测成为研究热点.乏氧标志物根据其来源不同可分为内源性乏氧标志 物和放射性乏氧标志物。前者是肿瘤细胞在乏氧状态下为了适应生长微环境上调的一些内源性基因表达,如乏氧诱导因子。（IF1）、碳酸酐 酶9（CAIX)等【3 ，应用特异性抗体和免疫组化技术测定肿瘤中内源 性乏氧标志物的表达水平可间接反映肿瘤的含氧情况：后者则是一些在 乏氧条件下能在乏氧细胞中滞留的外源性化合物,对其进行放射性核素标记后注入体内,待其在体内分布稳定后再进行PE、PET/T或SPEC 显像，可以对肿瘤乏氧进行定性和定量检钡l7,3,其中具有代表性的有18-FSO、“Cu。

26、AT等.上述各种检测方法中，除放射性乏氧标志物检测外,均属有创性活 体组织检测,易受样本误差影响,且不易进行重复测定。而放射性乏氧标志物的测定是利用放射性核素示踪技术进行显像的一种影像学检查 方法，属于无创性检查;能对肿瘤整体显像进而全面地反映肿瘤的乏氧 状况：重复检测简单方便，可进行动态的肿瘤乏氧监测,因此被认为是 目前最有前途的肿瘤乏氧检测方法之一。根据底物的不同，放射性乏氧标志物可分为三大类【9】：（1)以2.硝基咪唑为底物的“香草型标志物(“vanillaarkers）；(2)以螯复日大学硕j学位论文合金属为底物的“巧克力”型标志物（“chocole”mrkrs）；（3）同 时含有螯合

27、金属和2硝基咪唑的“巧克力旋转型标志物.其中，“香 草”型标志物亦称为硝基咪唑类化合物，是目前研究最广泛的放射性乏氧标志物。硝基咪唑是一种亲脂性的辛醇,其水分离系数为2，因此很容易 从血液扩散到组织内，并通过细胞膜进入细胞内。硝基咪唑进入细胞后， 在细胞内硝基还原酶的作用下,有效基团（RN02）发生还原，产生自 由基阴离子(02）。在正常氧水平的细胞中,还原基团可重新被氧化 并扩散到细胞外：而在乏氧细胞中,由于氧缺乏RN02无法再氧化,而 是被进一步还原为RHOH或N2，NHOH或RN2与细胞内含硫基 的大分子物质通过共价键不可逆结合进而滞留在乏氧细胞内。将硝基眯 唑用放射性核素标记后经静脉注

28、入人体,经过一定的时间,当其在体内 的浓度分布相对稳定后,可使用ET、TT或PET扫描仪在体外探测体内放射性核素发出的信号，从而确定放射性乏氧显像剂在体内的部位,由此得到其在体内的分布图像【40,41”】.大量研究已证实了硝基咪唑 类化合物在头颈部肿瘤、肺癌、前列腺癌、鼻咽癌和脑胶质瘤等肿瘤中 作为乏氧显像剂的可行性【4H4.1F-FMO是目前临床上公认的硝基咪唑类乏氧显像剂，在过去的2年里一直被用于肿瘤乏氧检测，是第一个用于肿瘤乏氧检测的PET 乏氧显像剂45481。但是正常组织对18FMIS的清除率慢、乏氧区域和 周围正常组织对比不明显、成像时间晚进而造成影像质量下降、患者等 待时间长等缺

29、点一定程度上限制了其临床应用。因此,需要发展一种更 理想的乏氧显像剂,在不减低乏氧检测灵敏度的同时克服8FMISO的缺点.近年来，研究人员对州F.FMISO的衍生物进行了大量的研究，包括：lBFAA4，50】、I 8F.FT5】、18F-FEIMl52,3】、1F.FIs4】、1FE【s，56】、18FEFl57】及4I-AZ8_0】等。但是，大多数研究尚处于临床前试验阶段,临床试验报道少,且各项研究结果间存在很大差异，尚缺乏统一的结论。1FHX4是目前最新的1 FFMISO衍生物之一,它在8F和2硝基咪唑基团之间插入了三唑环。目前,已有两家中心（USC中心、Masto 中心）对。HX进行了的

30、研究.临床前研究显示,博FHX4肌肉摄取 低，J下常组织清除率强,在嫁接了异种肿瘤的小鼠以及患有特发性肿瘤 的猴子中信噪比高。而临床研究结果则显示:18FHx4的J临床应用安全，IO复旦大学硕士学位论文注射后无明显的不良反应，TM值介于.10。与其他的硝基咪唑类显像剂进行比较发现:(1）对于头颈部肿瘤，18FHX4注射后5580 分钟时即可显示良好的T/M值（14）,而其他显像剂通常需要等待120。24分钟后才可进行显像；(2）在肺癌中,博F.HX4的/M值与 埔FISO相似,且随显像时间的延长仅中度增高，提示较短的等待时 间（约0分钟）即可进行显像；（3）全部数据显示0分钟时是18FH4 的

31、最佳成像时间。临床前研究及临床研究结果均提示，18F.HX在一定 程度上克服了博FFMIS清除率慢、乏氧区域和周围正常组织对比不明显、成像时间晚等不足,具有良好的研究前景【611。本课题自主标记MF.HX4并对其进行研究。主要分三个部分进行， 第一部分主要观察18F.HX4的标记过程及其临床应用的安全性；第二部 分对比了18F.HX4显像与8F。FMIO显像,并分别与CAIX表达水平进 行相关性分析，评价1.X4作为PET乏氧显像剂的乏氧检测能力;而 在第三部分中,则进行了F-显像与乏氧显像以及A I表达水平 的相关性分析，进一步探讨18。X的临床应用价值。复日J大学硕士学位论文第一部分新型P

32、ET乏氧显像剂18-HX4的制备及临床应用安全性评价肿瘤中普遍存在乏氧的情况，乏氧能降低肿瘤对治疗的敏感性61， 严重影响疗效及预后621.肿瘤乏氧显像是目前国内外研究的热点,但是 仍缺乏一个理想的乏氧显像剂。埔F-HX4是一种新型PET乏氧显像剂, 本研究自主标记1FH并进行16例肿瘤患者的乏氧显像，对1.H4 的同位素标记方法及临床应用安全性进行评价。材料与方法1实验材料及仪器11主要试剂(1）H4标准品及前体：纯度大于99%,由西门子公司分子影像部门提供。(2）磷酸二氢钠、磷酸三钠，国药集团化学试剂有限公司. (）无水乙醇，上海试剂一厂。(4)无水乙醇,级，美国Aldrih公司。 （)高

33、纯氮气，纯度99%,上海有机所优化特种气体供应公司。2主要仪器（)电子天平:angping A2004，上海天平仪器厂。 ()反相8柱：Waters公司。 (3)高效液相色谱分析仪：Wates, 525inay PLC泵,Wate rsDla 0。（4)放射性检测器：德国E&公司，LB508,Bocn,Fo。count. （5)紫外检测仪：Wtes 248。（6）活度计：R一1R,APNTC公司。（7)DSlll型回旋加速器（质子能量为1Mev，最大束流509A)， 美国CT公司制造.复旦大学硕士学位论文2临床研究对象2009年月至201年1月，16例恶性肿瘤患者入组本研究,其中 男1例、女例

34、，年龄 58(58士1）岁。16例患者中,头颈部恶 性肿瘤2例(鳞癌10例、腺癌1例、黑色素瘤1例),肺癌2例(均 为腺癌），其他肿瘤2例（乳腺癌肝转移1例,盆腹腔巨大占位1例)（表11)。所有患者均行18FHX4 PETCT显像。本研究方案经复旦大学附 属华山医院伦理委员会批准，检查前征得患者知情同意,并签署知情同 意书。表患者基本情况及临床资料 编号性别年龄病理类型0乳腺癌肝转移02M1 5（回盲部）纤维腺瘤036（右上颌窦）腺样囊性癌47(右舌）鳞状细胞癌05M5（下咽）溃疡型鳞癌6F64右上颌窦癌0746鼻咽癌08鼻咽癌09M63（左喉）上皮内局部癌变10M3（右腮腺区）基底鳞癌1M5

35、8(右口底）中分化鳞癌1254（左上肺)腺癌1363（左上肺）腺癌，分化较差1M9(全喉）浅表糜烂型鳞癌,I-I级15F63黑色素瘤1M2左颊部浸润性分化型鳞癌3显像设备显像设备为SIE公司的Bogah64 PET/C。复q人学硕士学位论文41F-HX4的制备及质量控制4。 18F.X4的制备过程电甚器MeCNo声。飞8C 1 mi舀Cn卅“。一Aqa 101mn八-C唧L纯化唑仓 晗8F4的合成示意图4。11标记中间体的制备18F离子用回旋加速器(CTDSll）以核反应80(P,n)18F生 产,产生的18F。离子850B（60mi）经阴离子交换柱(QMA)吸 附，用.5l的KC03和22.

36、。的混合溶液洗脱至反应管中,加入20ml乙腈蒸发除水后，加入,0m H4前体(1820rag）的乙腈溶液。在 2下反应in，然后用冷却氮气吹干，加入1。olL.1盐酸溶液1.在10下反应mi。4,1.38HX4的纯化 上述水解后的混合溶液，加入0tlL乙酸钠溶液。5l中和，ml注射用水稀释，传入制备型HPLC的LOOP环中(流动相为乙醇:20mmol磷酸二氢钠缓冲液，流速为5mlin一;固定相为C18柱）,以 放射检测器收集所需要的组分，并传入个预先加入300r抗坏血酸的 无菌瓶中，然后进行无菌过滤，取样进行放射性HPLC鉴定，并且与 HX4标准品的HPLC图谱对照。取样待放射性衰变后进行热源

37、、无菌等 检测。42放化纯度和稳定性检测以冷HX4标准品制定些标准溶液，制定标准曲线以确定产品中 放射性峰的性质和比活度.未反应的F参考R为：.m，产品18FH4 参考Rt为7。9mn。HPLC的流动相为5乙醇溶液,流速mlmi，紫外吸收在30。14复旦大学硕士学位论文.3物理学鉴定铅玻璃下肉眼观察物理性状，应澄清无沉淀.测定放射性活度，并 计算放射性浓度、半衰期及放射性核纯度.放射性活度采用美国 CAINTEC公司的CR.15R活度计测定。计算放射性浓度，参考范围为7111 0MBqml。半衰期采用时间计算法,计算公式为 Tl2=693/1n（AoA）】,l/应在1510mi之间.放射性核纯

38、度样品送至上海欣科药业有限公司，用多道分析仪行检测，核纯度应大于98。.化学鉴定测定pH值、放化纯度、比活度、乙腈痕量、乙醇含量及.2痕量。 pH值采用广泛pH试纸检测，应在50之间。放化纯度采用HPC 法(流动相为5乙醇溶液,流速为0mLmin；固定相为反相C18柱；德国EG放射性检测器LB508;wates248紫外检测器，吸收波长 30nm），1。H的放射图谱与F。X4标准品的紫外图谱对照，放化 纯度应大于95。计算比活度，比活度应大于18GBq”mol。乙腈痕量的和乙醇含量的检测送至中国科学院有机化学研究所作气相色谱分析，乙腈含量应小于40ppm,乙醇含量应在一6%之间.2。2痕量检

39、测采用K22标准溶液对照法，应小于299mL。45生物学鉴定按中华人民共和国药典2000年版所述方法进行无菌检查、细菌内 毒素检查及异常毒性检查。注射液应保持无菌、无热原及无毒性。 4.5.1无菌检查：送至华山医院药剂科观察1天内有无需氧菌及厌氧菌生长. 。内毒素测定:（1）取01ml 18HX4注射液加到0.1ml支鲎试剂(规格： 0.25E/）的原安瓿瓶中作复管.（2）取ml内毒素工作标准品溶液（05U/m1)作阳性对照管， 用Oml细菌内毒素检查用水作阴性对照管。（)将安瓿瓶中溶液轻轻混匀后，封闭管口,垂直放入37+1水 浴中保温60min，操作要尽量小心，避免受到震动。(4）结果果判断

40、：将安瓿瓶从水浴中轻轻取出,缓缓倒转1800, 管内凝胶不变形，不从管壁滑脱为阳性（+);凝胶不能保持完整，并从 管壁滑脱者为阴性（一）；阳性对照管为阴性,阴性对照管为阳性，实验 无效；如两管均为阳性，不符合规定；两管中一管为阳性,一管为阴性, 取4支做复试,如其中一管为阳性,不符合规定。复r口大学硕:学位论文4。5.3异常毒性：S大鼠6只.尾静脉注入18FHX4 37MBq（O。2m1)，常规饲养，观察8小时及1周后有无不良反应及死亡。5ET检查方法静脉注射”FH4 36521q（9841m),监测患者心 率、血压及体温,观察有无不良反应发生.参考SC中心及Maasto中心的研究结果，分别于

41、注射后0ra及10n后进行扫描。先行定 位图扫描，并在定位图上确定检查范围（以主要病灶为中心，约3个床位，其中例进行全身扫描，5个床位）.螺旋CT扫描参数：120k,14mAs,进床速度I 5mm/圈，旋转时间0.5s,螺距1.25，准直0.75m， 重建层厚50rm,间隔50am。随后行PET三维模式发射扫描,参数： 3min/床位，采集个床位.E数据用CT作衰减校正,经rueX方 法重建后,和T图像一同传送至LENRDO工作站进行同机融合， 用Tue 软件显示横断、冠状及矢状多层面图像。牯旦耋口禾1F4的制备本研究采用改装的国产DG 模块，从18离子传输、标记到粗 产品的转移、纯化和收集,

42、整个制产品敲冉嚼谱 备过程均为自动化完成。共进行18F-HX4标记1次，标记时间约为55min，平均产率为25+5化后产品放射固备（）。2伯FHX4的质量控制结果（注射前完成)标准品紫，图谱放化纯度测量：HPL法对照L18FHX的放射图谱与”F-HX4标准品的紫外图谱,18F.X放射峰放化纯度测量HLC图谱 与H4标准品紫外峰的保留时间一致。复旦大学硕士学位论文表-2 18HX4质量控制结果项目结果外观澄清无沉淀放射性浓度3795 MBmLl放射性核纯度12=1 05 1 15mnPH值7O。放化纯度98比活度500GBqo乙腈痕量0.4M P a无菌检查:送至华山医院药剂科观察14天,无需氧

43、菌厌氧菌生长. 内毒素测定：阴性。异常毒性试验:6只S大鼠尾静脉注射1F-HX4溶液437M（2m1）后，观察48小时内均无任何中毒症状,1周内无一死亡。31FH4显像结果注射1FHX后所有患者心率、血压及体温无明显波动,未出现任 何不适。16例患者均显像清晰。除肿瘤部分外，药物主要分布在肾脏及胆囊， 且放射性始终较高,但min显像较0in显像放射性浓聚有所下降； 而脑内仅有极少量药物分布。6例患者，共20个病灶。其中，9例（1 1个病灶）表现为病灶内选择性地放射性摄取增高灶;余7例(个病灶)表现为病灶内未见明 显的放射性摄取增高灶。复口人学硕.:学位论文讨论硝基咪唑类乏氧显像剂是目前研究最多

44、应用最广泛的PE乏氧显 像剂.近20年其代表博FFISO一直被用于肿瘤乏氧检测，但清除率 慢，乏氧区域和周围正常组织对比不明显等缺点限制了其临床应用。他F.HX4作为新型硝基咪唑类乏氧显像剂在临床前及临床研究中显 示出了其优越性。本研究自主标记18FH4并对16例肿瘤患者进行 ”HX乏氧显像，对”X的放射性核素标记方法及临床应用安全性进行评价。本研究中，使用改装后的国产FDG模块,采用亲核取代法,以标 记前体H（。（硝基。1咪唑基）甲基1H一1,，3一三唑3。（埘基苯磺酰氧基)丙醇乙酯）为原料进行1标记,所得产物用制各型HPLC 分离纯化，并用标准品1FHX4进行对照确认.该制备方法简单、方便

45、， FHX4标记稳定、有效，摄终产品安全、可靠，标记时间短（5in)， 标记产率高（25士5%(EOS），放化纯度高（98%）,并可进行大剂量 的制备以满足临床需求。6例患者注射博F。HX4后心率、血压及体温无明显波动,无任何不 适出现,临床使用安全.全身显像显示除肿瘤部分外,药物主要在肾脏及胆囊分布，且放射 性始终较高,而在肠道等腹部空腔脏器无明显放射性摄取.全身显像提 示药物排泄主要涉及肾脏及胆囊。而与肠道无关,这一点与18.FS 不同，因此埔F-HX4将有可能弥补18-FMS无法用于腹部空腔脏器显像的缺陷。肾脏与胆囊的放射性摄取在120rai显像中较0mi显像有 所下降,提示120min

46、时药物的清除较90min有所下降。此外，无论是 9mi图像还是10rai图像均显示8HX4在脑内仅有极少量药物分 布，提示博F-H4不易通过血脑屏障，因此不适用于颅内肿瘤的显像.对于肿瘤，6例患者中9例患者的1个病灶显像表现为18。HX 选择性地浓聚，而另7例患者的9个病灶则无明显地放射性摄取浓聚灶. 这一结果提示MF.X4能选择性地浓聚于肿瘤，显示肿瘤的乏氧部分。小结1FH4标记方法可靠、方便，HX临床应用安全,显像清晰，并能选择性地在肿瘤内浓聚，为进一步临床研究打下了坚实的基础。图例与说明图1118FHX4 90min显像与120mi显像比较(体部)A)（B)（C)为”FH汴射后90mi罔

47、像 D)(E)(F）为”FHX汴射后l 20in H像令身5像小除tlf_4d部分外，药物l：篮分柑住肾脏及:|Il键,l 放射。r始终较I汛20mi！像放射L浓聚较90ran1像仃所r降。盟J、。#坝f蕾沦艾图1.2”-49min显像与120in显像比较（脑部）(A）()（C）为Ft|X4汁射后90mn H像（D)（E）(F）为8FtlX4汁射肝1 20mi劁像0rai I刘像及l 20mnH像均51：”F-HX4纯j】Ii内仪仃极少hi药物 分m。图13不同病灶18F-H4摄取的比较()（B）1 0忠告，8岁，(IJ船腺【x）壤底鳞编，FHX4 i射, 9min,z9腮腺k璃tl：(黄色箭

48、头所:）放射惟擞取坤常浓聚c（)(D）16 l，忠并,2妙，（-烦邮)浸润性分化钭鳞确，“HX：射再90min，乍侧颂f软_II纵肿块(II乜箭火所1i)木地放射。陀摄取 ”常浓聚。复口.人学硕。1:学位论文第二部分新型PE乏氧显像剂1FHX的肿瘤乏氧显像评价在乏氧状态下，肿瘤细胞可自行上调一些内源性基因的表达,以适应赖于生长的微环境【1。己知这些内源性基因包括乏氧诱导因子1 (HI。1）、碳酸酐酶9（A IX)、葡萄糖转运蛋白(GLT）、血管内皮 生长因子（VG)、53、促红细胞生成素（EPO)和血小板源性生长 因子B（PB）等，其中以HIF。1和A IX最受关注141。CA IX属于内源性

49、乏氧标志物。它是一种跨膜的锌金属酶，能催化 02水解为碳酸和水，参与机体的内呼吸和酸碱平衡。在乏氧环境下， C IX能帮助维持细胞内正常的pH值并能阻止细胞凋亡.研究结果显示在许多恶性肿瘤(如头颈部肿瘤、肺癌、肾透明细胞癌、卵巢癌、前列腺癌和黑色素瘤等)内有IX的高表达【561.通过对手术切除组织或活检组织进行免疫组化染色及A IX表达分析，可以间接地了解肿瘤 的乏氧状况,预测肿瘤预后f6弘0】。但是这种方法具有创伤性;对于手术患者而言,此方法可重复性差，并且对于治疗的指导意义不大；而对于活检患者,则可能由于活检组织的多少、活检部位的不同而造成对肿瘤整体乏氧情况判断困难。 本研究对比了新型乏氧

50、显像剂博FH4与传统乏氧显像剂18F。FMIO显像间的差异，并分别与CAI表达水平进行相关性分析, 评价F-HX4的乏氧检测能力；探讨其作为肿瘤乏氧显像剂的临床应用价值。材料与方法 研究对象第一部分中行18F-HX PT/CT乏氧显像的恶性肿瘤患者16例入组 本研究，基本情况及临床资料同前.所有患者均于18FX4 P/CT显 像第二天行MIO PET/CT显像，其中，1例患者显像后择q行手术。复旦大学硕士学位论文2试剂2。11FMISO乏氧显像剂乏氧显像剂18FFMSO化学前体及其标准品购置于德国A公司， 参考文献进行放射性核素标记【89。8F由复旦大学附属华山医院P中心的回旋加速器（DSII

51、,美国CTI公司)完成。标记通过自动化标记模块（北京派特生物技术有限公司）完成，放化纯95，无菌、无热原、细菌内毒素检查合格.2.CA I抗体CA IX表达水平分析采用兔碳酸酐酶9多克隆抗体（Rabit Poyclonl aiCarboni Ahyra IX，Sample ie）,购自美国Novus生物制品有限责任公司。3显像设备检查仪器为SIEMENS公司的Bigaph 64 PETCT.E检查方法18FHX显像后第二天行18F.ISO显像，静脉注射”FMISO.0254q（100142mCi),于注射后120进行扫描.先行 定位图扫描，并在定位图上确定检查范围（一般以主要病灶为中心,约 3

52、个床位，基本与博X显像保持一致）.螺旋CT扫描参数：120kV，140mA,进床速度5mm圈,旋转时间0.5s,螺距1。5,准直O75mm， 重建层厚50m,间隔50m。随后行ET三维模式发射扫描,参数： 5mi/床位，采集3个床位。PET数据用CT作衰减校正，经TrueX方法重建后，和C图像一同传送至LEONARDO工作站进行同机融合， 用ue D软件显示横断、冠状及矢状多层面图像。5图像分析由位资深核医学科医师共同阅片,对显像结果进行分析。利用TrueD软件（SIMENS公司，LEONRD工作站自带软件）在三维图像上勾画肿瘤三维感兴趣区(VOI）,由计算机自动计算并得到肿瘤最大标准摄取值(

53、SUVma)。用同样的方法得到对侧斜方肌的平均标准摄取 值（SUVmen),并计算肿瘤SUVmax与对侧斜方肌UVme的比值 (TM值）。以/值大于等于1.为阳性，小于.2为阴性。复口.人学硕j1:学位论文6免疫组织化学方法肿瘤病理标本取材尽可能与ET图像中UVma所在层面一致。 每例患者的病理组织经甲醛固定、石蜡包埋，制各成m厚切片后，采用链霉素抗生物素蛋白过氧化酶链接（P）法进行染色，具体操作严格按照说明书进行。7免疫组织化学结果分析免疫组织化学检测结果判定。肿瘤组织CA表达：细胞出现棕黄 色染色者为表达阳性。每张切片选择10个视野,高倍光学显微镜（ 400)下计数500000个细胞中的阳

54、性细胞数，平均后按比例将其分为级：阴性表达(.)：细胞内无棕黄染色，任意视野中无阳性发现； 弱阳性表达(+）：细胞内有棕黄染色，阳性细胞数少于20;中度阳性 表达（+）：细胞内有棕黄染色，阳性细胞数在20%0；强阳性表 达（+）：细胞内有棕黄染色，阳性细胞数大于50。8统计学分析应用SPS 160统计软件，以p.05为有统计学意义.8计算18FX4 90min、0显像以及18FSO120min显 像的SUVmax和M值平均值及标准差,并以“平均值士标准差表 示。82对F-X4的SVax和T/值进行90mi显像与10mn 显像的配对t检验.83分别对FH4 in显像及20min显像的SVma和T/值进行与18FFMISO显像的配对检验。4分别对18H4 90min显像、18HX 20mi显像以及FMO10rain显像进行与CA IX表达水平的相关性分析.复旦大学硕士学位论文睦里拿口7R18F。 PTCT显像结果16例患者,共20个病灶