蛋白质分离纯化及鉴定综合实验需要仪器及试剂

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1、蛋白质分离纯化及鉴定综合实验一、实验内容：1 将昆虫（或鱼、鸡）总蛋白通过匀浆的方法溶解于磷酸氢二钠 /磷酸二氢钠 缓冲液中，离心取上清液作为蛋白质粗提液；2 用考马斯亮蓝 G-250 法测定蛋白质浓度；3 将粗提液通过硫酸铵盐析进行分离（15%、30%、45%饱和度的硫酸铵分别 沉淀），得到不同的组分，测定不同组分的蛋白质浓度；4 将蛋白粗提液和收集到的各组分进行 SDS-PAGE 分析，比较粗提液和各组 分中蛋白质的成分，分析分离效果。二、实验中需要主要仪器：容量瓶：lOOOmL、250mL、100mL玻璃棒、研钵、分析天平（食品 509）、量筒： 500mL、 50mL、 5mL离心机（

2、食品 310）、离心管（记号笔、标签纸、称量纸、一次性手套）分光光度计（含比色皿）（食品 510）1mL、 5mLEP 管（每组至少 25 个*8=200 个）漏斗、棕色瓶滤纸（或多层纱布）、半透膜（透析用）、大培养皿（脱色用）移液枪： 100-1000uL,0.5-20ul大烧杯、小烧杯搅拌器、电炉电泳仪 垂直板电泳槽、电泳板、微量进样器（50“D、染色/脱色摇床 （电泳在食品 311B 做）三、实验中需要的主要试剂：磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、蒸馏水、牛血清白蛋白CBSA）（生化有）、考马斯亮 蓝 G-250 蛋白试剂（生化有）、 90%的乙醇溶液、 85%的磷酸、硫酸铵、 Tris 碱、 甘氨酸、SDS、蒸馏水、甲醇、冰乙酸、考马斯亮蓝R250、ddH2O、AP（过硫酸 铵）、TEMED （四甲基乙二胺）