仪器分析实习指导_38733

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1、第五章 现代食品安全检测技术第一节 高效液相色谱法测定蜂蜜中残留的四环素一、实验目的掌握高效液相色谱法测定蜂蜜中残留的四环素的原理熟悉高效液相色谱法测定蜂蜜中残留的四环素的实验措施理解高效液相色谱仪的基本构造与使用措施二、实验原理（一）四环素是一种广谱抗菌素，可用于治疗和避免某些动物性疾病，但如果长期使用，将导致四环素类药物在动物类组织中的残留。残留在动物类组织中的四环素类药物会影响食用者的健康。四环素类药物的毒性反映重要体现为对胃、肠、肝脏的损害及牙齿的染色等，还会导致过敏反映、二重感染、致畸胎作用。因此应严格控制其在食品中的残留量。（二）用酸性的Na2 EDTA-Mcllvaine缓冲溶液

2、将蜂蜜中蛋白质沉淀 ,同步将四环素提取出来，以草酸与乙腈为流动相，C18柱作为色谱柱，反相分离，紫外检测器检测，在四环素的原则曲线的线性范畴内，根据其测得的峰面积与其含量间的线性关系进行定量分析。三、仪器和试剂（一）仪器 1. 高效液相色谱仪 2紫外检测器 3涡旋混合器 4离心机 5天平 （二）试剂 1甲醇 2乙腈 3乙酸乙酯 4磷酸二氢钠 5盐酸 6柠檬酸 7乙二胺四乙酸二钠 8草酸四、操作环节1提取 （1）称取5g试样，置于50mL离心管中，加入30mL0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine溶液,迅速混合1min, 以3500r/min离心10min，上清液倒入另一离心管中。

3、（2）将上清液通过固相萃取柱，用2mLNa2EDTA-Mcllvaine溶液冲洗，再用20mL水洗，弃去所有流出液，减压抽干10min，用4mL流动相洗脱，定容至4mL，供液相色谱-紫外检测器测定。 2原则溶液的配制（1）称取四环素10mg，用甲醇溶解，并转移至100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得四环素储藏液（0.1mg/mL）。精确移取该溶液1mL置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度,得0.01 mg/mL。精确移取该溶液0，0.05，0.10，0.20，0.40，0.80mL于10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。得四环素原则溶液的浓度分别为0.05，0.10，0.20，0.40，0

4、.80mg/mL。 3测定（1）色谱条件：色谱柱：C18色谱柱，150mm4.6mm, 5mm；流动相：0.01mol/L草酸溶液（pH=2.5）-乙腈（80：20）；流速：1mL/min; 柱温：室温；紫外检测器：检测波长：355nm。（2）将上述已制备好的不同浓度的四环素原则系列溶液一次进样20mL，根据四环素的峰面积定量。以原则系列溶液的浓度为横坐标，其相应的峰面积为纵坐标，绘制原则曲线，并计算回归方程。（3）样品的测定：取已解决好的样品溶液20mL进样分析，根据峰面积带入回归方程中计算。五、成果计算按下式可计算出蜂蜜中四环素的含量X=CV/m式中：X为试样中四环素的含量，单位为mg/g

5、; C为从原则曲线计算得到的被测组分溶液浓度，单位为mg/mL；V为试样溶液定容体积，单位为mL；m为试样溶液所代表的试样质量，单位为g。六、注意事项（一）流动相使用前必须通过脱气。如果流动相中具有气体，在较高的柱压下会产气愤泡，使流动相流动受阻，对分离样品产生不利影响。（二）固相萃取柱使用前应用5mL甲醇和10mL水活化。（陈凌云）第二节 液相色谱-串联质谱法测定水产品中的氟苯尼考一、实验目的（一）基本熟悉现代食品安全检测技术中高效液相色谱-串联质谱联用技术的测定措施和特点；（二）理解液质联用技术的基本原理以及在食品安全检测中的重要性。二、实验原理氟苯尼考又名氟洛芬、氟甲砜霉素，分子式为C1

6、2H14Cl2FNO4S；分子量为358.2127；构造式为。氟苯尼考是一种兽用抗菌药，用于敏感细菌所致的猪、鸡及鱼的细菌性疾病，特别对呼吸系统感染和肠道感染疗效明显。样品中的氟苯尼考在碱性条件下，用乙酸乙酯提取，提取液经旋转蒸发挥干，残渣以水溶解，经正己烷液-液萃取脱脂。液相色谱-串联质谱仪，以氘代氯霉素（d5-氯霉素）为内标，MRM离子对方式检测，内标法定量。三、试剂和仪器甲醇（HPLC）、乙酸乙酯（AR）、正己烷（AR）、氨水（AR，25%28%）、无水硫酸钠（AR）、氟苯尼考和氘代氯霉素（d5-氯霉素）原则物质（纯度99%）、超纯水。液相色谱-串联质谱仪（API 4000 Qtrap）

7、，配电喷雾电离离子源（ESI）；分析天平，感量0.01mg和0.001g；离心机，4000r/min；小型台式离心机，13000r/min；组织捣碎机；匀浆机；减压旋转蒸发仪；涡旋振荡器；聚丙烯离心管：带盖，50mL，1.5mL；鸡心瓶：25mL；具塞比色管等。四、操作环节（一）原则溶液配制1100g/mL原则储藏液的配制：称取适量氟苯尼考原则物质，用甲醇配成100g/mL的原则储藏液，于-18冰箱保存备用。2.1g/mL原则储藏液的配制：精确吸取1.00mL 100g/mL原则储藏液于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，于-18冰箱保存备用。3.内标原则溶液：氘代氯霉素（d5-氯霉素），1

8、00g/mL，溶剂为乙腈，氘化度98%。4.1g/mL内标原则储藏液：精确吸取1.00mL内标原则溶液于100mL容量瓶中，用甲醇稀释、定容至刻度，于-18冰箱保存备用。5.20ng/mL内标原则中间液：精确吸取1.00mL内标原则储藏液于50mL容量瓶中，以超纯水稀释至刻度，于4冰箱保存备用。6.原则工作溶液的配制：分别精确吸取一定量的原则储藏液和内标原则中间液，以空白基质溶液配成10、50、100、200、500ng/mL，含内标10ng/mL的原则工作溶液。（二）样品的制备1.标记：从所取样品中，取出有代表性的可食部分约500g，用组织捣碎机充足捣碎均匀，装入干净容器，密封，并标明标记。

9、2.提取：称取5g充足捣碎均匀的试样，精确至0.001g，置于50mL聚丙烯离心管中，加入内标原则中间液75.0L，加入25mL乙酸乙酯，0.75mL氨水，3g无水硫酸钠，匀浆提取30s，4000r/min离心5min，上清液转移至50mL比色管中。另取一50mL离心管，加入20mL乙酸乙酯，0.60mL氨水，洗涤匀浆刀10s，洗涤液转移至第一支离心管中，用玻棒搅动残渣，涡旋振荡提取1min，超声波振荡提取5min，4000r/min离心5min，上清液合并至50mL比色管，乙酸乙酯定容至50.0mL。摇匀后移取10.0mL乙酸乙酯提取液于25mL鸡心瓶，45减压旋转浓缩至干。3.净化：鸡心瓶

10、中的残渣用2.00mL水溶解，涡旋振荡混匀，超声5min，加入3mL正己烷涡旋振荡混合30s，静置分层，弃掉上层的正己烷，再加3mL正己烷涡旋振荡混合30s，静置分层，移取部分下层的水相至1.5mL的聚丙烯离心管中，13000r/min离心5min，0.2m滤膜过滤后，供液相色谱-串联质谱测定。4.空白基质溶液的制备：称取5g空白样本，精确至0.001g，除不加入内标原则中间液，其他按照样品制备、净化的环节进行。（三）液相色谱条件1.色谱条件色谱柱：安捷伦 Zorbax XDB C-18，5m，150mm2.1mm；柱温：40；流动相：甲醇-水（4/1）；流速：0.40mL/min；进样量：1

11、0L。2.质谱条件离子源：电喷雾电离离子源（ESI）；扫描方式：负离子；检测方式：多反映选择离子检测（MRM）；质谱条件的优化：以1g/mL的氟苯尼考和氘代氯霉素内标溶液，针泵直接进样，流速5L/min，分别进行MS1、MS2的优化，拟定相应质谱参数，选择合适的检测离子对。电喷雾电压(IS)：-4200V；辅助气温度（TEM）：600，其他参数见下表5-2-1：表5-2-1氟苯尼考、氘代氯霉素（d5-氯霉素）质谱参数名 称定性离子对(m/z)定量离子对(m/z)采集时间（ms）去簇电压DP（V）碰撞能量CE（V）氟苯尼考356.0/336.0356.0/336.0200-75-15356.0/

12、185.0-25氘代氯霉素326.0/157.0326.0/157.0-55-26五、成果计算以内标法定量，在优化的最佳条件下，对基质原则工作溶液进样，以原则溶液中被测组分的峰面积与氘代氯霉素峰面积的比值为纵坐标，原则溶液中被测组分的浓度（或被测组分浓度与氘代氯霉素浓度的比值）为横坐标绘制原则工作曲线，用原则工作曲线对样品进行定量，得提取液的含量C。按下式计算出蔬菜中被测组分的含量式中：X试样中被测组分残留量，单位为微克每公斤（g/kg）；C从原则工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V样品溶液最后的定容体积，单位为毫升（mL）；m称取试样的质量，单位为克（g）。六、

13、注意事项（一）样品采集要均匀、具有代表性；（二）试样要捣碎、匀浆彻底；（三）流动相要过滤、脱气，并现时配制；（四）避免样品污染；（五）色谱柱要充足平衡。（马安德）第三节 电感耦合等离子体质谱法检测茶叶中铅、砷及镉含量一、实验目的（一） 掌握电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）测定元素含量的原理、分析过程中的各项干扰状况及其消除措施、基本分析环节（二） 熟悉电感耦合等离子体质谱仪的基本构造及操作（三） 掌握元素（总量）分析的样品前解决措施二、实验原理ICP-MS由进样系统、离子源和质谱仪三个重要部分构成。样品溶液通过雾化由载气送入ICP炬焰中，通过蒸发、解离、原子化、电离等过程，转化为带正电荷

14、的正离子，经离子采集系统进入质谱仪，质谱仪根据质荷比进行分离。对于一定的质荷比，质谱积分面积与进入质谱仪中的离子数成正比。即样品的浓度与质谱的积分面积成正比，通过测量质谱的峰面积来测定样品中元素的浓度。三、试剂和仪器（一）试剂硝酸（优级纯）H2O2（优级纯）纯水：电阻率不小于18.0Mcm。铅（Pb）、砷（As）、镉（Cd）混合原则使用溶液：10 mg/L。锗（Ge）、铟（In）、铋（Bi）内标溶液：100 g/L（二）仪器Thermo fisher XSeriesII电感耦合等离子体质谱仪Millipore超纯水制备仪美国CEM Mars微波消解仪及配套消解管和架子精确控温电热消解器千分之一

15、天平100 mL、1 mL、5 mL可调移液器各一支，以及相应吸头若干100 mL容量瓶11个、1000 mL烧杯1个、10 mL量筒1个、1000 mL量筒1个四、操作环节(一) 仪器开机预热（如下环节基于实验教师将仪器预先调节到Vacuum ready状态下进行）检查Ar气压力与否在0.60.7MPa范畴内，排风与否正常，电源与否稳定；打开计算机，启动Windows，打开循环冷却水的电源；双击“Plasma Lab” 图标，进入操作软件主窗口。检查蠕动泵、ICP炬管、雾化室，关闭ICP等离子体发生器窗门；点击on点火；待仪器点火后，预热；（二） 原则溶液系列的制备1. 于1000 mL烧杯

16、中加入594 mL去离子水，再定量吸取6 mL浓硝酸加入烧杯中，搅拌、冷却，配制成（1+99）的硝酸溶液；2. 于5个100 mL的容量瓶中分别加入0、50 mL、200 mL、1 mL和2.5 mL的铅（Pb）、砷（As）、镉（Cd）混合原则使用溶液（10 mg/L），用（1+99）的硝酸溶液定容至刻度，配制成浓度浓度分别为0、5、20、100、250 mg/L原则溶液系列；（三） 样品解决1. 称取0.5g茶叶样品，记下样品具体重量（精确到小数点后第三位），平行样品数为三份2. 将称量好的三份平行样分别放入3支微波消解管中，再取3支微波消解管作制备试剂空白用；每支消解管中分别加入5 mL浓

17、硝酸和1 mL H2O2，盖上消解管瓶塞及盖子；6支消解管对称放入微波消解架上，放入微波消解仪中，按照表5-3-1消解程序进行样品消解；表5-3-1 茶叶样品微波消解程序功率爬升时间温度保持800 W5 min1785 min3. 微波消解程序结束后，将消解管放到精确控温电热消解器上进行赶酸操作，温度设定100 ，加热10 h；4. 赶好酸的试剂空白及样品分别转入6个100 mL容量瓶中，每支消解管用少量超纯水清洗35次，清洗液也转移至容量瓶中，最后用超纯水定容至刻度，制备成样品溶液剂试剂空白。（四） 测定1. 使用调谐液调节仪器各项指标，使仪器敏捷度、氧化物、双电荷辨别率等各项指标达到测定规

18、定，仪器参照条件如下：RF功率为1400 W，载气流量为0.93 L/min，采样深度为150 mm，雾化器为同心雾化器、采样锥类型为镍锥，具体仪器条件应当以实际调节所获条件为主；2. 编辑测定措施、干扰方程、选择各测定元素及内标元素、选择校准措施、输入原则系列浓度；3. 引入在线内标溶液，观测内标敏捷度、待内标信号稳定后分别测定试剂空白、原则系列、样品溶液；4. 绘制原则曲线、计算回归方程、获取试剂空白及样品溶液浓度（五） 关机测定完毕，分别用5%硝酸溶液、超纯水冲洗样品管和内标管直至仪器响应值回到基线；点击off熄火，关闭循环水及Ar气，将进样系统的蠕动泵管放松，关闭计算机。五、成果计算茶

19、叶样品中各待测元素的含量由如下公式计算：其中，W为茶叶样品中各待测元素的含量（mg/g）；C样为仪器所测定的样品溶液浓度（mg/L）；为仪器所测定的试剂空白浓度的平均值（mg/L）；m为茶叶样品重量（g）最后茶叶样品中各待测元素的含量应以三个平行样品的含量均值来表达：。其中为茶叶样品中各待测元素的含量均值；SD为原则偏差。六、注意事项（一）干扰及其消除电感耦合等离子体质谱法测定复杂样品时常存在如下干扰，在实验过程中应当注意消除干扰影响。1 同量异位素干扰相邻元素间的异位素有相似的质荷比，不能被四极质谱辨别，也许引起异位素严重干扰，选择待测元素时应避免选择有同量异位素干扰的元素。2. 丰度较大的

20、同位素对相邻元素的干扰丰度较大的同位素会产生托尾峰，影响相邻质量峰的测定。可调节质谱仪的辨别率以减少这种干扰。3. 多原子（分子）离子干扰由两个或三个原子构成的多原子离子，并且具有和某些待测元素相似的质荷比所引起的干扰，本实验中也许存在的多原子（分子）离子干扰见表5-3-2。多原子（分子）离子干扰很大限度上受仪器操作条件的影响，通过调节或者干扰校正方程可以减少这种干扰。表5-3-2 常用的分子离子干扰分子离子质量受干扰元素40Ar35Cl+75AsZrO106112CdMoO108116Cd本实验中，氧化物的干扰可通过调节仪器参数、减少氧化物生成来减少干扰；而As的干扰可以通过干扰校正方程来消

21、除，校正方程为：75As=75Mx82My (83M-z83Kr)其中，x、y、z的参照值分别为3.1285、0.8740、1.0074，具体数值以77ArCl、82Se和83Kr的实际仪器响应来计算。4. 物理干扰涉及检测样品原则溶液的粘度、表面张力和溶解性总固体的差别所引起的干扰。用内标物可校正物理干扰。5. 基体克制（电离干扰）易电离的元素增长将大大增长电子数量而引起等离子体平衡转变，一般会减少分析信号，称基体克制。用内标法可以校正基体干扰。6. 记忆干扰常常清洗样品导入系统以减少记忆干扰。（二）仪器稳定性监测测定过程中，应随时留意内标元素的仪器响应状况，如内标元素仪器响应浮现大幅度波动

22、，应查明因素再重新测定。（三）样品制备由于样品赶酸过程较长，样品制备应提迈进行。(刘洪涛)第四节 离子色谱法测定自来水中氟离子、氯离子含量一、 实验目的（一）掌握离子色谱法测定自来水中氟离子、氯离子含量的基本原理及实验措施。 （二）熟悉离子色谱仪的测定措施。（三）理解化学克制的工作原理。二、 实验原理 样品通过进样阀注入仪器，并随碳酸盐-重碳酸盐淋洗液进入离子互换柱系统（由保护柱和分离柱构成），由于样品中多种阴离子对分离柱中阴离子互换树脂的亲和力不同，移动速度亦不同，从而进行分离。已分离的阴离子流经阳离子互换柱或克制器系统转换成具高电导度的强酸，淋洗液则转变为弱电导度的碳酸。由电导检测器测量出

23、各阴离子组分的电导率，以相对保存时间和峰高或面积定性和定量。 三、仪器和试剂（一）仪器 1.离子色谱仪2.全自动进样器3.阴离子分离柱4.超声波清洗器5.超纯水系统6.真空泵7.过滤器8.十万之一分析天平9.滤膜：0.22mm10.聚乙烯塑料容量瓶：1000m1、100m1（二）试剂 1.氟原则储藏液（1000mg/L）2.氯原则储藏液（1000mg/L）3.碳酸钠：分析纯4.碳酸氢钠：分析纯5.硫酸：优级纯6.去离子水四、操作环节（一）水样预解决吸取10mL自来水样过0.22mm孔径的微滤膜过滤除去浑浊物质，然后上机待测。（二）溶液的配制1.氟(10.0 mg/L)、氯(100.0 mg/L

24、)混合原则使用液：分别吸取将氟原则储藏液1m1，氯原则储藏液10m1，置于100mL容量瓶中，然后用去离子水稀释至刻度，摇匀。2.氟、氯原则溶液的绘制：精确吸取1、2、5、10、20mL氟、氯混合原则使用液分别置于100mL容量瓶中，最后用去离子水稀释至刻度，摇匀。3.淋洗液的配制(碳酸钠1.8 mmol/L /碳酸氢钠1.7mmol/L)：精确称取碳酸钠0.1908g/L、碳酸氢钠0.1428g/L（于105下烘干2小时，并保存在干燥器内），溶于去离子水中，并转移到1000mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀，并经真空泵过滤、除气，备用。4.再生液的配制（50mmol/L）：精确吸取3m

25、L硫酸到1000mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀。5.冲洗液：去离子水。（三）仪器的条件1.柱温：室温2.淋洗液流速：1.0 m L/min3.进样量：20ml（四）样品测定1.装上淋洗液，依次打开全自动进样器、主机、连接色谱工作站的电脑开关。2.调节淋洗液和再生液流速，使仪器达到平衡，并批示稳定的基线。3.建立测定措施。4.待基线走稳后，用氟离子、氯离子的混合原则系列溶液进样（可分别得到两种离子的工作曲线）绘制原则曲线。5.将预解决后的自来水样品注入色谱仪进样系统，记录峰高或峰面积。6.测量完毕后，冲洗柱子。7.关泵。 五、成果计算 根据测出的样品峰面积，仪器可直接在原则曲线上查得各

26、阴离子的质量浓度（mg/L）。如有稀释需乘以稀释倍数。C样=C检稀释倍数式中：C样为样品的质量浓度，单位为毫克每升mg/L；C检为在原则曲线上查出的质量浓度，单位为毫克每升mg/L。六、注意事项（一）由于进样量很小，操作中必需严格避免纯水、器皿以及水样预解决过程中的污染，淋洗液应用去离子水配制，不适宜配制太多、放置时间太长。（二）为了避免保护柱和分离柱堵塞，样品必须过0.22mm孔径的微滤膜。（三）每次开机后，观测白色的再生液和冲洗液的废液管与否有液体流出，与否被堵。（四）离子色谱仪长期不用时也要定期用超纯水清洗或将柱子卸下密封保存。（沈梅）第五节 气相色谱-质谱法测定蔬菜中的敌敌畏和甲拌磷含

27、量一、 实验目的（一）理解气相色谱-质谱联用仪的基本构造及原理；（二）理解气相色谱-质谱仪使用的措施；（三）理解蔬菜中有机磷农药的提取措施；（四）熟悉气相色谱-质谱法的定性、定量的措施；（五）掌握内标原则曲线法的定量措施。二、 实验原理样品用乙腈匀浆后过滤，滤液盐析后离心，取上清液经固相萃取柱净化，用乙腈+甲苯（3+1）洗脱，洗脱液浓缩后，用气相色谱-质谱仪测定。气相色谱-质谱仪的工作原理：样品中各组份经气相色谱分离后进入质谱仪，被离子源轰击成不同质荷比（m/z）的碎片离子。碎片离子通过质量分析器后，由离子流检测器检测，并按照m/z的大小输出质谱图，以离子流强度为纵坐标，保存时间为横坐标输杰出

28、谱图。运用组分的保存时间和质谱图进行定性分析，用峰面积或者峰高进行定量分析。内标原则曲线法：将待测组分的纯物质配备成不同浓度的系列原则溶液（），分别加入等量的内标物质，在一定实验条件下分析，测得待测组分的峰面积及内标的峰面积，以对作图得内标原则曲线。再将同样量的内标物加入到待测样品中，进样分析，测出，由原则曲线求得待测组分的含量。三、试剂和仪器（一）仪器 GC-MS（QPPlus，日本岛津公司)；自动固相萃取仪或手动固相萃取仪；均质器；离心机，电子天平（精度分别为0.001g和0.00001g）；氮气吹干仪；100uL/ 1000uL可调移液器；鸡心瓶；微量进样器。（二）试剂 乙腈、甲苯、正己

29、烷、氯化钠，均为优级纯。Envi-18和Envi-Carb活性炭固相萃取小柱（3 mL,0.5 g）。敌敌畏、甲拌磷和环氧七氯原则品 (纯度95%，国标物质研究中心)。敌敌畏、甲拌磷和环氧七氯原则母液（1.0 mg/mL）: 精确称取10.00 mg原则物质于10.0 mL容量瓶中用正己烷定容。精确移取敌敌畏和甲拌磷原则母液各1 mL置10 mL量瓶中，用正己烷稀释至刻度，得含0.1 mg/mL敌敌畏和甲拌磷的混合原则溶液。精确移取该溶液0，0.0025，0.005，0.01，0.02，0.05mL于5 mL容量瓶中由空白基质提取液定容，得原则工作液0，0.05，0.10，0.20，0.40，

30、1.00 mg/mL。环氧七氯内标工作原则溶液（40.0 mg/mL）： 精确移取1 mL环氧七氯母液于25 mL量瓶中，用正己烷稀释至刻度。四、操作环节（一）仪器操作环节：1. 确认处在正常工作状态。2. 对仪器进行调谐，获得调谐报告。3. 编辑检测措施，将检测措施发送给仪器，等待仪器达到设定好的条件。4. 编辑样品测定序列，将原则溶液和样品溶液放于自动进样器样品盘中。5. 仪器稳定后，开始测试。6. 样品测定完毕后，进行数据分析。（二）检测条件色谱柱：Rxi-5ms,30m0.25mm0.25mm；色谱柱温度程序：50保持2 min，然后以50/min程序升温至180，再以5/min升温至

31、280，保持1min,在以50/min升温至300，保持1min；载气：氦气，纯度99.999%，流速：1.0mL/min；进样口温度：250；进样量：1 L；进样方式：无分流进样，4.5 min后打开流阀和隔垫吹扫阀；电子轰击源：70 eV；离子源温度：250。GC-MS接口温度：250；扫描方式：选择离子监测。监测离子见下表5-5-1：表5-5-1 待测组分及内标的定量离子和定性离子化合物名称定量离子（强度）定性离子（强度）驻留时间/s敌敌畏109（100）185（22），145（6）0.15甲拌磷260（100）121（429），231（110）0.15环氧七氯353（100）355（8

32、0），351（53）0.15（三）样品解决：1. 提取称取20 g试样（精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入40 mL乙腈，用均质器在15 000r/min匀浆提取1 min，加入5 g氯化钠，再匀浆提取1 min，将离心管放入离心机，在3 000r/min离心5 min，取上清液20 mL（相称于10 g试样量），待净化。2. 净化（1） 将Envi-C18柱放入固定架上，加样前先用10 mL乙腈预洗柱，下接鸡心瓶，移入鸡心瓶，移入上述20 mL提取液，并用15 mL乙腈洗涤柱，将收集的提取液和洗涤液在40水浴中旋转浓缩至约1 mL，备用。（2） 在Envi-Carb柱中加入约2

33、cm高无水硫酸钠，下接鸡心瓶放在固定架上，加样前先用4 mL乙腈+甲苯（3+1）预洗柱，当液面达到硫酸钠的顶部时，迅速将样品浓缩液（1）转移至净化柱上，再每次用2 mL乙腈+甲苯（3+1）三次洗涤样液瓶，并将洗涤液移入柱中。在串联柱上加上50 mL贮液器，用25 mL乙腈+甲苯（3+1）洗涤串联柱，收集所有流出物于鸡心瓶中，并在40水浴中旋转浓缩至约0.5 mL。每次加入5 mL正己烷在40水浴中旋转蒸发，进行溶剂互换二次，最后使样液体积为1 mL，加入40 L内标溶液，混匀，用于气相色谱-质谱测定。五、成果计算（一）定性分析：进行样品测定期，如果检出的色谱峰的保存时间与原则样品相一致，并且在

34、扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均浮现，并且所选择的离子丰度比与原则样品的离子丰度比相一致（相对丰度50%,容许10%偏差；相对丰度20%50%，容许15%偏差；相对丰度10%20%，容许20%偏差；相对丰度10%，容许50%偏差），则可判断样品中存在这种农药或有关化学品。如果不能确证，应重新进样，以扫描方式（有足够敏捷度）或采用增长其她确证离子的方式或用其她敏捷度更高的分析仪器来拟定。（二）定量分析：分别以敌敌畏、甲拌磷及内标的定量离子的质量色谱图进行面积积分，获得原则系列中待测组分的峰面积及内标的峰面积，以对作图得内标原则曲线。再测得样品中待测组分的峰面积及内标的峰面积，计算，由原则

35、曲线求得待测组分的含量。（三）含量计算按下式计算出蔬菜中被测组分的含量：式中：X蔬菜试样中敌敌畏或甲拌磷的含量，单位为mg/kg； C从原则曲线计算得到的被测组分溶液浓度，单位为mg/mL；V试样溶液定容体积，单位为mL；M试样溶液所代表的试样质量，单位为g。六、注意事项（一）为减少基质的影响，定量用原则溶液一般采用空白基质提取液配备原则工作溶液。（二）在进行测定前，常进样一针溶剂空白，以检查仪器的状况。七、参照文献1.郭爱民 主编，卫生化学实验，北京：人民卫生出版社，。2.唐英章 主编，现代食品安全检测技术，北京：科学出版社，。（周枝凤）第六节 原子吸取光谱法测定水中的锌和铜一、实验目的 (

36、一) 掌握火焰原子吸取光谱法测定水中锌、铜的基本原理和操作技术。 (二) 熟悉原子吸取分光光度计的工作原理及火焰原子法的操作。实验原理在使用锐线光源条件下，基态原子蒸汽对共振线的吸取，符合朗伯-比尔定律，即： （A为中心频率处的吸光度；L为原子蒸气的厚度；峰值吸取系数） 在试样原子化时，火焰温度低于3000 K时，对大多数元素来讲，原子蒸汽中基态原子的数目事实上十分接近原子总数。在一定实验条件下，待测元素的原子总数目与该元素在试样中的浓度呈正比。则A=kc用A-c原则曲线法或原则加入法，可以求算出元素的含量。 试剂和仪器(一) 试剂：不同浓度的锌、铜原则溶液；水样。(二) 仪器：原子吸取分光光

37、度计；锌、铜空心阴极灯；电热板。四、操作环节 (一) 锌、铜系列原则溶液的配制配制锌系列原则溶液：0.100，0.200，0.300，0.400，0.500 gmL-1。配制铜系列原则溶液：0.200，0.400，0.600，0.800，1.000 gmL-1。(二) 工作条件的设立表5-6-1仪器参数的设立测试元素工作模式空心阴极灯电流空心阴极灯预热时间狭缝宽度波长喷头高度锌火焰8 mA20 min0.4nm213.8 nm7mm铜火焰8 mA20 min0.7nm324.5nm7mm表5-6-1仪器参数的设立（续）测试元素测定措施工作曲线计算方式测定时间反复次数原则品数量浓度单位背景校正样

38、品数延迟时间锌浓度自续直线回归积分335g/mL否30铜浓度自续直线回归积分335g/mL否30 (三) 锌、铜的测定 1%硝酸为空白，测定锌、铜系列原则溶液和自来水样的吸光度A。 (四) 实验结束后，用1%硝酸喷洗原子化系统5 min，按关机程序关机。最后关闭乙炔钢瓶阀门，旋松乙炔稳压阀，关闭空压机和通风机电源。 (五) 绘制锌、铜的A-c原则曲线，由未知样的吸光度A，求算出自来水中锌、铜含量（g/mL），按一元线性回归计算程序，计算锌、铜的含量。五、 注意事项 乙炔为易燃易爆气体，必须严格按照操作环节工作。在点燃乙炔火焰之前，应先开空气，后开乙炔；结束或暂停实验时，应先关乙炔，后关空气。乙

39、炔钢瓶的工作压力，一定要控制在所规定范畴内，不得超压工作。必须牢记，保障安全。（韩伟立）第七节 气相色谱法检测饮料中的防腐剂苯甲酸一、 实验目的（一）掌握气相色谱氢火焰离子化（FID）分析措施的原理和实验操作技术。 （二）熟悉内标原则曲线法的定量分析措施。二、 实验原理食品防腐剂因具有杀灭或克制微生物增殖的作用，而被广泛应用于各类食品、饮料中，避免食品变质及延长食品的保质期, 但过量食用对人体有一定毒性。因此有必要对其进行检测监控。气相色谱法的工作原理：是运用试样中各组份在流动相和固定相间的分派系数不同，当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运营时，组份就在其中的两相间进行反复多次分派，由于固定相对

40、各组份的吸附或溶解能力不同，因此各组份在色谱柱中的保存时间不同，便彼此分离，按顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流讯号经放大后，在记录器上描绘出各组份的色谱峰。运用保存时间对样品中的组分进行定性分析，用峰面积进行定量分析。内标原则曲线法：在一定实验条件下，待测组分的含量m或浓度C与样品峰面积Ai内标峰面积As成正比例。先用待测组分的原则品配备一系列已知浓度的原则溶液，加入相似量的内标物；再将同样量的内标物加入到同体积的待测样品溶液中，分别进样，测出Ai/As，作 Ai/Asm或Ai/AsC图，由Ai（样）/As即可从原则曲线上查得待测组分的含量。食品中苯甲酸先经乙醚萃取，以正十一烷酸作内标，

41、采用内标原则曲线法定量。三、试剂和仪器（一）仪器 天美，GC-7900气相色谱仪；FID检测器；双通道色谱工作站；中惠普NHA-300S气源发生器；微量进样器。（二）试剂 正十一烷酸，乙醇，乙醚均为分析纯。苯甲酸 (国标物质研究中心提供)，食品防腐剂原则工作液：1.0g/L，用乙醇配制；正十一烷酸内标溶液：3.0g/L，用乙醇配制。盐酸（1+1）：取100mL盐酸，加蒸馏水稀释至200mL。四、操作环节（一）气相色谱仪操作环节：1. 确认所需使用检测器，并相应的安装好分析柱。FID使用N2做载气；开机前需先打开N2气瓶总阀，开通载气。2. 打开仪器及计算机电源。运营D-7900色谱工作站。3.

42、 确认装了分析柱的载气气路有流量压力且正常。设立进样口，检测器（FID120）及柱箱的温度。4. 在进样口、检测器、柱箱温度达到设定温度后，打开氢气发生器电源开关旋扭, 观测流量和压力显示与否正常，打开Air气瓶总阀；按【点火】按键，点火，待基线稳定后即可进样分析。5. 测试完毕后，关闭H2, Air气瓶总阀，设立进样口、检测器、柱箱温度为室温，仪器自动降温；待进样口、检测器、柱箱温度降至80如下，即可关闭色谱仪电源。关闭计算机电源，关闭载气气瓶总阀。（二）色谱条件色谱柱: TM-MX 0.32mm30m，0.25um毛细管柱；柱温: 130 ；进样口和FID检测器温度均为250；载气: 高纯

43、氮；柱流速: 1.0mL/ min(恒流)；分流比301；进样量1L。（三）样品解决：称取5.0mL的样品, 置于25mL具塞量筒中, 1mL正十一烷酸内标液, 加0.5mL盐酸(1：1)酸化, 用20，15mL乙醚提取两次, 每次振摇1min, 将上层乙醚提取液通过装有无水硫酸钠三角漏斗(漏斗颈内塞少量脱脂棉) 滤入100 mL具塞三角瓶中, 再用10mL乙醚分两次洗涤无水硫酸钠, 置40水浴上挥干, 加200L乙醇溶解残渣, 供色谱测定。用保存时间定性, 峰面积外标法定量。（四）原则曲线制备：精确量取原则工作液0、1.0、2.0、3.0、4.0 和5.0 mL 于6 个10 mL 容量瓶中

44、, 各加入1.0mL内标液, 用乙醇定容, 进行色谱分析。使浓度在00.5g/L范畴, 以原则物的浓度比为横坐标, 相应峰面积比为纵坐标作线性回归分析, 并根据信噪比S/N=3, 计算最低检测浓度。（五）样品中苯甲酸的检测： 取实验样品，按上述气相色谱法测定，记录苯甲酸和内标物的峰面积。 五、成果计算（一）根据保存时间对样品中苯甲酸进行定性分析。（二）原则曲线的绘制：由原则系列色谱图分别测量各原则液中苯甲酸的峰面积，计算苯甲酸与内标的峰面积之比，以峰面积之比对浓度作图，得到苯甲酸的内标原则曲线。（三）根据样品色谱图苯甲酸的峰面积，计算苯甲酸与内标的峰面积之比，从苯甲酸的工作曲线中查得苯甲酸的浓

45、度。六、注意事项（一）检测器温度100，以防结水，影响电极绝缘而使基线不稳。实际温度一般应高于柱温3050，在启动仪器加热升温过程中，应先升检测器温度后升色谱柱箱温度，待升温过程基本完毕，温度稳定，最后再开H2点火，并保证火焰是点着的。氢气和空气的比例应1：10，当氢气比例过大时FID 检测器的敏捷度急剧下降，在使用色谱时别的条件不变的状况下，敏捷度下降要检查一下氢气和空气流速。（二）判断FID检测器与否点着：不同的仪器判断措施不同，有基流显示的看基流大小，没有基流显示的用带抛光面的扳手凑近检测器出口，观测其表面有无水汽凝结。（三）密封垫的更换：更换密封垫不要拧的太紧，一般更换时都是在常温，温度升高后会更紧，密封垫拧的太紧会导致进样困难，常常会把注射器针头弄弯。七、参照文献1.杜晓燕主编， 卫生化学实验，北京：人民卫生出版社，2.唐英章主编，现代食品安全检测技术，北京：科学出版社， （杨雪梅）