综合实训4革兰阴性需氧和兼性需氧杆菌ppt课件

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1、革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌 革兰阴性杆菌O-F试验试验Fo/非发酵菌非发酵菌氧化酶试验氧化酶试验+弧菌科弧菌科肠杆菌科肠杆菌科革兰阴性菌初步分群革兰阴性菌初步分群乳糖发酵试验乳糖发酵试验A肠杆菌科共同特性肠杆菌科共同特性1、相似的形态染色、相似的形态染色 中等大小，中等大小，G 杆菌，无芽胞，多数杆菌，无芽胞，多数有动力有动力2、简单的培养条件、简单的培养条件3、活泼的生化反应、活泼的生化反应初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌肠道致病菌肠道非致病菌不发酵不发酵乳糖 发酵发酵乳糖1、形态观察、形态观察（革兰染色）G 杆菌杆菌2、菌落观察、菌落观察（1）埃希菌在肠道）埃希菌在肠道 选择性培养基上发酵

2、乳糖产酸，选择性培养基上发酵乳糖产酸，在在SS和和MAC平板上为红色或粉红色菌落平板上为红色或粉红色菌落(2)志贺菌属：将本菌接种在志贺菌属：将本菌接种在SS和和MAC平板上经平板上经35孵育孵育1824h。由于志贺菌不分解乳糖，宋内志贺菌某些菌株可迟缓发酵乳糖，由于志贺菌不分解乳糖，宋内志贺菌某些菌株可迟缓发酵乳糖，故其在故其在SS平板和平板和MAC平板上形成无色透明的、中等大小的菌落。平板上形成无色透明的、中等大小的菌落。除宋内志贺菌菌落外均为光滑型菌落。除宋内志贺菌菌落外均为光滑型菌落。(3)沙门菌属：将本菌接种在沙门菌属：将本菌接种在SS、MAC平板上经平板上经35孵育孵育1824h。

3、由于本菌不分解乳糖并产碱，由于本菌不分解乳糖并产碱，故在故在SS和和MAC平板上形成无色、平板上形成无色、半透明、光滑湿润、凸起的小菌落，产生半透明、光滑湿润、凸起的小菌落，产生H2S的菌落可在的菌落可在SS平板平板上形成中心带黑褐色的小菌落。上形成中心带黑褐色的小菌落。3、生化反应、生化反应4、血清学实验、血清学实验 革兰阴性杆菌，有周身鞭毛。发酵多种糖类，多数能发酵乳糖发酵乳糖，产酸产气 IMViC试验为试验为+-，MIU:+-,KIA:AA+-不产不产H2S 大肠杆菌血清型以O：K：H能分解葡萄糖，产酸不产气，不分解乳糖,除宋内志贺菌IMViC试验为-+-，MIU:-,KIA:KA-,不

4、产H2S是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，通称痢疾杆菌dysentery bacteria无鞭毛无鞭毛，有菌毛生化反应形态A2志贺菌低于其他肠道杆菌，对酸敏感对理化因素的抵抗力血清学：根据生化反应特征和O抗原分为4群肝脾肝脾-肿大肿大胆囊胆囊-肠道肠道-排菌排菌(2(2周）周）肾脏肾脏-尿尿-排菌（排菌（3 3周周)A3伤寒伤寒、副伤寒的致病过程副伤寒的致病过程伤寒沙门菌和甲型副伤寒杆菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌伤寒沙门菌和甲型副伤寒杆菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌肠粘膜上皮细胞肠粘膜上皮细胞肠系膜淋巴结肠系膜淋巴结 固有层淋巴结固有层淋巴结进入血液进入血液再次进入血液再次进入血液第一次菌血症第一次

5、菌血症发热发热,不适不适,全身疼痛全身疼痛第二次菌血症（第二次菌血症（1周）周）高热、外周白细胞下降、肝脾肿大、高热、外周白细胞下降、肝脾肿大、表情冷漠、玫瑰疹、相对缓脉表情冷漠、玫瑰疹、相对缓脉肝脏肝脏脾脏脾脏胆囊胆囊肾脏肾脏骨髓骨髓并发症并发症胸导管胸导管细菌学诊断细菌学诊断标本：标本：胃肠炎取粪便呕吐物或可疑食物胃肠炎取粪便呕吐物或可疑食物 肠热症在病程不同阶段采取不同标本肠热症在病程不同阶段采取不同标本；发病发病1周取血；发病周取血；发病1-3周取骨髓液周取骨髓液 发病发病2 周取粪便；发病周取粪便；发病3周取尿周取尿微生物学检查微生物学检查细菌学诊断细菌学诊断标本标本 肠热症肠热症

6、食物中毒食物中毒 败血症败血症 第第1 1周取静脉血周取静脉血 可疑食物可疑食物 血血 第第1-31-3周取骨髓液周取骨髓液 呕吐物呕吐物 第第2 2周起取粪周起取粪 粪粪 第第3 3周起取尿周起取尿 SSSS平板平板生化反应生化反应血清学鉴定血清学鉴定双糖发酵等双糖发酵等玻片凝玻片凝集试验集试验菌 名 动力 葡萄糖 乳糖 麦芽糖 甘露醇 蔗糖 硫化氢 吲哚 甲基红 VP 枸 橼 酸 盐 甲型副伤寒沙门菌+/+乙型副伤寒沙门菌+鼠伤寒沙门菌+丙型副伤寒沙门菌+猪霍乱沙门菌+/+伤寒沙门菌+/+肠炎沙门菌+KIA:K/A-+,H2S阳性阳性,赖氨酸脱羧酶阳性赖氨酸脱羧酶阳性,IMVC:-+-+,

7、MIU:+-一、原理 用已知的标准诊断菌液【伤寒杆菌：菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原；副伤寒甲、乙、丙鞭毛（H）抗原共5种】与受检血清作试管凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价，以协助伤寒、副伤寒疾病的诊断。二、器材及试剂 标准诊断菌液（5种抗原：10ml/瓶）、生理盐水（N.S）、待检血清（兔血清）、试管、试管架、加样枪或移液管（5mL、2mL、0.5mL每组3支）、一次性塑料滴管等。1三、实验方法三、实验方法1.冰箱中取出诊断菌液平衡至室温。2.将待检血清作1：20、1：40、.1：1280（每管每管0.5ml，每个稀释倍数，每个稀释倍数5管管）稀释，对照管 加N.S 0.5ml,

8、然后逐管加入混匀后诊断菌液1d，充分振荡混匀，标记（时间、班级、组号），3537C放置16-20h观察结果。（配液管：（配液管：0.25ml血清血清+4.75mlN.S=5.0mL:1：20）3.5/6个同学一组，第二天中午第二天中午1:30观察结果。1:201:401:801:1601:3201:6401:1280伤寒伤寒O抗原抗原0.25ml血清血清+4.75mlN.S=5.0mL:1：202.5ml2.5ml2.5ml2.5ml2.5mlN.S2.5mlN.S余余2.5ml2.5ml平分为平分为5 5管，每管管，每管0.5ml0.5ml：得：得5 5管管1:201:20稀释倍数的稀释倍数

9、的血清血清平分为平分为5 5管，每管，每管管0.5ml0.5ml：得：得5 5管管1:401:40稀释倍数稀释倍数的血清的血清2.5mlN.S2.5mlN.S余余2.5ml2.5ml1:12801:201:401:801:1601:3201:640伤寒伤寒H抗原抗原副甲副甲H抗原抗原副乙副乙H抗原抗原1:12801:201:401:801:1601:3201:6401:12801:201:401:801:1601:3201:6401:12801:201:401:801:1601:3201:640副丙副丙H抗原抗原1:201:401:801:1601:3201:6401:1280伤寒伤寒O抗原抗

10、原0.25ml血清血清+4.75mlN.S=5.0mL:1：20四、凝集结果判断（上清液、沉淀）四、凝集结果判断（上清液、沉淀）“”：强，：强，完全完全凝集，液体澄清，轻摇大片凝凝集，液体澄清，轻摇大片凝 集块。集块。“”：大部分大部分凝集，液体轻度浑浊，凝集块凝集，液体轻度浑浊，凝集块 小。小。“”：中强，：中强，部分部分凝集，液体半澄清，凝集块凝集，液体半澄清，凝集块 颗粒状。颗粒状。“”：弱，少量凝集，液体浑浊。：弱，少量凝集，液体浑浊。“”：不凝集，液体浑浊，和对照相同：不凝集，液体浑浊，和对照相同。+五、效价判断五、效价判断 能出现明显凝集（明显凝集（+）的血清最高稀释度。例：测定某

11、病人“O”凝集效价结果如下：1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:320 1:640 1:1280 4+3+3+2+2+-六、临床意义六、临床意义 1.正常值：正常值：正常人血清中可能有低效价的抗体存在，其值高低存在地区差异，一般伤寒沙门菌“O”1:80,“H”1:160,副伤寒沙门菌“H”1:80，有临床意义；或者进行疾病早期、中后期两次血清效价比较，后者增高4倍倍/4倍以上倍以上有诊断价值。2.“O”抗体出现早、消失快、主要为IgM类；“H”抗体出现迟、可持续阳性数年，主要为IgG类，O、H凝集效价都超过正常值，意义较大。1）、“O”高“H”不高：感染早期，伤寒沙门菌“

12、O”抗 原有交叉反应，建议一周后复查。2）、“H”高“O”不高：疾病晚期、预防接种、非特异 性回忆反应。3.伤寒、副伤寒甲、乙有部分共同的O抗原，如O抗体效价增高，只能推断为伤寒类疾病，不能区别伤寒或副伤寒。4.阴性反应：未感染，感染轻，应用有效抗菌药物，接受皮质激素治疗者，患者过于衰弱等。七、注意事项七、注意事项 1.应在光亮处先观察管底先观察管底凝集状态，后轻摇后轻摇判 定结果。2.使用前摇匀菌液摇匀菌液，菌液有摇不散的凝集块时不能使用。弧菌科(Vibrionaceae)是一群氧化酶阳性，具有端极鞭毛，菌体短小、直或微弯的革兰阴性杆菌。分为弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和发光杆菌属等四个菌

13、属。弧菌属特征：耐碱不耐酸，营养要求不高。生长迅速,在pH8.89.0的碱性蛋白胨水/碱性琼脂平板上生长良好。在TCBS平板上为黄色菌落;在含亚碲酸钾的平板上形成中心灰褐色的菌落。多数菌株生长都需要盐；大多数氧化酶都为阳性；具有一端单一鞭毛。TCBS平板上菌落含亚碲酸钾的4号平板+-不发酵革兰阴性杆菌包括假单胞菌属、产碱杆菌属、无色杆菌属、不动杆菌属、莫拉菌属、金氏杆菌属、黄杆菌属、艾肯菌属、土壤杆菌属、黄单胞菌属、丛毛单胞菌属等。假单胞菌属为需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验阳性。代表菌株为铜绿假单胞菌。42生长生长+-明胶明胶液化液化+-鞭鞭毛毛单鞭毛单鞭毛铜绿假单胞菌

14、铜绿假单胞菌丛鞭毛丛鞭毛荧光假单胞菌荧光假单胞菌丛鞭毛丛鞭毛恶臭假单胞菌恶臭假单胞菌OF试验：试验：O氧化酶：氧化酶：+精氨酸水解：精氨酸水解：+葡萄糖酸氧化：葡萄糖酸氧化：+氮气：氮气：+医院环境及用品、临床标本医院环境及用品、临床标本分离培养基分离培养基涂片检查涂片检查肉汤培养基肉汤培养基血琼脂平板血琼脂平板SS、麦康凯琼脂平板、麦康凯琼脂平板挑选可疑菌落（挑选可疑菌落（37 培养培养1824h观察观察有无色素产生，色素鉴别接种金氏有无色素产生，色素鉴别接种金氏A、B培养基）培养基）无色素菌株无色素菌株42+绿脓素绿脓素+绿脓菌荧光素绿脓菌荧光素铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌假单胞菌鉴定程序假单胞菌鉴定程序1、形态观察：G-杆菌，多形性，有鞭毛、菌毛、荚膜，无芽孢,产荧光素和绿脓素2、培养特性：专性需氧，4不生长42 生长，在血平板上经3537，1824h培养可表现为：菌落大而扁平、湿润、边缘不齐,有金属光泽,有生姜样芳香气味,菌落周围有宽大的兰绿色透明溶血环。3、生化鉴定：氧化酶阳性，触酶阳性，O-F试验氧化型、木糖产酸不产气，液化明胶，还原硝酸盐产生氮气，吲哚阴性，甲基红阴性、VP阴性、利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。需做的实验：革兰染色、O/F、氧化酶、触酶、IMVC、精氨酸双水解酶、硝酸盐还原实验2