免疫比浊法ppt课件

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1、免免 疫疫 系系1 1实验实验 免疫比浊法检免疫比浊法检 测免疫球蛋白测免疫球蛋白2 212材材 料料 和和 方方 法法3实实 验验 结结 果果实实 验验 原原 理理3 3实验原理实验原理 免疫球蛋白（免疫球蛋白（IgIg）是指一类具有抗体样结构或具有抗体活性的球蛋白，能与诱导其）是指一类具有抗体样结构或具有抗体活性的球蛋白，能与诱导其产生的抗原发生特异性结合，是体液免疫应答的主要效应分子。免疫球蛋白水平增产生的抗原发生特异性结合，是体液免疫应答的主要效应分子。免疫球蛋白水平增高常见于各种慢性细菌感染，如慢性骨髓炎、慢性肺脓肿等。在多种自身免疫病、高常见于各种慢性细菌感染，如慢性骨髓炎、慢性肺

2、脓肿等。在多种自身免疫病、肝脏疾病患者中可有肝脏疾病患者中可有IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM升高：在系统性红斑狼疮患者中以升高：在系统性红斑狼疮患者中以IgGIgG、IgAIgA或或IgGIgG 、IgMIgM升高较多见；在类风湿关节炎中则以升高较多见；在类风湿关节炎中则以IgMIgM升高为主。免疫球蛋白水平降低升高为主。免疫球蛋白水平降低多见于先天性体液免疫缺乏病、肾病综合症、吸收不良综合症、淋巴瘤、放射损伤多见于先天性体液免疫缺乏病、肾病综合症、吸收不良综合症、淋巴瘤、放射损伤和免疫抑制剂治疗后等情况。和免疫抑制剂治疗后等情况。4 4实验原理实验原理血浆蛋白分析技术经历了：血浆蛋

3、白分析技术经历了：试管沉淀反应、琼脂凝胶的扩散实验发展到现代免疫分析技术，其中很试管沉淀反应、琼脂凝胶的扩散实验发展到现代免疫分析技术，其中很重要得一类就是免疫比浊法。重要得一类就是免疫比浊法。5 5实验原理实验原理 抗体（抗体（AbAb）与可溶性抗原（）与可溶性抗原（AgAg）反应，形成一定结构的免疫）反应，形成一定结构的免疫复合物，在复合物，在PEGPEG作用下，成为悬浮于反应溶液中的微粒，使样品浊作用下，成为悬浮于反应溶液中的微粒，使样品浊度发生变化。在沉淀反应中形成的复合物微粒具有特殊的光学性质，度发生变化。在沉淀反应中形成的复合物微粒具有特殊的光学性质，当一定波长光线通过浊度发生变化

4、的反应混合物时，由于被不溶性当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时，由于被不溶性免疫复合物吸收而减弱，故在一定范围内吸光度与免疫复合物量呈免疫复合物吸收而减弱，故在一定范围内吸光度与免疫复合物量呈正相关。当抗体浓度固定时，样品的浊度与其中所含抗原量成正比。正相关。当抗体浓度固定时，样品的浊度与其中所含抗原量成正比。6 6实验原理实验原理 聚乙二醇即聚乙二醇即PEGPEG是中性、无毒且具有独特理化性质和良好的生物相溶性的高是中性、无毒且具有独特理化性质和良好的生物相溶性的高分子聚合物，聚乙二醇具有高度的亲水性，在水溶液中有较大的水动力学体积，分子聚合物，聚乙二醇具有高度的亲水性，在水溶液中

5、有较大的水动力学体积，并且没有免疫原性。并且没有免疫原性。在免疫反应中，为增强抗原抗体反应常使用增聚剂，如在免疫反应中，为增强抗原抗体反应常使用增聚剂，如3-43-4的聚乙二醇等，的聚乙二醇等，利用其破坏抗原抗体的水化层，促进其靠近反应，但如浓度不适合，高了会影响利用其破坏抗原抗体的水化层，促进其靠近反应，但如浓度不适合，高了会影响其它溶质或产生非特异性聚集影响结果。其它溶质或产生非特异性聚集影响结果。7 7优点优点 稳定性好，敏感性高稳定性好，敏感性高(达达ng/L)ng/L)、精确度高，干扰因素少，结果判断更加客观、精确度高，干扰因素少，结果判断更加客观、准确。准确。快速、简便，结果回报时

6、间短，便于及时将各种信息向临床反馈，又可节约快速、简便，结果回报时间短，便于及时将各种信息向临床反馈，又可节约大量人力物力，利于大批量样品的处理。大量人力物力，利于大批量样品的处理。能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染。能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染。1.1.可利用多道计数器、测光仪，同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析可利用多道计数器、测光仪，同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析项目，血清用量少，具有明显的应用优势。项目，血清用量少，具有明显的应用优势。免疫比浊法的特点：免疫比浊法的特点：实验原理实验原理8 8缺点缺点当抗体或抗原大量过剩时，出现可溶性的复合物，造成

7、误差。当抗体或抗原大量过剩时，出现可溶性的复合物，造成误差。应维持反应管中的抗体蛋白量始终过剩，此值要预先测定。应维持反应管中的抗体蛋白量始终过剩，此值要预先测定。受血脂浓度影响。脂蛋白的小颗粒可形成浊度，造成假性升高。受血脂浓度影响。脂蛋白的小颗粒可形成浊度，造成假性升高。少量小抗原抗体复合物极难形成浊度，除非放置较长时间少量小抗原抗体复合物极难形成浊度，除非放置较长时间 。如要形成较大的的复合物，抗原抗体量应较大。如要形成较大的的复合物，抗原抗体量应较大。实验原理实验原理免疫比浊法的特点：免疫比浊法的特点：9 9实验材料实验材料1.1.免疫球蛋白免疫球蛋白A,M,GA,M,G（IgA,Ig

8、M,IgGIgA,IgM,IgG）测定试剂）测定试剂2.2.免疫球蛋白免疫球蛋白A,M,G A,M,G（IgA,IgM,IgGIgA,IgM,IgG）校准品，蒸馏水，）校准品，蒸馏水，血清样本血清样本3.3.微量加样枪、试管微量加样枪、试管4.4.分光光度仪、水浴箱分光光度仪、水浴箱1010实验方法实验方法空白管空白管校准管校准管样本管样本管+蒸馏水蒸馏水（1010m mL L）+校准品校准品（1010m mL L）+样品血清样品血清（1010m mL L）ODOD340340+IgX+IgX试剂试剂（1mL1mL）37375min5min3737,10min,10min混匀混匀1111IgIg浓度（浓度（g/Lg/L）=Ig Ig校准浓度（校准浓度（g/Lg/L）样本管吸光度样本管吸光度校准管吸光度校准管吸光度结果计算方法：结果计算方法：实验结果实验结果IgAIgA：1.72 g/L 1.72 g/L IgGIgG：9.77 g/L 9.77 g/L IgMIgM：1.37g/L 1.37g/L