细胞样品收集注意事项

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1、细胞样品收集方法一、 蛋白以T75培养瓶为例1. 把培养上清彻底转移至50或15ml离心管中，用PBS洗涤1-2次（PBS需彻底吸干，洗液时把板倾斜），每次洗涤时，均需把PBS转移到同一个50或15ml离心管，每培养瓶细胞准备一个离心管，切勿混淆；2. 每培养瓶加入300ul RIPA裂解液（加入裂解液时，一定用放平，是细胞与裂解液充分接触）, 把上述离心管离心（水平转角离心机，1000RPM, 8min）,彻底移除上清，加入300ul RIPA裂解液，吹打12下后，把裂解液转移至同一培养瓶中，则培养瓶中合并有200ul，盖好盖子，用封口膜封口后置于-80保存；注意做好标记！（如果用PBS洗涤

2、后，细胞未飘起，则把600ul RIPA裂解液直接加入培养瓶）备注：给你提供的RIPA裂解液用EP管装，每管990ul，同时提供PMSF,使用时每管加入10ul PMSF,混匀再使用。操作要快，做好一瓶，放好一瓶！强烈建议一瓶一瓶的做。表一培养器皿RIPA裂解液用量备注6孔板150-300ul根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml35mm培养皿150-300ul根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml60mm培养皿300-600ul根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml100mm培养皿600-1200ul根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1mlT25培养瓶300-600ul根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1mlT75培养瓶600-1000ul根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml