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1、实验一实验一 MS培养基的配制培养基的配制1.了解植物外植体离体培养所需各种营养了解植物外植体离体培养所需各种营养成分及激素种类。成分及激素种类。2.初步掌握培养基母液配制方法。初步掌握培养基母液配制方法。u 植物材料培养要获得成功，并正常生长，植物材料培养要获得成功，并正常生长，培养基的成分是一个决定性因素，不同植培养基的成分是一个决定性因素，不同植物要求不同的培养基。物要求不同的培养基。u大多数植物组织培养所用的培养基由无机大多数植物组织培养所用的培养基由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成。有机附加物等五类物质组成。u 在配
2、制培养基之前，为了使用方便、简化操作、在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量准确，减少每次配药称量各种化学成分所花用量准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差，常常将配制培养基所需无机大费的时间和误差，常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰箱内保存。箱内保存。u当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母液稀释即可。种母液稀释即可。1、用具器材、用具器材 灭菌锅、普通及精密天平
3、、烧杯、医用瓷缸、量灭菌锅、普通及精密天平、烧杯、医用瓷缸、量桶、移液管、试剂瓶、药勺、玻璃棒、桶、移液管、试剂瓶、药勺、玻璃棒、pH试纸。试纸。2、药品试剂、药品试剂 蒸馏水、蒸馏水、1N HCl、1N NaOH、95%酒精、蔗糖、酒精、蔗糖、琼脂、各种所需化学药品（分析纯）。琼脂、各种所需化学药品（分析纯）。1、母液配制、母液配制（1）配制）配制10倍倍1 L MS大量元素母液大量元素母液NH4NO3 16.5 g KH2PO4 1.7 gKNO3 19 g CaCl22H2O 4.4 gMgSO47H2O 3.7 g配制成配制成200倍倍1 L母液，依次称取母液，依次称取:KI 0.16
4、6 g Na2MoO42H2O 0.05 gH3BO3 1.24 g CuSO45H2O 0.005 gMnSO44H2O 4.46 g CoCl26H2O 0.005 gZnSO47H2O 1.72 g（2）配制）配制MS微量元素母液微量元素母液配制成配制成200倍倍l L铁盐母液，依次称取铁盐母液，依次称取:EDTAEDTA二钠二钠（Na2EDTA7H2O）7.46 g FeSO47H2O 5.56 g（3）配制）配制MS铁盐母液铁盐母液 配制成配制成200倍倍1 L有机母液，依次称取：有机母液，依次称取：盐酸硫胺素盐酸硫胺素（VB1）0.02 g烟酸烟酸 0.1 g 盐酸吡哆醇盐酸吡哆醇
5、（VB6）0.1 g（4）配制）配制MS有机母液有机母液（5）配制）配制MS有机母液有机母液配制成配制成200倍倍1 L有机母液：有机母液：肌醇肌醇 20.0 g（6）配制）配制MS有机母液有机母液配制成配制成200倍倍1 L有机母液：有机母液：甘氨酸甘氨酸 0.4 g 0.1mg/mL 的的6-BA溶液：取溶液：取25mg的的6-BA，用少，用少量量1N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250mL。0.1mg/mL NAA：取：取25mg的的NAA可溶于热水中可溶于热水中或用少量或用少量95%乙醇或少量乙醇或少量1N的的NaOH溶解后，再溶解后，再加水定容至加水定容至2
6、50mL。0.1mg/mL 2，4-D：取：取20mg的的2，4-D溶于少量溶于少量95%乙醇中，再加水定容至乙醇中，再加水定容至200mL。（7）植物激素的配制）植物激素的配制 2、培养基的配制、培养基的配制（以（以1L培养基为例）培养基为例）1、计量、计量 根据配制培养基的量根据配制培养基的量（1L）和母液的浓度计算需和母液的浓度计算需要吸取母液的量，计算公式：吸取量要吸取母液的量，计算公式：吸取量 mL=培养基培养基中物质浓度（中物质浓度（mg/L）1000mL/母液浓度母液浓度（mg/L）。）。母液浓度母液浓度/培养基中物质浓度培养基中物质浓度=稀释倍数稀释倍数2、移液、移液 取大烧杯
7、（取大烧杯（1L）一只，按照计算吸取母液的量）一只，按照计算吸取母液的量依依次吸取次吸取各母液置于烧杯中备用。各母液置于烧杯中备用。3、称取、称取 称取称取10g琼脂，琼脂，30g蔗糖备用。蔗糖备用。4、融化、融化 用搪瓷量杯量取用搪瓷量杯量取600700mL 的蒸馏水放在电炉上，的蒸馏水放在电炉上，加入琼脂，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半加入琼脂，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状将其取下，加入蔗糖，搅拌使之溶解。透明状将其取下，加入蔗糖，搅拌使之溶解。5、混合、混合 将融化的琼脂和蔗糖倒入装有母液的大烧杯中，充将融化的琼脂和蔗糖倒入装有母液的大烧杯中，充分混合，用蒸馏水定容到分混
8、合，用蒸馏水定容到1000mL。6、调、调pH 用滴管吸取物质的量浓度为用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的的NaOH 或或HCl溶液调溶液调pH 为为6.0。编号编号6-BA（mg/l）NAA（mg/l）2,4-D（mg/l）第一组第一组0.50.11.0第二组第二组0.50.52.0第三组第三组0.50.050第四组第四组1.00.10共分共分4组，每组配组，每组配750mL培养基，每瓶倒培养基，每瓶倒25-30mL，共接种，共接种28瓶左右瓶左右每瓶编号每瓶编号1（1/2/3/4）n号号分组情况分组情况3、培养基的分装和灭菌、培养基的分装和灭菌l溶化的培养基应该趁热分装。溶化的培养基应该趁热分装。l分装时，将烧杯中的培养基倒入锥形瓶中，每瓶分装时，将烧杯中的培养基倒入锥形瓶中，每瓶约约25 mL-30 mL。l注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。l用封口膜封口并编号。用封口膜封口并编号。l灭菌：灭菌：121，15-20 min。
实验一MS培养基的配制【青苗教育】
