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1、此资料由网络收集而来，如有侵权请告知上传者立即删除。资料共分享，我们负责传递知识。江苏省姜堰市溱潼中学高中生物选修一血红蛋白的提取和分离学案【基础梳理】一、凝胶色谱法 1、概念：也称做 ；是根据 分离蛋白质的有效方法。 2、原理当 不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ，而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 ，从而使 不同的蛋白质分子得以分离。二、缓冲溶液 1、作用：在一定范围内，抵制 的 对溶液pH的影响，维持pH 。2、配制：由 种缓冲剂溶解于 中配制而成，通过调节缓冲剂的 就可以得到不同pH范围内
2、使用的缓冲液。三、电泳 1、概念：指 在电场的作用下发生 的过程。2、原理：在一定的 下， 、 等生物大分子的可解离基团会带上 或 ，在 的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。 3、作用：电泳利用了待分离样品中各种分子 的差异及分子本身的 、 的不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中 的分离。 4、方法：常用的电泳方法有 和 。测定蛋白质分子量时通常使用 。 四、实验操作 1、样品处理:通过 、 、 等操作收集血红蛋白溶液。 (1)红细胞的洗涤：目的是 。分离时采取 ，直至上清液中没有 ，表明红细胞已洗涤干净。 (2)血红蛋白的释放：在 和 的作用下，红细胞破裂，释放出血
3、红蛋白。(3)分离血红蛋白溶液：把 离心后，将试管中的液体用 过滤、除去 ，于 中静置片刻后，分离出下层的 。离心管自上而下的物质分别为 2、粗分离：即透析 (1)方法：将血红蛋白溶液装入 ，将 放入一定量适宜浓度的 中，透析 (2)目的：将 的杂质除去。 (3)原理：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子物质保留在袋内。 3、纯化:通过凝胶色谱柱将相对分子质量较大的杂质蛋白除去。操作如下： (1)凝胶色谱柱的制作。 (2)凝胶色谱柱的装填 材料：本实验使用的是 。 方法：凝胶用 充分溶胀后。配成 ，一次性 倒人色谱柱内。不能有 存在，否则就要 。 (3)样品的加入和洗脱 a、准备：加样前，打开
4、流出口，使柱内凝胶面上的 缓慢下降到与 平齐，关闭出口。 b、加样：用 小心地将1mL透析后的样品加到 的顶端，注意不要破坏 。 c、加样后：打开下端出口，使样品渗入 内。 洗脱：加入 ，打开下端出口，进行 。 4、纯度鉴定：在鉴定的方法中，使用最多的是 。 3、凝胶色谱柱的装填：在装填凝胶柱时，不得有气泡存在。气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的 ，降低 。 4、蛋白质的分离：如果红色区带 地移动，说明色谱柱制作成功。练习：1.已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种物质，其分子大小、电荷的性质和数量情况如下图所示。下列叙述正确的是() A.将样品放入透析袋中透析12 h，若分子乙保留在袋内，则分子甲也
5、保留在袋内B.若五种物质为蛋白质，则用凝胶色谱柱分离时，甲的移动速度最快C.将样品以2 000 r/min的速度离心10 min，若分子戊存在于沉淀中，则分子丙也存在于沉淀中D.若五种物质为蛋白质，用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，则分子甲和分子戊形成的电泳带相距最近2.某同学使用下列装置或操作进行血红蛋白的提取与分离实验，请据图回答问题： 甲 乙（1）甲、乙用于提取和分离血红蛋白，先对样品进行处理要用图 装置进行 ；乙图底端试管中首先收集到的是相对分子质量较 (大小)的蛋白质，原因是 （2）如果用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳处理乙实验中获得的蛋白质，蛋白质迁移的取决于 。（3）分子量测定：化学物质SDS能使蛋白质变性，解聚成单条肽链。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中加入一定量的SDS，电泳迁移率完全取决于肽链的分子大小。右图为本实验中用SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血浆某白蛋白的结果。根据电泳结果，某同学得出“提取的血浆某白蛋白有两条肽链”的结论，这种说法可靠吗？理由是 。
江苏省姜堰市溱潼中学高中生物血红蛋白的提取和分离学案选修1
