水产品中甲醛的测定

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1、XXX实验室检测中心管理体系文件作业指导书（第A版 第0次修改）文件编号：编写：审核：批准：批准日期：受控状态： 受控 非受控正副版本： 正本 副本持有者：发布日期： 实施日期：作业指导书文件编号：第1页 共8页标 题：水产品中甲醛的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日1. 目的使甲醛的测定处于受控状态，保证甲醛检测结果的准确性与一致性；规范参加本项目检测工作人员的操作规程。2. 适用范围适用于水产品中甲醛含量的定性筛选和定量测定。3. 引用标准食品中甲醛的快速测定方法 DB44/T 519-2008水产品中甲醛的测定 SC/T 3025-2006无公害食品 水发水产品 NY 5

2、172-2002分析实验室用水规格和试验方法GB/T 6682-2008食品卫生检验方法 理化部分 总则 GB/T 5009.1-20034. 概述甲醛是一种具有防腐、抗菌、杀菌作用的化学物质，与水混合成30%至40%浓度的甲醛溶液又称为福尔马林。甲醛腐蚀性强，有刺激性，味臭，能刺激鼻喉黏膜，具有防腐和凝固蛋白质的作用。对人体神经系统、免疫系统、肝脏等有严重毒害，对啮齿类动物实验已证明甲醛的致癌作用。对水产品进行甲醛检测，可分为定性检测和定量分析两种，如采取先定性筛选，再定量确定其含量。5. 定性筛选（间苯三酚法）5.1. 原理利用水溶液中游离的甲醛与某些化学试剂的特异性反应，形成特定的颜色进

3、行鉴别。5.2. 仪器设备5.2.1. 组织捣碎机5.2.2. 振荡器5.2.3. 离心机5.2.4. 百分天平5.2.5. 移液器5.2.6. 10ml比色管作业指导书文件编号：第2页 共8页标 题：水产品中甲醛的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日5.3. 试剂5.3.1. 实验用水为GB/T 6682规定的二级水或去离子水；除非另外注明，本法所用试剂均为分析纯。5.3.2. 甲醛参比液(5mg/kg)：吸取甲醛标准液（100ug/ml）2.5ml于50ml容量瓶中，定容。5.3.3. 1%间苯三酚溶液：称取固体间苯三酚1g，溶于100mL12%氢氧化钠溶液中。（此溶液临时现

4、配现用）5.3.4. 10%甲醛配液。（此溶液临时现配现用）5.3.5. 盐酸溶液（1+9）：量取盐酸100ml，加到900ml的水中。5.4. 操作步骤5.4.1. 取样5.4.1.1. 鲜活水产品鲜活水产品取肌肉等可食部分测定。鱼类去头、去鳞，取背部和腹部肌肉；虾去头、去壳、去肠腺后取肉；贝类去壳后取肉；蟹类去壳、去性腺和肝脏后取肉。5.4.1.2. 冷冻水产品冷冻水产品经半解冻直接取样，不可用水清洗。5.4.1.3. 水发水产品水发水产品可取其水发溶液直接测定。或将样品沥水后，取可食部分测定。5.4.1.4. 干制水产品干制水产品取肌肉等可食部分测定。5.4.2. 制样将取得的样品用组织

5、捣碎机捣碎，称取10g于50ml离心管中，加入20ml蒸馏水，震荡30min，离心后取上清液作为样品制备液进行定性测定。也可直接取用水发水品的水发溶液澄清液作为样品制备液进行定性筛选实验。5.5. 测定取样品制备液5ml于10ml纳氏比色管中，然后加入1mL1%间苯三酚溶液，两分钟内观察颜色变化。溶液若呈橙红色，则有甲醛存在，且甲醛含量较高；溶液若呈浅红色，则含有甲醛，且含量较低。对照甲醛参比液反应后的颜色，如接近或比之颜色要深则该样品须做定量测定，溶液若无颜色变化，甲醛未检出。水发鱿鱼、水发虾仁等样品的制备液因带浅红色，不适合此法。作业指导书文件编号：第3页 共8页标 题：水产品中甲醛的测定

6、第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日6. 定量测定6.1. 分光光度法6.1.1. 原理水产品中的甲醛在磷酸介质中经水蒸气加热蒸馏，冷凝后经水溶液吸收，再用乙酰丙酮与蒸馏液中甲醛反应，生成黄色的二乙酰基二氢二甲基吡啶，用分光光度计在413nm处比色定量。6.1.2. 仪器设备6.1.2.1. KjeltecTM8200定氮仪6.1.2.2. 722N可见分光光度计6.1.2.3. 万分天平6.1.2.4. 组织捣碎机6.1.2.5. 移液器6.1.2.6. 比色管，容量瓶等玻璃仪器6.1.3. 试剂6.1.3.1. 实验用水为GB/T 6682规定的二级水或去离子水；除非另外注明，本

7、法所用试剂均为分析纯6.1.3.2. 磷酸溶液（10%）：移取磷酸10 mL，用水稀释至100 mL。6.1.3.3. 乙酰丙酮溶液：称取乙酸铵25 g，溶于100 mL蒸馏水中，加冰乙酸3 mL和乙酸丙酮0.4 mL，混匀，储存于棕色瓶，在2-8冰箱内存放，可用20至30天。6.1.3.4. 甲醛标准液（100ug/ml）6.1.3.5. 甲醛标准使用液：精确吸取12.50ml甲醛标准溶液（100ug/ml）于250ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀备用（此溶液应当天配制）6.1.4. 样品处理将按5.4.1要求取得样品，用组织捣碎机捣碎，混合均匀后称取10.00g，移入定氮仪消化管中，用2

8、0ml蒸馏水浸泡30min后加入磷酸溶液后立即将消化管接回蒸馏头，开启定氮仪内置蒸馏程序，开始蒸馏。以三角锥瓶接收蒸馏液。将所有蒸馏液移入250ml容量瓶中，定容，混匀。6.1.5. 操作方法6.1.5.1. 甲醛标准液的标定本实验用的甲醛标准液（6.3.4）为环境保护部标准样品研究所签发的标准样品，相对不确定度为3%。见附录1作业指导书文件编号：第4页 共8页标 题：水产品中甲醛的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日6.1.5.2. 标准曲线的绘制精确吸取甲醛标准使用液0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml于20ml比色管中，加水至10ml；加入1

9、ml乙酰丙酮溶液，混匀，置沸水浴中加热10min，取出用水冷却至室温；以空白液作参比，于波长413nm处，以1cm比色皿进行比色，测定吸光度，绘制标准曲线（吸光度含甲醛浓度）【大约2030天绘制一次】6.1.6. 样品测定准确吸取定容后的样品蒸馏液10ml，加入1ml乙酰丙酮溶液，混匀，置沸水浴中加热10min，取出用水冷却至室温；以空白液作参比，于波长413nm处，以1cm比色皿进行比色，记录测得吸光度。（每个样品应作两个平衡测定，取其算术平均值）6.1.7. 结果计算试样中甲醛含量按下式计算，计算结果保留两位有效数字。式中：X水产品中甲醛含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C查曲线结果，

10、单位为微克每毫升（ug/ml）；10显色溶液的总体积，单位为毫升（ml）；m样品质量，单位为克（g）；V用于测定所吸取的样品蒸馏液体积，单位为毫升（ml）；200样品蒸馏液定容体积，单位为毫升（ml）。6.1.8. 回收率、检出限及精密度6.1.8.1. 回收率60%。6.1.8.2. 样品中的甲醛检出限为0.50 mg/kg。6.1.8.3. 在重复性条件下获得两次独立测定结果：样品中甲醛含量5 mg/kg时，相对偏差10%；样品中甲醛含量5 mg/kg时，相对偏差5%。作业指导书文件编号：第5页 共8页标 题：水产品中甲醛的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日6.2. 高效液

11、相色谱法6.2.1. 原理甲醛在酸性条件下与2，4-二硝基苯肼在60水浴衍生化生成2，4-二硝基苯腙，经二氯甲烷反复分离提取后，经无水硫酸钠脱水，水浴蒸干，甲醛溶解残渣-18柱分离，紫外检测器338nm检测，以保留时间定性，根据峰面积定量，测定甲醛含量，甲醛含量高效液相色谱图见附录6.2.2. 仪器6.2.2.1. 高效液相色谱，附紫外检测器6.2.2.2. 高速离心机6.2.2.3. 10mm150mm具塞玻璃层析柱6.2.2.4. 恒温水浴锅6.2.2.5. 旋涡混合器6.2.2.6. 移液器：1m；微量进样器；20具塞比色管6.2.2.7. 0.22m滤膜6.2.3. 试剂6.2.3.1

12、. 甲醇：色谱纯，经过滤、脱气后使用6.2.3.2. 二氯甲烷6.2.3.3. 2，4-二硝基苯肼溶液:称取100mg2，4-二硝基苯肼溶解于24mL浓盐酸中，加水定容至100mL6.2.3.4. 甲醛标准贮备溶液：配制及标定见本标准6.1.3.8条，临用时稀释至20g/L6.2.3.5. 无水硫酸钠：经550高温灼烧，干燥器中贮存冷却后使用6.2.4. 测定步骤6.2.4.1. 样品处理 取6.1.4制备水蒸气蒸馏液0.1mL1.0mL，置于5mL具塞比色管中，补充蒸馏水至1.0mL，加入0.2mL2，4-二硝基苯肼溶液，置60水浴15min，然后在流水中快速冷却，加入2mL二氯甲烷，旋涡混

13、合器震荡萃取1min，3000r/min，离心2min，取上清液再用1mL二氯甲烷萃取两次，合并3次萃取的下层黄色溶液，将萃取液经无水硫酸钠柱脱水，60水浴蒸干，放冷，取1.0mL色谱纯甲醇溶解残渣，经孔径0.22m滤膜过滤后做液相色谱分析用。作业指导书文件编号：第6页 共8页标 题：水产品中甲醛的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日6.2.4.2. 色谱条件6.2.4.2.1. 色谱柱：ODS-C18柱，5m，4.6nm250nm6.2.4.2.2. 色谱柱温度：406.2.4.2.3. 流动相：甲醇+水（60+40），0.5mL/min6.2.4.2.4. 检测器波长：338

14、nm6.2.4.3. 标准曲线的绘制 分别取20g/mL的甲醛应用液0.0mL，0.1mL，0.25 mL，0.5 mL，0.75 mL，1.0 mL（相当于0g，2g，5g，10g，15g，20g）于5mL具塞比色管中，加蒸馏水至1.0mL，按6.2.4.1处理后取20L进样。根据出现时间定性（5.1min），峰面积定量，每个浓度做两次，取平均值，用峰面积与甲醛含量做图，绘制标准曲线。取样品处理液20L注入液相色谱测得积分面积后从标准曲线查出相应的浓度。6.2.5. 结果计算 样品中甲醛的含量按式（3）计算，计算结果保留两位小数。式中：X3水产品中甲醛含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

15、C3查曲线结果，单位为微克每毫升（g/mL）；M3样品质量，单位为克（g）；V3样品测定取蒸馏液的体积，单位为毫升（mL）；200蒸馏液总体积，单位为毫升（mL）。6.2.6. 回收率样品蒸馏液中添加甲醛标准溶液计算得到的回收率90%。6.2.7. 精密度在重复性条件下获得两次独立测定结果：当样品中甲醛含量5mg/kg时，相对偏差10%；不样品中甲醛含量5mg/kg时，相对偏差5%。6.2.8. 检出限样品中甲醛的检出限为0.20mg/kg。作业指导书文件编号：第7页 共8页标 题：水产品中甲醛的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日7. 相关文件KjeltecTM8200凯氏定氮

16、仪操作规程天平称量操作规程722N可见光分光光度计操作规程8. 注意事项当发生蒸馏过程水温过高，或其他原因造成停机（定氮仪），该样须重新称样再做。蒸馏液接收处要加冰块冷凝，防止蒸馏液高温致使甲醛挥发。收集蒸馏液完成时，必须用少量蒸馏水冲洗收集管。进行比色时，要注意样品之间的交叉污染，要清洗好每个比色皿。附录1盐酸标准滴定液配制及标定1. 规定1.1. 本法所用试剂的纯度应在分析纯以上，实验用水应该符合GB/T 6682-1992中三级水的规格1.2. 本法配制及标定的盐酸溶液浓度指的是20时的浓度，在标准滴定液配制、滴定使用时若温度有差异，应按照附录1.1补正。2. 配制2.1. 盐酸标准滴定液（0.1mol/L）：量取浓盐酸9ml用水稀释至1000ml，摇匀。2.2. 甲基红-溴甲酚绿指示剂：3份0.2%溴甲酚绿乙醇溶液与2份0.1%甲基红乙醇溶液混合。3. 标定准确称取于270300干燥至恒重的无水碳酸钠0.15g-0.2g，加入50ml水使之溶解，加10滴甲基红-溴甲酚绿指示剂，用1.1盐酸标准滴定液滴定至溶液由绿色变为紫红色，煮沸2min，冷却至室温，继续滴定至溶液呈暗紫红色。同时用实验用水做空白试验。作业指导书文件编号：第8页 共8页标 题：水产品中甲醛的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日