金银花苷的提取分离及结构鉴定

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1、海矣斜技大孥天然药物化学设计试验实验报告题目：金银花昔的提取分离及结构鉴定学学院专指生：徐斌斌号：2909111（系）：生命科学与工程学院业：药物制剂（镐京）091班2012年4月18日天然药物化学课程实验任务书一、题目：金银花昔的提取分离及结构鉴定二、实验任务1. 查阅文献资料并写出金银花化学研究进展的文献综述2. 设计实验方案并进行可行性分析（方案应包括目的意义，设计原理、流程、 实验方法、时间安排、需要的仪器与试剂）3. 对实验材料进行性状、显微和理化鉴定4. 完成金银花昔单体化合物的分离及结构鉴定，鉴定数据应包括熔点、旋光 度、紫外图谱。5. 要求用薄层法对金银花昔作出纯度鉴定6. 对

2、所得数据进行分析7. 完成实验报告8. 提交少量金银花首样品。三、实验要求1. 实验中要求学生不完全依赖现成条件，能在教师指导下自己创造一些条件 完成实验。2. 实验方法力求创新。3. 目的物的纯度要求用薄层层析法和熔点的测定数据说明；4. 结构要求用紫外、红外及用薄层层析法的相关数据说明；5. 本题目要求2-4名学生配合完成一、实验报告内容1. 题目2. 实验目的3. 基本原理4. 实验所用试剂、仪器的型号及生产厂家5. 分离方法创新之处6. 自制或创造了那些实验条件条件7. 实验流程及操作方法8. 结果与分析9. 结论10. 在所完成实验的基础上提出一个新的研究课题11. 合理化建议金银花

3、昔的提取分离及结构鉴定摘要金银花昔（Lonicera japonica Thunb） 乂名金吉首，近年来研究表明，金银花 富含挥发油，此外，还含有黄酮类、有机酸等.随着人们对金银花需求量的日益增大， 野生资源远远不能满足需要，许多忍冬属植物己由野生转为家种，如忍冬，黄褐毛忍冬、 灰毡毛忍冬、华南忍冬、细毡毛忍冬等，但更多植物的引种还有待进行.在引种栽培过 程中，要保证和提高药材质量，且要注意以下儿点：（1）选择有效成分含量高的品种进 行引种，目前可暂时以绿原酸含量为衡量标准；（2）注意各种条件对有效成分含量的影 响，如忍冬体内绿原酸的含量明显地受地理分布的影响，因此对于不同的植物来说，要 尽量

4、在其最佳区域种植.我们利用金属络合法提取金银花首，逐步鉴定金银花昔的理化 性质，通过本实验，我们更加清晰的了解了关于金银花昔的理化性质及用途。关键词：金银花首、提取、鉴定摘要II1. 文献综述11.1成分来源11.2药理作用22. 实验部分32. 1金银花昔提取32. 1. 1 原理32. 1.2步骤32. 1.3流程图32. 1.4操作步骤32.2定性鉴别42. 2. 1紫外分光光度法42. 3含量测定52. 4预算63. 结果与讨论73. 1展开剂的确定9致谢12参考文献131文献综述1. 1、成分来源：金银花昔是忍冬科植物金银花(Lonicera japonica Thunb)的主要成分

5、之一。正 宗金银花三大产地，河南省封丘县，山东平邑县，河北省巨鹿市。是国家认证的金银花 原产保护地。结构及化学成分：金银花昔的结构式中文名称金银花昔别名金吉昔分子式C17H24O11分子量404.56熔点165166C物理性质白色结晶，味苦，属环烯酰菇昔类化合物，环烯醍部分的双键性 质活泼，在冷甲醇溶液中易与漠及甲氧基生成加成产物。存在于忍冬科植物莫罗 氏忍冬(Lonicera morrowii A. Gray)的果实，为常用中药，具有健胃作用，是良好的药用植物资源，具有清热解毒、凉散风热之功效，多用 于治疗外感风热或温病初起、热毒下痢、肺热咳嗽等。1.2、药理作用金银花昔是忍冬科植物金银花的

6、主要成分之一。具有广泛的抗菌活性，对溶 血性链球菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、肺炎双球菌等有较强的抑制作用。 临床上常用于解热、抑菌、消炎的银黄注射液就是由金银花首和黄苓素昔配制而 成。金银花昔的结构为木犀草素的70H与葡萄糖形成的单糖昔。金银花昔能溶于 水和醇溶液、不溶于氯仿等非极性溶液。2实验部分2.1、金银花昔提取：2.1.1、原理：利用金属络合法。其原理为：使金银花昔和金属钙离子形成金 属螯合物沉淀，其他杂质则留在了水溶液中了，然后将沉淀悬浮在乙醇中，并加 入硫酸出去钙离子，而金银花昔溶于乙醇中，蒸去乙醇即得金银花昔。2.1.2、步骤：称取金银花粗粉（30g）,置于500ml烧杯中

7、，用水提取两次，每 次持续时间为一小时，残渣弃去，过滤浓缩后加入石灰乳至PH12,然后过滤。滤液倒 掉，将沉淀金银花昔的钙螯合物悬浮与乙醇溶液中，加硫酸调节至PH2-3,复分解，过 滤。在滤液中加入浓氢氧化钠至pH7,回收乙醇溶液，再过滤布，得金银花昔沉淀，再 以95%乙醇重结晶，即得金银花昔纯品。、流程图：金银花粗粉（30g）用水提取两次 每次一小时浓缩后加入石灰乳至PH12残渣（弃去）滤液过滤残渣（弃去）沉淀（*银花昔的津螯合物）悬浮于乙醇中，加入硫酸至PH2-3,进行复分解，过滤泥液沉淀（硫酸钙）加40%氢氧化钠至PH7可淀乙醇液(金银花昔)再以95%乙醇重结晶金银而纯品、操作步骤：(a

8、) 称取金银花粗粉300g,置500ml烧杯中，加入6-8倍量的水，(250ml),加热煮 沸1小时，按照此方法提取两次。(b) 将提取液浓缩后，加入20%30%的石灰乳至PH12o(c) 收集沉淀，悬浮于乙醇中，加入硫酸至PH2-3,进行复分解，过滤，沉淀为硫酸钙。(d) 往滤液中滴加40%浓氢氧化钠至pH7,回收乙醇液，蒸发制得金银花首。2.2、定性鉴别 紫外分光光度法测定原理是：金银花昔是黄酮类化合物，而黄酮类化合物固有的结构可以与A13+ 结合形成络合物，并且在不同条件下具有不同的紫外吸收峰，因此可以对不同的黄酮 类化合物进行分析测定.张公亮和齐曼丽两人在研究中发现，黄酮类化合物直接与

9、 A1C13络合时，在415 nm可以检测到总黄酮最高吸光值.而与Al ( N03 ) 3作用时，在 271 nm处可以检测到黄酮类化合物的最高吸收值，从而可以对其进行定量测定28. 吕红29在267 nm条件下直接测定银杏制剂中的黄酮含量，效果也较好.研究30 发现，并不是所有的黄酮类化合物都能与铝盐发生络合.杜薇31在有醋酸钾或醋 酸钠存在的条件下测定刺梨总黄酮含量，A1C13与黄酮类化合物共存40 min后，可在 420 nm处测定总黄酮的含量.张进棠32采用此法测定银杏中黄酮总含量时相对标 准偏差为2. 1%.同时，张兰杰33利用双波长法测得黑玉米花粉中总黄酮平均含量 为3. 53%.

10、此法稳定可靠，重现性好.另外，肖福坤通过三波长分光光度法测定芹菜 中总黄酮的质量分数质量分数为34,回收率为96. 8% 105. 9% ,变异系数小于 0. 49% ,方法的准确度与精密度均令人满意，而且操作简便易行.2.3、含量测定直接测定法是依据黄酮自身结构的特点，不使用显色剂，直接在其特征吸收峰处 对供试样进行测定。黄酮类化合物在紫外光在200 nm 400 nm的区域内有两个相应区 域特征吸收，既峰带 (300 nm 400 nm)和峰带 (220 nnT 280 nm) 11。峰 带的吸收峰较强，是直接用紫外分光光度计进行黄酮测定的重要依据12。该方法 对单一成分的样品测定简便、快

11、速、准确，具有良好的重现性，但对植物提取液来说， 杂质干扰大，易出现误差。2.4、预算 仪器：序号名称规格数量序号名称规格数量1烧杯25ml50ml 100ml3个9玻璃漏斗1个个2分液漏斗500ml1套10容量瓶10ml50ml各1个3抽滤装置套1个114玻璃棒个1个125量筒10ml 50ml100ml各2个136滤纸个5个117天平1个158移液管1ml 5m1各1个试剂:序号名称单位数量序号名称单位数量1金银花粗品g300g10醋酸乙酯ml102乙醇瓶111甲酸ml103硫酸瓶112盐酸ml104氢氧化钠L413丙酮ml105石灰乳g10014甲醇ml10时间预算:五天(2-22 到

12、2-26 )提取五天(2-27到3-2)分离三点（3-3到3-5）定性鉴别一天（3-6）结构鉴定一天（3-7）含量测定3结果与讨论3. 1展开剂的确定上图为金银花昔的提取液，展开剂为（乙酸：甲酸：水其比例为7.5： 2.5:0.5）的薄层板。在紫 外灯下可以看出杂质较多。上图为金银花昔提取液在两种不同展开剂当中的对比，前者是（乙酸：甲酸：水为7.5:2.5:0.5）, 后者是（氯仿：甲醇：甲酸为8:4:0.5）。从图中可以看出：提取液过于稀释，展开系统不是太明 显，而且展开剂比例不太合适；仍需再做调整，消除拖尾现象。本次实验是在李楠老师的悉心指导下完成的，非常感谢这段时间给我们的指导与教 诲。

13、您严谨的教学态度、认真的工作作风都是我们学的榜样！在实验期间，李老师多次 帮助我分析思路，开拓视角，在我遇到困难想放弃的时候给予我最大的支持和鼓励，才 使得本实验得以顺利的完成，在此谨向李老师表示忠心的感谢和崇高的敬意。其次还要感谢施春阳老师、曾桥老师，两位老师非常的认真、负责。给我们在实验 过程中提供各种仪器与试剂，为我们实验的成功做出了很大的努力、提供了很多方便！ 再次感谢两位老师的帮助与支持。最后感谢学校、学院给我们提供这次实验的机会。Ill参考文献（1）李慧王.明.槐米中芦丁的提取结晶与含量测定.延安大学附属医院药剂科.2004. 04（2）彭素琴.刘郁林.金银花研究进展.赣南师范学院

14、学报.2007. 06（3）刘璐.付明哲.王侠.植物黄酮类化合物提取及测定方法研究进展.2001. 07（4）吴聪华.药用植物黄酮类化合物的提取方法.湖北省教育厅优秀中青年科技创新 团队项目（1200702）.2008. 03（5）邢丽红.李文龙.瞿海斌.金银花提取物中5种有机酸含量测定的紫外光谱法浙江大学药物信息学研究所，杭州，310058）.2000. 05（6）. High temperature effects on flavones accumulation and antioxidant system in Scutellaria baicalensis Georgi cells. 2011.02