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1、黏膜上皮细胞培养路线方法一：分离细胞培养法：用含双抗（100U/ml青霉素，100ug/ml链霉素）4C无菌的PBS溶液对 组织进行冲洗，将菲薄的黏膜层从黏膜下组织小心地翻揭分离下来（略呈黄色的 一面是上皮层）一黏膜剪碎后加入0.1% I型胶原酶消化（37C孵育30min）-消 化后在上述有黏膜块的酶溶液内直接加入等量的 0.25%胰蛋白酶，轻轻吹打 5min 一移除黏膜块，细胞悬液进行离心（黏膜块可用含 10%胎牛血清的 DMEM/F12 培 养基冲洗后再予去除，冲洗液也同样进行离心）一沉淀中加入适量含血清培养基， 吹打均匀后接种于细胞培养瓶。方法二：组织块培养法：用含双抗（100U/ml青
2、霉素，100ug/ml链霉素）4C无菌的PBS溶液对 组织块进行冲洗、浸泡、并剪碎（1mmX1mm大小）一黏膜块剪碎后加入0.1% I型胶原酶消化（37C孵育过夜）一离心（1000r/min, 4C5min） 弃去上清， 沉淀中加入适量含 10%胎牛血清的 DMEM/F12 培养基，吹打均匀后接种于细胞培 养瓶。方法三：ABC培养法：用含双抗（100U/ml青霉素，100ug/ml链霉素）4C无菌的PBS溶液对 组织块进行冲洗、浸泡、并剪碎（1mmX1mm大小）一黏膜块剪碎后加入0.1% I型胶原酶（酶量为组织块体积的5倍）消化（37C孵育过夜）一第2天取出，轻 轻吹打，将细胞悬液移走，组织块留在培养瓶内，加入适量含 10%胎牛血清的 DMEM/F12培养基，置37C饱和湿度C02细胞培养箱中。采用ABC贴壁法行原 代培养。即取A、B、C3个培养瓶。将细胞悬液先种于A瓶，在CO2培养箱中 孵育10mi n，轻轻倾斜培养瓶，让液体集中到瓶角后慢慢吸出全部培养液，接种 到B瓶，CO2培养箱中孵育10min,同法将细胞悬液转入C瓶中。控制培养液 液面高度在2-5mm，以去除鼻黏膜上皮细胞中的成纤维细胞和红细胞。再置37C 饱和湿度CO2细胞培养箱中孵育24h，培养液更换为含生长因子培养液，隔日 换液 1 次。
鼻黏膜上皮细胞培养路线
