目(空四格)录(黑体三号字加黑

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1、 目(空四格)录黑体三号字加黑 居中空2行以下内容行间距离倍行距摘 要宋体四号字 1关键词宋体四号字1Abstract (Times New Roman四号加黑)1Key Words(Times New Roman四号加黑)1引 言宋体四号字 11 实验局部宋体四号字21.1 仪器与试剂宋体小四号字21.2 实验方法宋体小四号字32 结果与讨论宋体四号字32.1 吸收光谱宋体小四号字32.2 测定条件的优化宋体小四号字4 分析方法特性宋体小四号字5共存物质影响宋体小四号字7样品分析宋体小四号字73 结 论宋体四号字8参考文献宋体四号字8酶催化动力学光度法测定肾上腺素宋体三号字加黑，居中学生姓名

2、：栗少娜 学号：200706030028五号宋体字不加黑，居中)化学系 化学专业五号宋体字不加黑，居中)指导教师：陈亚红 职称：副教授五号宋体字不加黑，居中)空两格摘 要(黑体小四)：本文基于肾上腺素对血红蛋白酶催化体系的抑制作用，建立了酶催化动力学光度法测定肾上腺素的新方法。本实验从酸度、显色剂浓度、过氧化氢浓度及血红蛋白浓度10-71.410-5mol/L，方法检出限为5.210-8mol/L。对浓度为9.010-6mol/L的盐酸肾上腺素进行11次平行测定相对标准偏差为3.5%。此方法可用于药物中肾上腺素含量的测定，结果令人满意。(楷体小四号字不加黑)空两格关键词(黑体小四)：肾上腺素；

3、酶催化动力学光度法；血红蛋白(楷体小四号字不加黑)(空一行)Determination of adrenaline by Enzymatic catalytic Spectrophotometry (Times New Roman四号加黑)Abstract(Times New Roman小四加黑)：A high sensitive and simple spectrophotometric method for the determination of adrenaline based on the inhibition of hemoglobin for the oxidation of H

4、2O2 with acid chrome blue K was developedThe percentage inhibition (I %) of system is calculated under the optimal experimental conditionsThe calibration curve is linear in the range of 10-71.410-5mol/L with the detection limit of 5.210-8mol/L The relative standard deviation of this method is 3.5% a

5、t 9.010-6mol/L for 11 determinationsThis method can be used for the determination of adrenaline in pharmaceuticals with satisfactory results(Times New Roman小四不加黑)Key Words(Times New Roman小四加黑)：Adrenaline；Enzymatic catalytic spectrophotometry；Hemoglobin (Times New Roman小四不加黑)引 言(宋体小三号加黑引言内容宋体小四号不加黑肾上

6、腺素(AD) 为儿茶酚胺类物质(CAs)，是一类非常重要的生理学神经递质。它通过心血管的调解、新陈代谢、内脏运动等来维持人体内部动态平衡和对急性和慢性压力的反响1,2。儿茶酚胺类物质是肾上腺髓质、肾上腺能神经元及肾上腺外嗜铬体等合成和分泌的，这类物质及代谢物的分泌、代谢的测定在根底研究及临床医学中有着重要意义，由于这类激素或神经递质在生物体中的重要作用，促使人们不断改良和探索别离和检测这类物质及其代谢物。肾上腺素是肾上腺髓质分泌的激素，一方面，它可使心血管收缩，心脑活动加强，血压急剧上升；另一方面，它是促进分解代谢的重要激素，能加强肝糖原分解，迅速升高血糖，加强机体应付意外情况的能力。此外，它

7、还具有促进白质、氨基酸及脂肪分解，增强气体代谢，升高体温等作用3。在制药学上，肾上腺素被广泛地用来治疗精神失常4、急性过敏、哮喘、支气管哮喘、心脏缓搏、心搏停止、青光眼和用作止血剂5。通过检测人体肾上腺素及其代谢产物的浓度，为药物分析及临床提供参考，因此，探索快速、方便、灵敏检测肾上腺素的方法具有重要意义。 目前国内、外测定肾上腺素的方法很多，主要有高效液相色谱法 6,7 、荧光光度法8-10、电化学分析法11、毛细管电泳法12,13、化学发光分析法14、分光光度法15等。目前检测AD各种方法各有其特点，如荧光法重现性较好，但检测灵敏度不能满足临床诊断的要求；高效掖相色谱法，方法稳定，重复性好

8、，且取样方便，能较全面反映机体交感神经系统活性，缺点在于回收率太低；液相化学发光分析法不需要大量的检测试剂，而且，可把探头小型化使整台仪器便于携带，但由于灵敏度的影响，只能用于药剂检测中2。很多方法在灵敏度、特异度和检测速度等方面还不能非常好地满足临床疾病诊断的需要。总之，HPLC法仍是目前最为先进快捷的AD临床和实验室检测法，但价格昂贵、操作较为复杂。而不需通过HPLC别离的荧光检测法是一种非常先进的分析手段，但它也存在小剂量需要提纯、检测限太高等缺乏2。在分光光度法测定法中未见酶催化动力学法测定肾上腺素的相关报道。动力学是利用混合物中各组分反响速率的差异，通过检测与反响物速率成比例关系的吸

9、光度来计算待测物质的浓度。相对于其它方法，此法具有灵敏度高、反响选择性好、设备简单、操作方便的特点，易于推广。血红蛋白( Hb) 具有和天然生物酶辣根过氧化物酶(HRP) 相同的铁卟啉辅基和相似的空间结构，因而具备了过氧化物酶的特性，并且具有稳定、价廉的优点16。在碱性介质中，血红蛋白对过氧化氢氧化酸性铬蓝K具有强烈的催化作用，而肾上腺素对该体系具有一定的抑制作用。据此建立了测定肾上腺素的高灵敏度分析方法。本实验通过研究肾上腺素对体系的抑程度来实现对肾上腺素含量的测定。此方法可用于药物中肾上腺素含量的测定，结果令人满意。1 实验局部一级标题宋体四号加黑 仪器与试剂二级标题宋体小四号加黑S-22

10、PC型分光光度计上海棱光技术；pHS-3C型酸度计上海理达仪器厂；电子分析天平北京赛多利斯天平牛血红蛋白生化试剂；上海伯奥生物科学：准确称取牛血红蛋白0.3401g，用水溶解成510-5mol/L的储藏液；工作液：储藏液用水稀释为5.0 10-6mol/L，现配现用。酸性铬蓝K北京化学试剂厂：准确称取0.0587g，用水稀释成1.010-3mol/L的储藏液；工作液：用水稀释成1.010-4mol/L的工作液，现配现用。盐酸肾上腺素标准溶液：准确称取0.0494g的盐酸肾上腺素，用水稀释成50mL得到浓度为4.510-4mol/L的储藏液；工作液：用水稀释成4.510-4mol/L，待用。H2

11、O2L用水稀释成1.010-1mol/L的储藏液；量取10mL稀释用水稀释成1.010-3mol/L的工作液，现配现用。缓冲溶液：按一定比例配制pH分别为9.1、9.5、9.8、10.1、10.4、10.7、11.0的缓冲溶液，以待使用。所用试剂均为分析纯，水均为去离子水。1.2 实验方法二级标题宋体小四号加黑3-NH4Cl缓冲溶液，浓度1.010-4mol/L的酸性铬蓝K溶液，1.010-3mol/L的H2O2溶液，不同浓度的盐酸肾上腺素标准溶液，5.010-6mol/L的牛血红蛋白，用水定容。在室温下放置15分钟后，用1cm吸收皿，以水作参比，在546nm处测量吸光度。以不加牛血红蛋白和肾

12、上腺素的试剂溶液为空白A0，不加肾上腺素的试剂溶液吸光度A1，加盐酸肾上腺素的试剂溶液吸光度A2，其计算抑制率I%= A2-A1/A0-A1用所得抑制率对盐酸肾上腺素的浓度作标准曲线。2 结果与讨论2.1 吸收光谱二级标题宋体小四号加黑如图1所示，最大吸收波长均为546nm，参加血红蛋白后试剂溶液吸光度明显降低，而参加盐酸肾上腺素后体系吸光度降低减少，说明盐酸肾上腺素对血红蛋白催化过氧化氢氧化酸性铬蓝K的体系有强烈抑制作用。图注说明宋体五号不加黑图 1 体系的吸收光谱1 NH3-NH4Cl + 2.010-5mol/L酸性铬蓝K + 1.010-4mol/lLH2O22 空白 + 1.810-

13、6mol/L血红蛋白3 空白 + 9.010-6mol/L盐酸肾上腺素 + 1.810-6mol/L血红蛋白2.2 测定条件的优化二级标题宋体小四号加黑 酸度条件的影响三级标题仿宋体小四号溶液酸度对酶促反响有很大的影响，所以NH3-NH4Cl缓冲溶液的pH要严格控制。按实验方法实验了不同pH的缓冲溶液pH在9.1到11.0之间时溶液的吸光度，结果发现随着pH的升高，盐酸肾上腺素对体系的抑制作用逐渐减小，如图2所示。3-NH4Cl缓冲溶液作为反响介质。 显色剂浓度的影响三级标题仿宋体小四号显色剂浓度的大小对体系有着较大的影响，本实验的显色剂为酸性铬蓝K，按实验方法仅改变酸性铬蓝K的用量，研究其浓

14、度对测定的影响，结果发现随酸性铬蓝K浓度的增加，I%先增大再减小，在酸性铬蓝K的浓度为2.010-5mo/L时I% 达最大值，如图3所示。因此，实验选择显色剂的浓度为2.010-5mol/L。图 2 酸度的影响NH3-NH4Cl +2.010-5mol/L酸性铬蓝K+1.010-4mol/LH2O2+9.010-6mol/L盐酸肾上腺素 + 1.810-6mol/L血红蛋白图 3 显色剂浓度的影响的NH3-NH4Cl +酸性铬蓝K+1.010-4mol/LH2O2+9.010-6mol/L盐酸肾上腺素 + 1.810-6mol/L血红蛋白 H2O2浓度的影响三级标题仿宋体小四号H2O2在体系中

15、是氧化剂，其浓度直接影响到试剂溶液的褪色效果，浓度过大过小都会对实验测定产生不利影响。按实验方法参加不同浓度的H2O2溶液，发现其浓度为6.010-57.010-5mol/L时显色剂褪色效果显著，I%出现最大值且根本恒定。实验选择图 4 Hb浓度的影响的NH3-NH4Cl +2.010-5mol/L酸性铬蓝K+1.010-4mol/lLH2O2+9.010-6mol/ L盐酸肾上腺素 + 1.810-6mol/L血红蛋白H2O2溶液的浓度为7.010-5mol/L。 血红蛋白浓度的影响三级标题仿宋体小四号Hb在体系中为酶催化剂，它使过氧化氢氧化酸性铬蓝K的体系活化，加速显色剂褪色。按实验方法参

16、加不同浓度的血红蛋白，如图4所示，随Hb浓度的增加盐酸肾上腺素对体系的抑制作用先增大再逐渐减小，在其浓度为1.010-6mol/L时抑制率达最大且根本恒定。实验选择Hb的浓度为1.010-6mol/L。2.3 分析方法特性二级标题宋体小四号加黑在确定的最正确实验条件下制作标准曲线，盐酸肾上腺素的浓度C在4.510-71.410-5mol/L范围内对该体系的抑制率I%有较好的线性关系。其线性回归方程为： r为线性相关系数，n为实验次数。方法检出限，经3Sb/K经验公式计算为 5.210-8mol/L，其中Sb为空白的标准偏差，K为线性矫正斜率。对浓度为9.010-6mol/L的盐酸肾上腺素进行1

17、1次平行测定相对标准偏差为3.5%，说明该方法具有较好的重现性和精密度。将本法与其它测定方法进行比拟见表1，可见本法具有较高的灵敏度。表1 肾上腺素不同测定方法的比拟图表说明宋体五号不加黑测定方法检出限C/(mol/L)线性范围C/(mol/L)文献流动注射荧光分法1 10-62.710-65.410-511离子色谱荧光检测法1.610-71.610-71.010-517流注射分光光度法检测3.710-62.710-53.710-418高效液相色谱法4.510-99.010-94.510-619电化学分析法3.610-85.010-71.010-420毛细管电泳法5.010-81.010-71

18、.010-512化学发光分析法7.010-92.010-81.010-514酶催化动力学光度法5.2210-84.510-71.3510-5本法2.4 共存物质影响二级标题宋体小四号加黑实验考察了多种离子和物质对9.010-6mol/L的盐酸肾上腺素测定的影响，在相对误差不大于5%的条件时，如表2所示大多数离子和物质对体系不干扰，只有少数离子存在一定程度的干扰，如Cu2+、Mg2+等，可以用EDTA作掩蔽剂，以消除干扰。表2 共存物质的影响图表说明宋体五号不加黑共存物质及离子允许倍数Cl- 、 K+ 、NO3-、 CO32- 、抗坏血酸1000Na+800Ca2+600OH-500Cu2+ 、

19、 Mg 2+12.5 样品分析二级标题宋体小四号加黑对盐酸肾上腺素注射液样品进行分析测定，分别将上海禾丰制药生产批号为070901及天津金耀氨基酸公司生产批号为0706071生产的盐酸肾上腺素注射液用水稀释10倍后按实验方法进行测定。同时进行加标回收实验，结果见表3，从表中看出，回收率为：96.7%102.3%。表3 样品分析结果(n=5)样品加标量/(10-6mol/l)测定值/(10-6mol/l)RSD/%回收率/ %01070901010010070607110123 结 论 (宋体四号加黑本实验通过研究肾上腺素对体系的抑程度来实现对肾上腺素含量的测定，建立了测定肾上腺素的高灵敏度分析

20、方法。显色剂的浓度为2.010-5mol/L，H2O2的浓度为10-5mol/L，血红蛋白的浓度为1.010-6mol/L。经过实验大局部离子或物质对此体系不产生干扰或干扰很小，结果令人满意。此方法可用于药物中肾上腺素含量的测定，此法将会是又一快捷、方便测定肾上腺素的方法。参考文献：(宋体四号加黑中文楷体五号字不加黑，英文Times New Roman五号不加黑1 Burtis C A，Ashwood E R (Eds)Tietz textbook of clinical chemistry MPhiladelphia：W B Saunders，1998，1570-15722 刘诚，黄俊，肖海

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