最新CHRONO-LOG 560Ca 中文手册注册用

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1、精品资料CHRONO-LOG 560Ca 中文手册注册用.CHRONO-LOG 560Ca 中文手册注册用CHRONO-LOG 560Ca 中文手册注册用CHRONO-LOG 560Ca全血血小板聚集分析系统操作手册仅供体外诊断使用用于检测全血或富血小板血浆的血小板聚集和ATP释放，另外可以检测钙离子流。目 录总括与说明血小板聚集实验的原理2光学聚集法3电阻法4荧光释放法4 系统特点5电阻法5一般特点5操作说明6电阻法6光学聚集法9荧光法(ATP释放)11运行标准12结果13电阻法13 光学聚集法13荧光法(ATP释放)13结果的解释14筛选过程16样本要求16全面的过程19 离子钙，形状改变

2、和在含发光物质的血小板中的聚集31药物干扰35危险性35保养与服务36电子探针组件36光路与隔膜36自动定标过程37典型聚集释放曲线附录总括与说明血管损伤后，血小板粘附于血管的损伤处，聚集、合成前列腺素，释放 5-羟色氨、ADP、ATP 。前列腺素的合成与释放产物会引起更进一步的聚集。同时血浆凝固开始、凝血酶产生、纤维蛋白形成和血小板栓子堵塞损伤的血管。由于细胞膜糖蛋白、细胞内储存颗粒、血小板酶、血浆凝血因子缺乏常引起过量出血，人临床表现为：鼻衄、损伤、擦伤失血过多。另外,外科手术的患者尽管经常存在血小板功能障碍,但直到出血不止、或术后出血不止才能发现 在1962年,Born描述了用ADP诱导

3、的血小板聚集并改革用比浊计测量富血小板血浆的聚集过程.这种改变包括:预温37度,搅拌和用记录笔记录一定时间内透过光的变化. 在1977年，Feinman设计了一台仪器,同时测量血小板聚集和ATP释放。这台仪器利用紫外光测量聚集,在聚集光路的右侧放置敏感的光度计，通过荧光的产生测量ATP的释放. 在1980年，Cardinal和Flower设计了电阻法测量全血中的聚集,非常小的电流通过两个电极,当电极刚与血接触时,在其表面会附着一层血小板,当聚集剂加入后,更多的血小板会聚集在其表面,引起电阻增加。电阻法的测量和荧光的测量又构成了一台全血荧光聚集仪。 在1984年，Wojenski和Sliver发

4、现了一种快速的方法去进行常规实验室的操作。这种方法就是同时测量聚集和ATP的释放,用血量为5毫升,30分钟内完成检测。这种方法避免富血小板血浆的准备时间。 在1985年Johnson创造了一种方法去检测洗涤血小板的钙流,这种方法有利于研究钙离子在血小板聚集中的作用。 参考文献血小板聚集实验的原理众所周知，血小板必须在一系列条件和不同试剂存在的情况下才能发生聚集。“血小板聚集”是一个术语，用来表示血小板与血小板之间的粘附。在全血或富血小板血浆中加入致聚剂，这种现象能被诱发。血小板的聚集有赖于钙离子、纤维蛋白原、单个或多个的血浆因子和致聚剂的存在。使用不同种类和浓度的致聚剂，血小板的聚集也有不同的

5、变化。比如光学法，ADP、肾上腺素、胶原、和瑞斯托霉素被广泛应用于监测和提供最快速的基本诊断信息。这些试剂的选择有其理论依据：ADP和肾上腺素都包含在血小板的储存颗粒中，它们在原始血栓形成时释放出来并诱发进一步的血小板聚集。所以体外的血小板和致聚剂的反应被证明有助于确定出血性疾病的病因。另一方面，胶原虽然在血管的结缔组织中而不在血小板中。但血管损伤后它被认为是第一个聚集或凝固前因子。因此，胶原血小板的体外实验也是非常重要的。其他试剂如凝血酶、瑞斯托霉素、钙离子载A23187、花生四烯酸、凝血因子VIII、血清胺也被用于血小板实验。血小板聚集实验是目前最有用的血小板功能体外诊断实验。它能提供其他

6、技术不可能或很难得到的结果，帮助疾病的诊断以及治疗措施的合理选择。这项实验累积起来的经验描绘了先天和获得性血小板功能障碍的图谱。血小板聚集实验的临床意义是获得性或类似性质的血小板功能缺陷的检测和诊断。加入特定的聚集试剂后，血小板是否聚集是区别不同类型的血小板功能障碍的依据。如下表所示：血小板功能缺陷聚集的研究缺陷ADP诱导聚集胶原诱导聚集瑞氏托酶素诱导聚集血小板无力症减少减少正常血小板减少症正常（1期）减少正常假性血友病正常正常异常非类固醇抗炎药正常（1期）减少异常 三种类型的聚集实验:n PRP中的光学聚集法n 全血中的电阻法n ATP释放（荧光）的检测光学聚集法血小板的体外聚集可以反映血小

7、板在体内形成初始凝血块的能力。血浆悬液中的血小板通过相对低离心力的离心从经过抗凝处理的血液样本中分离。离心的产物称为富血小板血浆（PRP）。贫血小板血浆（PPP）的制备是通过血液样本的相对高速离心得到的。Born型聚集仪或光学聚集仪是一个带有一个（或多个）加热到37摄氏度样品室的固定波长的分光光度计。同时进行持续的样品搅拌，因为在血小板和血小板的接触是决定血小板体外聚集的必要因素。Chrono-log的样品室设计可以使一束红外线同时通过两个比色杯，一个盛有PRP（样品）另一个盛有PPP（对照）。硅photodiodes检测可以通过样品的光线：认为的透光率是或者说是聚集；认为的透光率是或者说是聚

8、集。Photodiodes检测到的透光率的变化量转化为仪器的记录。双孔双红外线束的设计确保了重复性，并允许同时测量聚集和荧光。每个通道有一个分离的孔用于检测（或洗脱的血小板；透光率）和校正对照（或缓冲液；透光率）样品。光学聚集量和持续测量的检测样本和对照样本的透光率变化是成比例的。揿下按钮设置好和透光率的基线。高灵敏度的双孔双光束的检测系统，在检测样本和对照样本之间仅需的差异数即可检测。如果样本不足以进行精确的检测，聚集输出量将在两条基线检测持续循环以警告操作者。当血小板对刺激物（兴奋剂；聚集剂 ）产生应答而发生变形时，其变大的体积使PRP的透光率降低：这将记录为样本的透光率相对于PPP降低。

9、如果聚集剂的剂量足够大可以引起血小板之间的黏附而形成聚集，越来越多的光线可以通过PRP样本。透光随时间的改变被记录下来，其变化趋向于贫血小板血浆，即达到100%的透光率。体外聚集记录表达的含义： 形状变化 第一波聚集（原始聚集），可能先背离PRP基线后再回到PRP基线。 不可逆的第二波聚集，发生在血小板未知颗粒成分变为刺激物并引发额外的聚集。聚集曲线还可以表明： 刺激物（聚集百分比）引起的透光率变化的最大值。 聚集的范围或速率，每分钟的聚集百分比变化复合聚集剂和配剂常用于血小板刺激。不同的聚集剂刺激血小板聚集的不同途径。不同浓度的兴奋剂可以引出一系列曲线（剂量应答曲线）。这些检测组的应答模式与

10、已建立好正常模式和异常模式做比较。普遍认为这些信息与血小板凝血功能成分有关。全血中的电阻法血小板的体外聚集可以反映血小板在体内形成初始凝血块的能力。在抗凝血液中检测血小板，无需从血液中的其他组分中进行血小板分离。由于不需要标本离心来得到光学上的透明细胞悬液，因而可以检测完整的血小板群体。减少检测过程的耗时；血液中有形成分对血小板的影响也能表现出来。全血血小板聚集仪，要求样本加热到37度。要准备可重复使用的搅拌子后一次性搅拌子。将搅拌子和样本一起放到检测杯中。阻抗法聚集与光学法不同。电极要放到检测杯中用于检测。电极有两金属线。仪器检测电极两个电线间的阻抗，而得到结果。在重要的平衡过程中，血小板以

11、单层的形势在金属线暴露的部分，有一个稳定的阻抗值。这个阻抗值为0 ohm时的值。当加入聚集试剂后，血小板聚集并包裹到金属线上。会增加电路中的阻抗值。电路中阻抗的变化用ohm显示。加入试剂后仪器通常运行4-6分钟。电阻法的结果通常以下面的方式表示； 在测试过程中的ohm 每分钟ohm的改变，即斜率。 最大聚集率。阻抗的变化直接表明血小板聚集的数量。瑞斯脱酶素诱导的聚集全血阻抗法较敏感。ATP释放（荧光）的检测ATP的释放用的荧光检测方法。发光物的测量师是很简单的测量原理。但是大多数的可见光波长很并且很稳定，要求聚集检测过程中的检测杯的透光度要好。后来都用荧光来检测，避免了可见光的干扰。通过加CH

12、RONO-LUME试剂增强光通道对荧光的敏感。CHRONO可同时检测血小板聚集和ATP的释放。光学法检测聚集通过光路的变化在纪录曲线的改变。阻抗法可测全血或PRP。系统特点电阻法 电极探针：有根精密的金属丝组成探针有根足够长的电线，保证在水或生理盐水的清洗过程中能得到简单的清洁 标本量：总计ml，其中有450ul血450ul生理盐水，100ulCHRONO-LUME试剂 反应杯：普通塑料P/N367 搅拌磁棒：eflon 涂层P/N368 P/N367 搅拌磁棒：disposable siliconizded P/N370系统的一般特点 搅拌速度:crystal控制前方面板,每个通道能在OFF

13、到1200RPM之间以100RPM为一个单位调节 误差+/-1.0% 温度:加热模块37+/-0.2,电子控制,前方面板显示.另外可选购测定环境温度的组件. 孵育位:36.5+/-1.0下,使用1ml反应杯,每个通道6个孵育位. 电气要求:115或230V标本收集标本要求（全血）样本采集完成，要求静脉取样的位置损伤面积要小并且没有郁积。常用的诱导剂除了肾上腺素.血液标本用3.2或3.8的柠檬酸钠1:9抗凝。1份抗凝剂9份全血。样本必须用含标准抗凝剂的真空无菌管收集。测试肾上腺素的血液标本抗凝剂要求：在每毫升1.5%的柠檬酸钠中加2U/ML的HEP混合做抗凝剂。取1份抗凝剂9份全血。样本收集不需

14、要禁食，但不能做剧烈运动。不能吸烟。检测前10天或2周禁止服用影响血小板功能药物。药物对血小板功能的影响在药物影响一章中有详细说明。样本收集完毕应该立即检测。三小时内必须检测完毕。样本应保存在室温。（24-27）标本要求（富血小板血浆） 样本采集完成，要求静脉取样的位置损伤面积要小并且没有郁积。血液标本用3.2或3.8的柠檬酸钠1:9抗凝。1份抗凝剂9份全血。标本收集时为了不让血小板激活。用塑料试管或硅化的玻璃管。标本采集前，不能做剧烈运动。不能吸烟。检测前10天或2周禁止服用影响血小板功能药物。药物对血小板功能的影响在药物影响一章中有详细说明。标本采集完30分钟就可以用于测试，2.5小时完成

15、实验。样本应保存在室温。（24-27）血浆的准备1、 用颠倒浑匀的方式混合标本，不要使劲摇晃。2、制备富血小板血浆： 用100克的离心力15分钟，离心标本。用移液枪吸取PRP放到塑料试管中。试管上标明病人姓名、标本类型。3、制备贫血小板血浆：用2400克的离心力20分钟，离心标本。用移液枪吸取PRP放到塑料试管中。试管上标明病人姓名、标本类型。操作说明电阻聚集法 可使用全血、稀释血、富血小板血浆、乏血小板血浆。标本收集参见本手册 标本收集 一章操作 质控和血标本可以平行测定。以下过程采用的是单通道仪器。每个孵育孔内要放置一个干净的含1ml生理盐水的反应杯，以便干净的探针能接触到，不用时保持反应

16、杯的温度。当孵育孔准备好时，放入新反应杯和搅拌磁棒。开始预热。注意：预热一个标本的同时测定另一个标本，将缩短实验时间。打开开关，等待聚集仪温度显示到37。1) 放入5个P/N 367反应杯至孵育孔中。2) 每个反应杯都放入P/N370或者P/N368搅拌磁棒3) 预热反应杯10分钟。4) 吸取1ml标本到一个已经预热的反应杯中 如果测定的是稀释血液，请准备大量的稀释血和无菌等张盐水。或者，在加入血之前，吸取所需的无菌等张盐水到反应杯里预热。总量要达到1ml.。警告：生理盐水稀释全血时，必须使用不含防腐剂的盐水。许多试剂纯的等张生理盐水和一些灌注液、浸液含有诸如苯甲醇之类的抑制血小板聚集和分泌的

17、防腐剂。诊断用途的典型的稀释度为1：2（1份血，1份盐水）。其他用途的，血可能要稀释到1：10（1份血，9份盐水）。5）选择Small/Large/Impedance滑动开关上的Impendance 档。6）预热孵育孔内的标本5分钟7）打开加热盖，放入含有标本和搅拌磁棒的反应杯。8）选择需要的搅拌速度，建议1000或者1200 rpm 9）将电极探针装配并连接好.560CA在预热孔的前面.而500CA在预热孔的左边.10）用金属线将电极探针缠绕完整.将金属线放在探针的后面,将加热块的盖子关闭完全.11）拿下记录笔.打开记录仪12）用“Zero knob”点，让红色的阻抗取图表中央点。顺时针旋转

18、“Indepance zero knob” 使红色的阻抗笔移动到右边。逆时针则到左边。13) 温电极，样本会减少其阻抗值让红色的阻抗笔向左移动。当红色的阻抗笔停止向左移动时，证明电极何比色杯达到了需要的37。如果红色的阻抗笔走到了图表的外面。用“Impendance zero knob”从新复位。14）用聚集仪上的“Impendance zero knob”将红色的阻抗笔调到最初的纪录。左边的10（或90）。15) 仪器记录两分钟。以确认基线已经建立。如果曲线往左移动说明样本仍在预温。用“Impendance zero knob”根据需要从设置基线。注意：如果曲线往左边走，证明样本中有自发聚集

19、产生。更换样本或检查自发聚集产生的原因。 16）按住聚集仪上的定标按钮，仪器会自动产生标准20ohm的环形阻抗。让红色的阻抗笔往右移动。同时，另一个手用聚集仪上的“impendance gain knob”在表格中的基线上标记50。这个步骤标定仪器在标准20ohm的阻抗下，记录笔移动40个小方格。顺时针旋转“impedance knob”将加快纪录笔的移动速度，逆时针将降低其移动速度。17）打开加热块盖，加CHRONO-PAR试剂到样本中。可用P/N388或353微量加样器。注意：每个试验的试剂用量很少。加样小孔要求是潮湿的并且没有气泡。应此，在用micro bore 时，现在其中装满试剂，后

20、排出试剂，重复操作2-3次。最后根据要求的试剂量排出多余的试剂。将需要的试剂留下。用微量加样器加样时，加样枪头必须到检测杯的底部，并且快速、完全的加入试剂，千万不要将试剂加到样本的上面，这样会使试剂、样本混合不均匀。移走加样枪时，按一下活塞，以阻止样本进入到micro bore中。做每个试验都要更换micro bore每天的试验完成后都要丢掉micro bore。为了保护plunger更换 一个干净的micro bore。18）关闭加热块盖子，仪器纪录反应时间内的曲线。1-6分钟。19）试验完成，拿走纪录笔，关掉记录仪。20）打开加热块盖子，从样本中取走电极。如果用的是P/N370一次性搅拌子

21、,扔掉检测杯和搅拌子,如果用的是P/N368 可重复使用的搅拌子,用P/N362搅拌子磁棒回收,扔掉检测杯.用蒸馏水以搅拌的方式清洗电极.将电极上的聚集物取走.用生理盐水冲洗并用”KIMPWIPES”檫干电极,放到下一个样本中由于检测.注意:用KIMPWIPES檫干 电极时,不能再电极上留下丝状物.如果不是连续检测样本,将电极放在有生理盐水的检测杯中,并将其放在预温孔备用.最后一个试验完成后,用流动水清洗电极,檫干并放在一个清洁干燥的检测杯中.如果没有纤维样物质.就没必要用含腐蚀剂的化学试剂来清洗电极.因为这些化学试剂会破坏电极表面的绝缘体,而导致电极不能做出基线.损坏的电极无法修理,必须从新

22、更换.单通道500- CA P/N369电极。双通道560- CA P/N369电极.如果要对电极进行消毒,将家用消毒剂1:10倍稀释后,清洁10秒,然后用蒸馏水清洗干净即可.结果结果通常以试剂加入后在反应时间内的OHM的变化来表示或以测试过程中的最大聚集率表示.如果IMPEDANCE GAIN已经设置好那么个小方格代表OHM每个大方格是个OHM每个小方格市个OHM曲线反应部分的切线为斜率与分钟的反应建立一个三角形其高为一分钟的聚集率根据表格可以直接判断出结果和最恰当的OHM光学法聚集用于血小板含量丰富血浆和洗涤血小板的检测样本收集样本收集在样本收集中有详细描述操作1) 打开聚集仪和记录仪电源

23、，等待仪器温度上升到2) 用Small/large/inpedance开关选择大小反应位小位置用P/N3ul 检测杯用P/N382 insert assembly ， 将p/n 382 放到加热块中的样本检测孔当用p/n 3比色杯和p/n 382检测时，必须将p/n 隔离物放到检测杯下面，使样本的体积增加ul注意：每个仪器都有其相匹配的p/n 382每个通道都有双样本模式再insert assembly下面有仪器型号和通道数的明确标注如果原始的insert assembly被更换，那么仪器通道与insert assembly必须有专业工程师从新配置 大位置用mlp/n367比色杯 3) 将选择

24、好的检测放到预温孔，预热分钟4) 加p/n3 搅拌子（可重复使用）到p/n3检测杯5) 加ul样本到p/n3检测杯或加ul样本到比底部有p/n3的p/n3检测杯6) 加ul参比到p/n3检测杯（PPP或缓冲液）7) 打开加热块盖子将样本放到PRP检测孔将参比物放到PPP检测孔8) 关闭预热块盖子9) 选择需要的搅拌速度rpm10) 放下纪录笔。打开纪录仪。11) 按住“baseline”钮。聚集仪上的（lower red）笔会从纪录纸上的左边从到。自动设置的基线。12) 放开“baseline”钮。聚集仪上的（lower red）笔会从纪录纸上的右边从到。自动设置的基线。如果聚集仪上的笔（lo

25、wer red）在表格上的基线中来回移动，可能有以下几个原因。 、样本杯和参笔杯位置放错。 、样本中血小板的数量小于l 3、检测杯没有放好。 等待足够长的时间，确保的基线已经建立完成。注意: 如果曲线往右移动，表明样本内有自身凝集，丢弃并更换样本，调查发生自身凝集的原因。 13) 打开加热块盖子，用p/n或微量加样枪加入 CHRONO-PAR 试剂。注意：每个试验的试剂用量很少。加样小孔要求是潮湿的并且没有气泡。应此，在用micro bore 时，现在其中装满试剂，后排出试剂，重复操作2-3次。最后根据要求的试剂量排出多余的试剂。将需要的试剂留下。用微量加样器加样时，加样枪头必须到检测杯的底部

26、，并且快速、完全的加入试剂，千万不要将试剂加到样本的上面，这样会使试剂、样本混合不均匀。移走加样枪时，按一下活塞，以阻止样本进入到micro bore中。做每个试验都要更换micro bore 每天的试验完成后都要丢掉micro bore。为了保护plunger更换 一个干净的micro bor14) 关闭加热块盖子，仪器纪录反应时间内的曲线。1-6分钟。15) 试验完成，拿走纪录笔，关掉记录仪。16) 打开加热块盖子，从样本中取走电极。如果用的是P/N 可重复使用的搅拌子,用P/N362搅拌子磁棒回收,扔掉检测杯.将参比留作下一个标本检测时用。或者仍掉结果：结果通常用聚集率和斜率表示在光学系

27、统的自动设置表格中显示，聚集等于个大方格： 那么：每个大方格表示的聚集率为每个小方格表示的聚集率为根据纪录的表格可直接确定结果并报告出完整的报告。再取曲线速度最快的点作出切线，就可以得到斜率，根据分钟的反应建立一个三角形。三角形的高即为分钟内血小板的聚集率的改变。用斜率的形势表现出来每个大方格每分钟的聚集率为每个小方格每分钟的聚集率为发光物的检测（ATP 释放反应）可用于全血、稀释血浆、PRP和洗涤血小板的检测。打开光电倍增管的电源时，只要关掉加热快的盖子，发光的强度就能被检测出来。除非加入CHRONO-LUME试剂光的信号不会改变。在运行实验前应运行标准。发光物的检测过程与前面的光学法聚集和

28、阻抗法聚集一样，除了下面几项例外：检测前加试剂时，加样要块。样本检测前有以下几个步骤：、 阻抗法加全血或稀释血浆ul到P/N检测杯。后加ul试剂。、 阻抗法作PRP或洗涤血小板时，加UL到P/N检测杯，后加ULCHRONO-LUME试剂。、 光学法聚集做PRP或洗涤血小板时，加ul到P/N，后加ul CHRONO-LUME试剂、 光学法聚集，在P/N检测杯下面放一个P/N的橡皮垫，做PRP或洗涤血小板时，加ul样本，后加ulCHRONO-LUME试剂做ATP试验前，必须先做标准。ATP标准的定标使发光物的检测以nm的形式报告。ATP标准的运行：将P/N检测杯放到预温孔。加P/N一次性搅拌子或P

29、/N可回收的搅拌子到检测杯。预温检测杯分钟或更长。加毫升样本到预温好的检测杯。做ATP 标准的样本要做如下处理：、 全血，ul或稀释好的全血。、 PRP或洗涤血小板，如果用稀释样本检测，要大量稀释血浆。将稀释需要的无菌的等渗的盐水加入到比色杯中，后按需要加入预温好的全血体积。使总体积达到毫升。注意：当用生理盐水稀释全血时，用不含防腐剂的盐水，许多含渗盐水的试剂、冲洗剂中都有防腐剂。他会影响血小版的聚集。诊断用时，可将血液：稀释（全血盐水），也可以将血液进行：稀释（全血盐水）1) 将样本在预温孔预温分钟。2) 通过旋转Rotarygain开关使荧光强度减少到最小。3) 打开加热块盖子，将含样本的

30、检测杯放到样本孔。4) 关上加热块盖子。5) 样本预温分钟。6) 放下纪录笔，打开纪录仪7) 上面记录荧光物强度的绿色的笔将会移动到右边处8) 加CHRONO-LUME试剂到样本中9) 让纪录表格运行分钟10) 打开加热块盖子，用P/N微量加样枪加入ul CHRONO-LUME ATP标准到样本中，加入的ATP浓度为nm11) 关闭加热块盖子，直到有荧光反应峰值逆时针旋转LuminescenceGain开关来增加荧光强度，接着，继续以逐步增强的方式来增大Luminescence Gain,直到发光曲线达到图表中点纪录下Luminescence Gain值表格能描述在nmATP存在情况下，也能通

31、过表格的描述计算聚集反应中ATP 的释放 注意：加ATP标准物后，关闭加热孔盖子、旋转Luminescence Gain动作一定要迅速。如果动作慢会丢失反应的最高峰。 12) 一旦，反应的最高峰达到并被记录。拿起记录笔关掉记录仪。13) 打开加热孔盖。如果搅拌子是重复使用的。用P/N搅拌磁棒回收，丢掉比色杯。 吸收峰为nm ATP的值，用mm 或小方格表示，这个值用于计算聚集过程中样本的吸收与标准的比较，从而得到ATP释放的绝对值。ATP释放的测量加2nmATP 标准到样本后，计算公式简化为test=样本吸收峰（mm 或小方格）标准物吸收峰（mm 或小方格）nm结 果结果的计算：阻抗法通常以试

32、剂加入后在反应时间内的OHM的变化来表示如果IMPEDANCE GAIN已经设置好那么个大方格代表OHM每个大方格是个OHM每个小方格市个OHM曲线反应部分的切线为斜率与分钟的反应建立一个三角形其高为一分钟的聚集率根据表格可以直接判断出结果和最恰当的OHM。光学法光学法聚集以反应时间内的聚集率表示的基线与的基线间确认为的聚集率当用表格纪录时，PRP的基线基本上再而PPP的基线在它们之间有个小方格因此每个小方格的表示即荧光法（ATP 释放）荧光法以MM活小方格来记录加2nmATP 标准到样本后，计算公式简化为test=样本吸收峰（mm 或小方格）标准物吸收峰（mm 或小方格）nm结果解释全血和P

33、RP的聚集和 ATP释放反映 曲线可作如下解释 ：、 与不受药物干扰的正常质控的直接比较。、 与被公认和确定的正常值比较。、 用“rules of thumb”比较凝血酶的聚集与ATP的释放。比较ATP的释放和胶原、 AA的聚集。发表的聚集范围和ATP的释放范围如下；正常试剂浓度阻抗值（OHM）全血中ATP nmPRP(%)凝血酶 1 u/ml 0.5 -胶原2Ug/ml213* 6分钟时1.10.3*60花生四稀酸0.5Mm113* 6分钟时1.00.2*60Ris 1.0Mg/ml 1,35 四分钟时并且或者lag 小于70秒-60ADP 5 Um294* 六分钟时0.30.2*60聚集反

34、应对花生四稀酸（AA）无响应，表明聚集反应受环氧化物的抑制。反应在无聚集或正常范围内来回摆动证明在监测前有用药史。有些血拴或心血管疾病对血小板的聚集反应与环氧化物受到抑制类似。血小板活化时，膜磷脂代谢释放AA。AA通过环氧化酶代谢血栓烷合成酶生成血栓烷A2。只有在环氧化酶作用下，才能生成血栓烷A2，阿斯匹林及同类药物抑制血小板聚集和ATP的释放。当血小板储藏池有缺陷时，有血栓烷A2生成，所以有聚集反应，但是没有ATP的释放。 ADP诱导的全血聚集要求ADP 的浓度(20 Um )较PRP诱导聚集时要高.原因可能是红细胞能吸收部分ADP .对凝血酶的释放响应与血栓烷无关,对胶原的聚集、释放反应部

35、分依赖于血栓烷。AA的聚集和释放完全依赖于血栓烷。因此，“rules of thumb”规则描述为：1) 对凝血酶的释放反应缺乏或减少可能是储藏池的缺乏或是释放反应的缺陷。2) 胶原 的释放较凝血酶的释放要减少一半。表明血栓烷合成酶有减少。3) 对AA没有聚集也没有释放则确定血栓烷合成酶有损坏。4) 对AA只有聚集没有释放，可能是由于储藏池的减少或分泌的缺陷。VWD是血浆VWF因 子缺乏引起的血小板黏附反应的缺陷。在VWF和 GPIb受体存在下，Ris能诱导血小板黏附，当血小板对Ris的聚集没有响应时，提示为VWD疾病或GPIb受体缺乏。然而，两相的间隔时间的延长表明标本不正常。可用0.3ng

36、/ml的Ris来区别。血小板数量过多，并且聚集曲线异常，当服用ASA、ibuprofen或同类药物后，Ris的聚集会消失。因为，VWF和Fg受体会有到第二 相聚集。对Ris无聚集可能是GPIb受体缺乏。用正常血浆或高浓度的VWF能纠正聚集反应。说明，是VWD 而不是BSS.异常的GPIIB-IIIA能使除了Ris外所有的诱导剂结果异常。异常结果：服用阿斯匹林后试剂浓度阻抗值（OHM）全血中ATP nmPRP(%)凝血酶 1 u/ml 030.1 -胶原2Ug/ml144* 6分钟时030.1*30花生四稀酸0.5Mm0。50。120Ris 1.25Mg/ml 123*0。130ADP 5 Um

37、285* 六分钟时60先天性的确血栓烷合成酶异常结果与其很相似。严重的VWD试剂浓度阻抗值（OHM）全血中ATP nmPRP(%)胶原2Ug/ml185 6分钟时1360花生四稀酸0.5Mm13 六分钟时1360Ris 1.25Mg/ml 10。11。0ADP 5 Um2150460在Bernard Soulier Syndrome其结果类似 。血小板功能不全试剂浓度阻抗值（OHM）全血中ATP nmPRP(%)胶原2Ug/ml10 6分钟时0.48花生四稀酸0.5Mm 0。5 6分钟时0.38Ris 1.25Mg/ml 7.5 6分钟时0.170ADP 5 Um20.5 6分钟时0.10.1

38、血小板储藏池缺陷 试剂浓度阻抗值（OHM）全血中ATP nmPRP(%)凝血酶 1 u/ml 0.1 80胶原2Ug/ml20 6分钟时0.170花生四稀酸1Mm 12 6分钟时0.170血小板释放反应的缺乏，聚集反应的结果与其很相似。确认:为了确认疾病，必须作特殊的实验。质控：好的实验室必须做正常质控。阳性质控收集服用 ASA的病人和诊断为VWD的病人。过程有如下三个过程、 血的快速检测ASA、,布洛芬摄取和VWD疾病的过程。、 评价血小板功能的过程 。、 检查钙离子、血小板形态和聚集功能的过程 。筛选过程推断 筛选过程用于全血中阿斯匹林、布洛芬摄取和VWD的确快速确诊。阿斯匹林、布洛芬和同

39、类药物抑制血小板的环氧化物酶。在环氧化物酶作用下，可以生成TXA2，能引起聚集反应。聚集反应对花生四稀酸（AA）无响应表明有阿斯匹林、布洛芬和同类药物的摄取。VWD是血浆VWF因 子缺乏引起的血小板黏附反应的缺陷。在VWF和 GPIb受体存在下，Ris能诱导血小板黏附，当血小板对Ris的聚集没有响应时，提示为VWD疾病或GPIb受体缺乏。样本要求（全血）样本采集完成，要求静脉取样的位置损伤面积要小并且没有郁积。常用的诱导剂除了肾上腺素.血液标本用3.2或3.8的柠檬酸钠1:9抗凝。1份抗凝剂9份全血。样本必须用含标准抗凝剂的真空无菌管收集。测试肾上腺素的血液标本抗凝剂要求：在每毫升1.5%的柠

40、檬酸钠中加2U/ML的HEP混合做抗凝剂。取1份抗凝剂9份全血。样本收集不需要禁食，但不能做剧烈运动。不能吸烟。检测前10天或2周禁止服用影响血小板功能药物。药物对血小板功能的影响在药物影响一章中有详细说明。样本收集完毕应该立即检测。三小时内必须检测完毕。样本应保存在室温。（24-27）在聚集实验中，P/N365像披垫能被用到。将其放在P/N312检测杯中。具体过程如下：、 取下像披垫上白色不干胶纸。、 不要用手接触到其表面。、 将像披垫放到PRP管的底部。有胶的一面与试管底部相连。并确认以粘贴好。、 将管子放到检测孔，按常规操作。、 实验完毕，那走试管。、 将像披垫与测试杯分离，保持粘胶表面

41、的干净。、 像披垫可重复使用。如果粘胶表面干净并且干燥。可以重复使用20次。、 如果像披垫掉在检测孔里。 A 用长针从检测孔的边缘将像披垫翻起。 B 将针沿边缘刺到像披垫中。将其取出。检测准备对于双通道模式的560ca，CHRONO-PARR 花生四烯酸和瑞斯西丁素检测可以平行进行。下面的程序采取单通道系统。一个孵育孔用来装盛有1ml生理盐水的清洁的比色杯，当清洁的探针组件不用时可以放置于此杯中以保持温度。新的比色杯和搅拌棒置于空出的孵育孔以确保提供预温的比色杯。要指出的是当一个样本预温时另一个样本正在进行检测，因此缩短了检测运行的时间。1.00 将2个P/N367比色杯放入孵育孔。1.01

42、在每个比色杯中加入一个P/N 370搅拌棒。1.02 将比色杯预温10分钟或稍长1.03 用1ml生理盐水稀释1ml加了柠檬酸盐的血液。1.04 调整小/大/电阻滑片至电阻位。注意：生理盐水稀释血液时，使用不含防腐剂的盐。许多等渗盐溶液及一些冲洗和浸泡溶液含有如苯甲基乙醇等防腐剂，会抑制聚集和分泌。检测程序1.00 吸取1ml稀释血液加入预温的比色杯。1.01 预温孔预温样品5分钟。1.02 打开加热区盖，将已预温的盛有有搅拌棒和稀释好的加了柠檬酸盐的血液的比色杯放入已记录样品信息的孔。1.03 调整STIRRER搅拌速度到10（1000rpm）。1.04 电极探针组件插入位于加热孔一边的接口

43、一已标记的电极接收器。1.05 将电极探针组件稳稳插入样本孔中的比色杯中，电极探针组件上的弹簧勾固定在比色杯里并朝向背面。1.06 将电极探针组件的连接线卷起塞在探针的后面。盖紧加热区盖子。1.07 将记录笔调低并旋至制表档。1.08 用聚集仪上的零电阻旋钮将下面的红色电阻笔置于表格的中点。顺时针旋转向右，逆时针旋转向左。 变温的电极探针组件和样本会降低电阻，显示为下面的红色电阻笔向左移动。当左移停止时表明电极探针组件和比色杯达到了期望值37。如果下面的红色电阻笔偏出了表格，用零电组旋钮重新定位。1.09 用聚集仪上的零电阻旋钮将下面的红色笔的初始位置置于左手10（或90）标记处。1.10 运

44、行表格2分钟以确保基线稳定。如果曲线一直偏左则表明样本仍在加温。必要时经常用零电阻旋钮重置曲线。注意：如果曲线右偏表明样本产生了自发聚集。丢弃并重加样本或研究自发聚集的原因。1.11 按住聚集仪上的校准钮，使记录笔向右偏。在电路中加入20欧姆的标准电阻，使记录笔向右移动。1.12 同时用另一只手调动聚集仪上的电阻增加旋钮使记录笔的移动从基线调整到表格的50标记处。顺时针旋转电阻增加旋钮记录笔增加右移，逆时针旋转减小右移。1.13 打开加热区盖并用CHRONOLOG P/N 移液器加入10ul CHRONO-PARR 花生四烯酸试剂。注意：由于检测仅需要微小的试剂体积，因此应先润洗枪头，排除气泡

45、并避免加入过量的试剂。所以，用试剂反复吸打23次；使枪头湿润并排除气泡。然后，擦干枪头外部的试剂。微量移液器的枪头一定要插入比色杯的底部将试剂推入样本。不要在比色杯液面上注入试剂，因为试剂会黏附在比色杯壁上而不能与样本混匀。保持活塞压低以避免血液回流。每个检测更换一个枪头。每天检测结束后丢弃废枪头并加一个干净枪头以保护活塞。1.14关闭加热区盖并运行电阻曲线6分钟。1.15 设置检测时间结束后抬高记录笔并关闭表格档。1.16 打开加热区盖并将电极探针组件从样本中移开。丢弃比色杯和P/N370一次性搅拌棒。在盛有蒸馏水的烧杯中搅动以清洗电极组件。从电极组件上洗掉红细胞和聚集物。灰色/白色血小板聚

46、集通常被血液着色而肉眼可见。再用同样的搅动方式，用生理盐水清理电极探针组件。最后用KimwipesR刷擦干电极探针组件并插入下一个待测样本。注意：为避免电极探针组件沾染纤维，推荐使用KimwipesR刷。如果在检测样本间存在检测间隔，将电极探针组件放入一个预温孔预温的盛有生理盐水的比色杯中。检测完成后，清洗最后一个样本。用蒸馏水冲洗，干燥后置于一个干净的比色杯中。由于不产生纤维，因此不需要用化学腐蚀剂清理电极探针组件。化学腐蚀剂会破坏电极探针组件的绝缘性而无法设置电阻基线。化学腐蚀的电极探针组件无法修复，只能更换。560ca配用一对P/N369电极探针组件。如果觉得有必要净化电极探针组件，将其

47、浸入1：10稀释的普通漂白剂中大约10秒，用蒸馏水冲净漂白剂。1.17 结果通常为从加入试剂开始在给定的时间间隔里聚集的欧姆数或者式聚集的最大欧姆数。如果使用推荐的设置得到的电阻那么20欧姆即为4个大方格： 每个大方格为5欧姆 每个小方格为0.5欧姆结果直接检查图标记录并报告最近欧姆值。1.18 柠檬酸盐稀释血液加入10ulCHRONO-PARR利托菌素试剂（终浓度为1.25mg/ml），盛入另一个比色杯进行重复试验。注意从加入利托菌素试剂到产生应答和电阻变化的时间约为4分钟。结果结果解释典型的结果如上，“阿司匹林类”原因破坏血栓素合成而导致花生四烯酸聚集失败。阿司匹林，布洛芬和非类固醇抗炎症

48、药物抑制血小板环氧合酶。环氧合酶活性是花生四烯酸转变为血栓素A2的要素。血栓素A2的产生引起聚集。因此花生四烯酸聚集失败可能是由阿司匹林，布洛芬或类似药物的吸收引起。冯威勒不兰特病是特征是血小板黏附所需的血浆多因子缺乏（vWF）。抗生素利托菌素导致在vWF和GPI受体存在的血小板黏附。因此，利托菌素聚集失败可能是冯威勒不兰特病或GPI受体缺乏（伯苏病）引起。利托菌素无应答可能是冯威勒不兰特病。在一些情况下，延长的时间仅比试异常。利托菌素过度应答在II型或冯威勒不兰特病中在，可以用终浓度为.3mg/ml的利托菌素确证检测。定性异常，异常聚集曲线和不聚集通常为阿司匹林，布洛芬或类似药物的吸收引起。

49、利托菌素无聚集可能是由于伯苏病人的GPI受体缺乏引起的。重复实验中加入正常血浆或一定浓度的vWF可以校正冯威勒不兰特病的结果，而伯苏病人的结果无法校正。确认最终的诊断要由专门检测确认。全面的过程 推断用于诊断血小板功能障碍和VWD。包括血小板膜、磷脂、分泌机制、血栓烷综合酶和血桨中因子的缺乏。要发现上面的异常。必须要做凝血酶对ATP的释放反应，胶原、ADP、AA、Ris的聚集和对ATP的释放.样本要求（全血）样本采集完成，要求静脉取样的位置损伤面积要小并且没有郁积。常用的诱导剂除了肾上腺素.血液标本用3.2或3.8的柠檬酸钠1:9抗凝。1份抗凝剂9份全血。样本必须用含标准抗凝剂的真空无菌管收集

50、。测试肾上腺素的血液标本抗凝剂要求：在每毫升1.5%的柠檬酸钠中加2U/ML的HEP混合做抗凝剂。取1份抗凝剂9份全血。样本收集不需要禁食，但不能做剧烈运动。不能吸烟。检测前10天或2周禁止服用影响血小板功能药物。药物对血小板功能的影响在药物影响一章中有详细说明。样本收集完毕应该立即检测。三小时内必须检测完毕。样本应保存在室温。（24-27）试验准备：在单通道的500-ca上，值控和标本要依次运行。在双通道的560-ca上，值控和标本可平行运行。下面是单通道的运行过程。一个预热孔放好装有1毫升生理盐水的检测杯。当预热孔达到温度时，放好新的检测杯和搅拌子。当运行一个样本时，可提前预温另一个标本。

51、这样会节省检测时间。1.00将5个P/N367检测杯到预温孔1.01在每个杯子中加入一个P/N370搅拌子1.02预温检测杯10分钟或更长。1.03将标本用生理盐水做1：1 稀释。1.04选择Small/Large/Impedance滑动开关上的Impendance 档。警告：生理盐水稀释全血时，必须使用不含防腐剂的盐水。许多试剂纯的等张生理盐水和一些灌注液、浸液含有诸如苯甲醇之类的抑制血小板聚集和分泌的防腐剂。测试过程运行ATP标准1.00加900ul 稀释好的样本到预温好的检测杯中。1.01在预温孔预温样本5分钟。1.02旋转Rotary开关，减少Luminescence gain的值到最

52、小。1.03设置搅拌速度为10（1000rpm）1.04打开加热块盖子，将含样本的检测杯放到样本检测孔。1.05加100 ulCHRONO-LUME试剂到样本1.06关闭加热块盖子1.07放下纪录笔，打开纪录仪开关 1.08上面的绿笔，记录发光物，并且快速的移动到右边10/90标记出 1.09允许纪录仪运行2分钟1. 10打开加热块盖子，并加5ulCHRONO-LUME ATP标准到样本。ATP标准浓度为2 nm注意：每个试验的试剂用量很少。加样小孔要求是潮湿的并且没有气泡。应此，在用micro bore 时，现在其中装满试剂，后排出试剂，重复操作2-3次。最后根据要求的试剂量排出多余的试剂。

53、将需要的试剂留下。用微量加样器加样时，加样枪头必须到检测杯的底部，并且快速、完全的加入试剂，千万不要将试剂加到样本的上面，这样会使试剂、样本混合不均匀。移走加样枪时，按一下活塞，以阻止样本进入到micro bore中。做每个试验都要更换micro bore 每天的试验完成后都要丢掉micro bore。为了保护plunger更换 一个干净的micro bore。1. 11关闭加热块盖子，直到有荧光反应峰值逆时针旋转LuminescenceGain开关来增加荧光强度，接着，继续以逐步增强的方式来增大Luminescence Gain,直到发光曲线达到图表中点纪录下Luminescence Gai

54、n值注意：加ATP标准物后，关闭加热孔盖子、旋转Luminescence Gain动作一定要迅速。如果动作慢会丢失反应的最高峰。1.12一旦反应的最高峰达到并被记录。拿起记录笔关掉记录仪。1.13打开加热孔盖丢掉比色杯。1.14吸收峰用mm 或小方格表示，这个值用于计算ATP释放的值。凝血酶1.00加900ul 稀释好的样本到预温好的检测杯中。1.01在预温孔预温样本5分钟。1.02设置搅拌速度为10（1000rpm）1.03打开加热块盖子，将含样本的检测杯放到样本检测孔。1.04加100 ul CHRONO-LUME试剂到样本1.05关闭加热块盖子1.06放下纪录笔，打开纪录仪开关1.07上

55、面的绿笔，记录发光物，并且快速的移动到右边10/90标记出1.08允许纪录仪运行2分钟1.9打开加热块盖子，并加100ulCHRONO-PAR 凝血酶试剂到样本。凝血酶试剂标准浓度为1 u/ml1. 10关闭加热块盖子，观察发光物的变化直到有峰值出现，并且以达到一个平台期，有开始下降。1. 11当反应的峰值被记录，拿下记录笔，关掉记录仪。1. 12打开加热块盖子，丢掉检测杯。1. 13吸收峰用mm 或小方格表示。胶原1.00加900ul 稀释好的样本到预温好的检测杯中。1.01在预温孔预温样本5分钟。1.02设置搅拌速度为10（1000rpm）1.03打开加热块盖子，将含样本的检测杯放到样本检测孔。1.04加100 ul CHRONO-LUME试剂到样本1.05将电极放到样本检测孔。电极上的弹簧片放到监测杯里面。 560ca对着通道的