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1、水通道蛋白的研究水通道蛋白的研究【关键词】水通道蛋白,法医病理学【中图分类号】q503;d9191【文献标识码】b【编号】1007929701005303一、水通道蛋白的发现水是生物机体细胞的主要成分,每时每刻有大量的水分子通过细胞膜进出细胞。在90年代以前,对于水分子的转运机制,主要有两种理论解释,一种是水分子的简单扩散学说,认为细胞内外渗透压差是其动力源,需要较高的阿里纽斯活动能,一般ea10kealmol,达到平衡时渗透率与扩散率趋于相等,不能被汞等通道蛋白阻断剂所抑制。但水分子简单扩散理论不能解释一些生理现象,如尿的浓缩、pfpd1时水的转法医学理论与实践运及有些细胞水转运可被通道蛋白

2、阻断剂抑制等,所以就产生了另一种理论,认为细胞膜上存在水分子转运的特殊通道,即水通道学说。水分子通过该通道进出细胞,水通过水通道时需要的ea较低,一般ea水通道蛋白的研究第2页aqp3和aqp7对甘油和尿素等有机小分子有一定的通过性,并且它们的核苷酸序列也很相似,14,可据此将aqps家族分为两个亚家族,即aqp3和aqp7为一个亚家族,其余aqps为另一个亚家族。对aqps的调节存在长期和短时调节之分。长期调节作用在核酸转录水平上,主要表现为aqps的mrna合成增加,蛋白表达量增强,如皮质醇类激素可以从该水平上增加aqp1的表达等。短时调节主要表现为细胞浆内的囊泡等膜单位短时与细胞膜融合,

3、它们膜上的aqps转移到细胞膜上,导致细胞膜单位面积上aqps的量短时增加,如当受到加压素的作用时,肾组织细胞浆中的囊泡与肾脏细胞顶端膜融合,使囊泡中的aqp2转移到胞膜中发挥作用,一旦刺激消失,又通过形成囊泡载体,aqp2返回到胞浆中,从而减少细胞膜上的aqp2,水通透性降低,所以这种短时调节机制又称为“穿梭机制”。l四、aqps的组织分布水通道蛋白在人类妊娠早期就开始表达,胎儿12周龄时就可以检测到,36周龄时aqps表达明显增加,出生时其红细胞和肾小管中的aqps表达量就几乎与成人相等,而在小鼠的表达需出生后12个月才趋于高峰并持续。llaqps在大鼠中的分布研究得比较多,也比较清楚,在

4、人体法律与医学杂志20xx年第11卷组织中的研究比较少,但近年来增加较快。aqf)0aqpo是一种古老的内在蛋白,又称mip。有水通道作用同时对其它离子及小分子也有通过作用,主要在晶状体内皮细胞表达。【19aqp1aqp是第一个最先发现并被鉴定的水通道蛋白。r它在组织中的分布极其广泛,如血液循环系统中的心肌肉、毛细血管、淋巴管内皮细胞和红细胞等,。神经系统中的脑脉络丛上皮细胞,呼吸系统中的肺泡i型细胞、支气管粘膜下腺细胞和气管腔上皮,l2消化系统中的胰腺、胆囊、肝管、胆管和结肠隐窝上皮细胞等,泌尿系统中的肾近曲小管及髓袢降支细段上皮细胞,以及唾液腺、泪腺和汗腺等腺体上皮细胞和视膜_2一等均有水

5、通道蛋白aqp1的表达。aqp2以前认为aqp2仅在肾脏集合管上皮细胞顶质膜表达,但国内杨军等研究证实,它在人的涎腺中也有表达。一aqp3aqp3在肾脏集合管主细胞的基底侧和气管、鼻咽等上皮细胞有表达l2,在消化系统的结肠、肝脏、胰腺和小肠组织中也有表达。aqp4aqp4主要分布在脑和脊髓中,特别是在神经胶质细胞和室管膜细胞上表达比较强烈,243在其他组织中也有表达,如肾内髓集合管上皮细胞,支气管、气管的柱状上皮和鼻咽上皮细胞,胃粘膜层腺细胞等。aqp5aqp5位于肺的i型细胞、上气道的分泌上皮细胞,在一些分泌性细胞中也有表达,如颌下腺、腮腺上皮细胞等。l2aqp6aqp6仅分布于肾脏组织中。

6、aqp7、aqp8、aqp9aqp7、aqp8、aqp9在消化系统的唾液腺、食管、胃肠道、肝胆及胰腺有表达。27aqp7在肾脏、心脏、骨骼肌和脑组织中有表达,28aqp8、aqp9在肺组织中有表达,但具体定位不清楚。28五、aqps的检测方法及发展前景aqps是随着生物学和化学技术的发展而发现的。最早agre等利用电泳技术对红细胞rh抗原蛋白进行分离、纯化时发现了aqpa,并测定了它的分子量,又利用标记重组、冰冻蚀刻和形态测量术等方法证实了它们的核酸序列和空间结构,并用分子克隆技术对aqp1进行了cdna克隆o4,6,1oi现阶段对aqps的研究方法主要有:免疫组化aqp1aqp5的单克隆抗体

7、已经研究成功,并且商品化,可以用于定位、半定量研究aqps蛋白在组织中的表达o2t-23该方法比较成熟,简单易行,研究用组织块条件比较宽松,可用于常规固定的新鲜组织。该方法可以比较好地检测到细胞膜上的aqps,但对细胞内膜性器官上的aqps定位不理想。原位杂交该方法与免疫组化方法类似。免疫组化检昊4蛋白质,原位法律与医学杂志20xx年第11卷杂交检测它的dna。现大鼠、兔和人的水通道蛋白核苷酸序列已经全部测定,可在世界上各大基因库中查到相关的基因序列,合成核酸探针,进行原位杂交,从而在核酸水平上测定aqps的表达和存在。免疫电镜可以很好地定位aqps在细胞结构中的存在,特别是在细胞浆内膜性器官

8、上的定位,弥补了免疫组化的不足。该法对组织块的条件要求很高,组织块要新鲜,用锇酸固定,环氧树脂包埋,并且进行超薄切片,需专业人员进行操作。rtpcr蛋白质的mrna丰度很小,比且容易降解。rtpcr可以成千上万倍地对mrna进行扩展,通过电泳扩展产物,可以检测到aqps的mrna。六、aqps在法医学上的研究aqps的发现比较晚,研究现主要集中在临床、生物学和植物学领域,本文作者还没有检索到相关法医学方面的研究。本作者认为只少在以下几个方面值得法医工作者进行探讨研究。基础研究aqps在人体组织内广泛存在,人体机能的运转均与水有关,说明aqps或多或少都在发挥积极作用。在法医学研究中,经常遇到与

9、水转运有关的病理问题,如各种死因导致的肺水肿、脑水肿、皮肤皮革样化以及角膜浑浊等,特别是一些不明原因的猝死。通过对aqps的研究,对阐明这些疑难疾病、现象的机理有所帮助。应用研究在法医学实践中,对于一些具体问题的正确鉴定还存在很大的模糊性和不精确性。如生前溺死与死后抛尸的鉴定、死亡时间的推定等,现在都是凭大体病理解剖和经验进行推断,科学性较差。如果借助于aqps的理论和技术成果进行相关研究,寻找它们之间的差别,建立相应的数据库,也许在一些问题的解决方面会有所突破。参考文献1fettiplacer,haydondawaterpermeabilityoflipidmembranephysiolre

10、v1980,60:5105502maceyri,farmerrelinhibitionofwaterandsolutepermeabilityinhumanredcellsbiochembiophysacta,1970,211:1041063solomonakwaterchannelsacrosstheredbloodcellandotherbiologicalmembrancesmethodsenzymol,173:1922224agrep,gregorymp,barbaral,eta1aquaporinchip:thearchetypalmolecularwaterchanne1amjph

11、ysio1,1993,265:f463一f4765bradleymdenker,barbaral,agrep,eta1identification,purificatlon,andpartialcharacterizationofanovelmr28,000integralmembraneproteinfromerythrocytesandrenaltubulesjbiolchem,1988,263:15634156426prestongm,agrepisolationofthecdnaforerythrocyteintegralmembraneproteinof28kilodattons:m

12、emberofanancientchannelfamilyproenatlacadsciusa,1991,88:11110117prestongm,carrolltp,gugginowb,etalappearanceofwatercbannelsinxenopusoocytesexpresingredcellchip28proteinscience,1992,256:3853878zeidelml,ambudkarsv,smithbl,etalreconstltutlonoffunctionalwaterchannelsinliposomescontainingpurifiedredcellc

13、hip28proteinbiochemistry,1992,31:74367440559agrep,sasakis,chrispeelsmjaquaporins:afamilyofwaterchanne1proteinsamjphysiol,1993,265:f46110jungjs,prestongm,smithbl,etalmolecularstructureofthewaterchannelthroughaquaporinchip:thehourglasmodeljbiolchem,1994,269:1464814654ll1jverbavatzjm,brownd,sabolici,va

14、lentig,ausiellodawaterchannelsinliposomesandcellmembranesafreezefracturestudyjcellbiol,1993123:60561812zeidelml,nielsens,smithbl,eta1uhrastructurepharmacologicinhibition,andtransportselectivityofaquaporinchannelformingintegralproteininproteoliposomesbiochemistry,1994,33:1606161513agrep,leemd,devidas

15、s,eta1aquapoilnsandionconductancescience,1997,275:1490149214echevarram,windhageree,findtgselectivelyoftherenalcollectingductwaterchannelaquaporin一3jbiolchem,271:2507925082l15jyangbx,verkmanaswaterandglycerolpermeabilitiesofaquaporinsandmipdetermindequantitativelybyexpresionofepitopetaggedconstructsi

16、nxenopusoocytesjbiolchem,272:161401614616kingls,nielses,agrepaquoprin一1waterchannelinlung:autogeny,steriodinducedexpresion,anddistributioninratsjclininvest,1996,97:21832191l17jwintousemwaterchannelsandureatransportationclinexpphomacolphysiol,1997,24:1918jagrep,barbarals,rubenb,etalhumanredcellaquapo

17、ilnchip:expressionduringnormalfetaldevelopmentandinanovelformofcongenitaldyserythropoieticanemiajclininvest,1994,1050105719reizerj,reizera,saiermil1themipfamilyofintegralmembranechannelproteins:sequenceparisons,evolutionaryrelationships,reconstructedpathwayofevolution,andproposedfunctionaldifferenti

18、ationofthetworepeatedhalvsoftheproteinsciltrevbiochemmolbiol,199328:23525720kingls,agreppathophysioiogyoftheaquaporinwaterchanne1annurevphysio1199658:61964821蕉光字,李尔然,刘冬娟,等水通道蛋白i在肺组织中的表达中华内科学杂志,20xx,40:454622笪彤,朱秀安水通道蛋白在大鼠眼组织视膜中的分布眼科研究,20xx20:272923杨军,肖林,孙远,等,人涎腺水通道蛋白的定位第三军医大学学报,20xx,24:96796924terri

19、sy,eeelbargerca,nielsens,etallongtermregulationofwaterrenalaquapoilninratamjphysiol,1996,271:f41425ishibashik,sasakis,saitof,eta1structureandchromosomallocalizationofahumanwaterchannelgenegenomics,1995,27:35235426brownd,katsurat,kawashitham,etalsabolic一1cellulardistilbutionoftheaquapoilns:afamilyofwaterchannelproteinshistochemcellbio1,1995,104:127koyamay,yamamotot,tanit,eta1expresionandlocalizationofaquapoilnsinratgastrointestinaltractamjphysiol,1999,276:c621c62728陶军肺组织水通道蛋白的研究进展国外医学:生理、病理科学与临床分册,20xx,20:127130

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