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1、四唑染色法测定种子生活力福建农林大学 20*级农学 0* *一、 目的 1、了解种子生活力测定方法2、熟悉利用四唑染色法测定种子活力方法及操作方式二、原理 有生活力的种子活细胞在呼吸过程中都发生氧化还原反应，四唑溶液作为一种无色的指示剂，被种子吸收后参与活细胞的还原反应，从脱氢酶接受氢离子，在活细胞里产生红色、稳定、不扩散、不溶于水的三苯基甲 。化学反应如下：DPNH2 + TTC DPN + TTCH + HCl （辅酶IH2） （四唑） （辅酶） （甲 ） （氯化氢） H NNC6H5 NNC6H5 2H C6H5C C6H5C +HCl NN+C6H5 NNC6H5无生活力的种子则无此反
2、应。根据种子的四唑显色的部位，即可区分有活力的部分和死亡部分。一般鉴定原则是，凡是胚的主要结构及有关活营养组织染成有光泽的鲜红色，且组织状态正常的，为有生活力的种子。凡是胚的主要构造局部不染色或染色成异常的颜色和光泽，并且活营养组织部染色成无光泽的淡红色或灰白色，且组织已软腐或异常、虫蛀、损伤、腐烂的为死种子。三、试材与设备1、材料 大豆种子2、设备 烧杯、滤纸、刀片、镊子、恒温培养箱3、试剂 1.0%的四唑溶液四、实验步骤从净度分析后并经过充分混合的大豆种子中，随机抽取30粒，3次重复。1、 种子预湿 将选取的大豆种子水浸预湿，室温下浸泡8h，使其充分吸胀。2、 种子处理 将吸胀的大豆种子的
3、种皮去除，掰开子叶，露出子胚芽，保持湿润备用。3、 四唑染色 将处理好的种子放入烧杯中，加入1.0%的四唑溶液，将种子淹没，然后置于35恒温培养箱中避光染色0.51 h。4、 观察鉴定 将染色后的大豆种子经清水冲洗后进行染色情况的观察鉴定。胚部全部显成鲜红色、仅子叶远离胚芽部分少量未染色、仅子叶边缘少许未染色，为有生活力的种子。5、 结果计算及处理 统计各个重复中有生活力的大豆种子数，并计算其平均值。五、结果分析 大豆种子四唑染色测定结果 鉴定结 组别 果123456生活力百分率%1411411920.00%2610002323.33%3600321820.69%平均值5.670.670.332.331.0020.0021.00%（取整） 根据生活力测定重复间的最大容许差距，得平均生活力百分比在22%的最大容许差距为16%。其中16%23.33%20.00%、16%23.33%20.69%、16%20.69%20.00%。以上均在误差允许范围内，实验数据合理。六、注意事项：1、四唑染色时，恒温箱内要求黑暗或弱光，因为光线可使四唑盐类还原。2、已用过的四唑溶液不能再循环利用。3、染色温度过高或染色时间过长，也会引起种子组织的劣变，这样可能掩盖由于遭受冻害、热伤和本身衰弱而呈现不同颜色或异常的情况。
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