电击法转化农杆菌
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1、Four short words sum up what has lifted most successful individuals above the crowd: a little bit more.-author-date电击法转化农杆菌电击法转化农杆菌电击法转化农杆菌需要时间:电击操作40min左右 + 培养4h(期间可以干别的事)+ 涂平板操作20min左右 + 培养48h电转化杯:平时洗净放酒精中;大肠杆菌用2mm;农杆菌用4mm或2mm(4mm好用些)大肠杆菌:37培养24小时(生长较快),1500V/6ms电击农杆菌:28培养48小时(生长较慢),2500V/6ms电击离心管
2、:1.5mL下端尖 2mL下端圆比例:40L感受态农杆菌(GV3101) : 1L质粒(用手指弹几下混匀)具体操作过程:1、将20L农杆菌和0.5L质粒混匀,2、用枪加入4mm电转化杯中,盖上盖,贴标签,3、在电击器上2500V/6ms进行电击,促使质粒进入农杆菌,4、电击后,用枪将液体移到装有500L LB培养液的2mL离心管中,5、 写标签,用石蜡膜封口,6、在28生化培养箱中摇晃培养4h左右,让菌在有氧条件下复苏,7、将离心管进行离心1min,使菌体沉降到管壁上,8、准备LB平板,写标签,用酒精擦拭三角玻璃棒,然后在火焰上烧10s左右灭菌,放置冷却备用,9、用枪吸取100L 上清液,将剩下液体倒掉,在将枪中液体打入离心管中,并用枪反复吸打,冲下壁上菌体混匀,(涂平板时100L 就够了,所以进行离心浓缩)10、吸出菌液,滴在平板上,用玻棒涂抹均匀,11、盖上盖,用石蜡膜封口,放入28生化培养箱中48h(2天),即可长出菌落。 -
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