组培设备与条件概述

《组培设备与条件概述》由会员分享，可在线阅读，更多相关《组培设备与条件概述（35页珍藏版）》请在装配图网上搜索。

1、组培设备与条件开展植物组织培养工作需要一种比较合理实用的场合，一套合适的设备和提供必要的实验环境条件，这是一方面要考虑到的。根据科学、合理的原则，一种较为抱负的配备应当涉及： 1、化学药物室 2、配培养基室 3、灭菌室 4、接种室 5、无菌培养室 基本仪器设备与用品 1、仪器设备 超净工作台、高压灭菌锅（手提式、立式或卧式）、小推车（可选）、精密电子天平（至少千分之一）、电子天平或托盘天平、酸度计、一般冰箱、烘箱、解剖镜、光照培养箱（选购）、电炉、微量可调移液器及配套吸嘴、移液管架、磁力搅拌器（可选）、不锈钢托盘、灌装机（可选）、培养架、定期器（控制光照时间）、紫外线杀菌灯、照度计（可选）、温

2、湿度计（可选）蒸馏水器、摇床（可选）、针头滤器及配套滤膜2、小型用品 枪镊，弯剪、解剖刀、接种盘3、玻璃器皿 组培瓶（玻璃或塑料）、烧杯、量筒、移液管、试剂瓶、移液管架、容量瓶、试管、酒精、玻璃棒、滴瓶4、组培药物 （具体药物请见常用配方）5、其她 吸耳球、刷子、记号笔、定期钟、手套、封口膜、卫生药棉、拖鞋、口罩、白大褂、滤纸、洗瓶培养条件 在植物组织培养中温度、光照、湿度等多种环境条件，培养基构成、 PH值、渗入压等多种化学环境条件都回影响组织培养育苗的生长和发育。 一、温度（temperature） 由于温度是植物组织培养中的重要因素，因此植物组织培养在最合适的温度下生长分化才干体现良好，

3、大多数植物组织培养都是在 2327 之间进行，一般采用 252。低于15时培养，植物组织会体现生长停止，高于35时对植物生长不利。但是，不同植物培养的适温不同。白鹤非的最适温度是20、月季是2527、番茄是28。温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度，也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。如烟草芽的形成以28为最佳，在12如下，33以上形成率皆最低。 不同培养目的采用的培养温度也不同，百合鳞片在30如下再生的小鳞茎的发叶速度和百分率比在25%如下的高。桃胚在2条件进行一定期间的低温解决，有助于提高胚培养成活率。用35解决草莓的茎尖分生组织3d，可得到无病毒苗。 二、光照（light） 组织培

4、养中光照也是重要的条件之一，重要表目前光强、光质、以及光照时间方面： 1、光照强度（light intensity） 光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响，从目前的研究状况看，光照强度对外植物体、细胞的最初分裂有明显的影响。一般来说，光照强度较强，幼苗生长的粗壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长。 2、光质（light wave） 光质对愈伤组织诱导，培养组织的增殖以及器官的分化均有明显的影响。如百合珠芽在红光下培养，8周后，分化出愈伤组织。但在蓝光下培养，几周后才浮现愈伤组织，而唐菖蒲子球块接种15天后，在蓝光下培养一方面浮现芽，形成的幼苗生长旺盛，而白光下幼苗纤细。 3、光周期（lig

5、ht period） 试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养，最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。研究表白，对短日照敏感的品种的器官组织，在短日照下易分化，而在长日照下产生愈伤组织，有时需要暗培养，特别是某些植物的愈伤组织在暗培养下比在光下更好。如红花、乌饭树的愈伤组织。 三、湿度（humidity） 湿度的影响涉及培养容器保持和环境的湿度条件，容器内重要受培养基水分含量和封口材料的影响。前者又受琼脂含量的影响。在冬季应当合适减少琼脂用量，否则，将使培养基干硬，以致不利于外植体接触或插进培养基，导致生长受阻。封口材料直接影响容器内湿度状况，但封闭性较高的封口材料易引起透气性受阻，也

6、会导致植物生长发育受影响。 环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般规定70%-80%的相对湿度，常用加湿器或常常洒水的措施来调节湿度。湿度过低会使培养基丧失大量水分，导致培养基多种成分浓度的变化和渗入压的升高，进而影响组织培养的正常进行。湿度过高时，易引起棉塞长霉，导致污染。 四、渗入压（penetrating pressure） 培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化合物，因此，而影响到渗入压的变化。一般1-2个大气压对植物生长有增进作用，2个大气压以上就对植物生长有阻碍作用，而5-6个大气压植物生长就会完全停止，6个大气压植物细胞就不能生存。 五、PH值 不同的植物对培养基最适PH值的规

7、定也是不同的（见表），大多在5-6.5左右，一般培养基皆规定5.8，这基本能适应大多数植物培养的需要。不同植物的最适PH值 种类 最适 PH 值 种类 最适 PH 值 杜鹃4.0月季5.8越橘4.5胡萝卜、石刁柏6.0蚕豆5.5桃7.0番茄、葡萄5.7 PH值适度因材料而异，也因培养基的构成而不同。以硝态氮作氮源和以铵态氮作氮源就不同样，后者较高某些。一般来说PH值高于6.5时，培养基全变硬；低于5时，琼脂不能较好地凝固。由于高温灭菌会减少PH值（约0.2-0.3个PH值）因此在配制时常提高PH值0.2-0.3单位。PH值大小调节可用0.1M的NaOH和0.1M的HCl来调节。1ml的NaOH

8、可使PH值升高0.2单位，1ml的HCl可使PH值减少0.2单位。调节时一定要充足搅拌均匀。 六、气体（gas） 氧气是组织培养中必需的因素，瓶盖封闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜的封口材料。通气最佳的是棉塞封闭瓶口，但棉塞易使培养基干燥，夏季易引起污染。固体培养基可加进活性炭来增长通气度，以利于发根。培养室要常常换气，改善室内的通气状况。液体振荡培养时，要考虑振荡的次数、振幅等，同步要考虑容器的类型、培养基等。 培养基的成分 培养基是植物组织培养中的“血液”，血液的成分及其供应状况直接关系到培养物的生长与分化，因此理解培养基的成分、特点及其配制至关重要。自然状态下生长的绿色植物由于自身能进

9、行光合伙用，并且能合成植物生长发育所需的几乎所有有机成分，加上土壤中具有较全面的无机和有机营养成分，因此只需在合适的时候施加少量的无机和有机肥（复合成分），植物就可良好的生长。但是，在进行植物组织培养时，只是切取植物体的一小部分，它们无法合成生长发育所需要的所有物质，加上人们对植物体的多种组织和器官所需营养成分理解甚少，因此对培养基的构成成分的摸索走过了一条十分艰苦而漫长的道路，至今人们还不能完全达到自主的阶段。在所报道的培养基中，没有任何一种培养基可以适合所有类型的植物组织和器官，也没有实现对所有的植物都能通过组织培养使其再生的目的。由于植物的多样性和生长环境的复杂性与多变性，也不也许有一种

10、万能的培养基。目前所使用的培养基有10余种之多，大部分都是在前人研究的基本上通过度析综合和改善而成的。例如，White培养基是Uspenski和Uspenskaia（1925）的藻类培养基演化的成果，被广泛用于根的培养；Cautheret培养基是建立在Knop营养液（1865）基本上的。后来的培养基大部分是在White和Cautheret培养基的基本上改善而成。 就目前所使用的多种培养基而言，可将它们的成分划分为几大类， 1、 水 水是植物原生质体的构成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不可缺少的物质。配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，避免储藏过程

11、发霉变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。 2、 无机营养成分（涉及大量元素，微量元素和铁盐） 3、有机营养成分（涉及维生素，氨基酸及其微生物等） 4、碳水化合物 5、植物生长调节物质（常称为激素） 6、 琼脂或其她支持物 7、 其她添加剂 （含天然提取物、抗生素等） 维生素B1（盐酸硫胺素）维生素 B2（核黄素）维生素 B6（吡多辛）维生素 C（抗坏血酸）维生素 E（生育酚）维生素 A（维生素甲、视黄醇）维生素 AD（鱼肝；由丸）阿发骨化醇芦丁 （维生素P）芦丁（维生素P）维生素 B6，盐酸吡哆醇 用途： 重要用于防治皮肤粗糙、粉刺、日光晒伤、

12、止痒。也合用于防治脂溢性脱发、皮肤炎症、一般性痤疮，脂溢性湿疹和落屑性皮肤等化妆品制剂。可制成膏霜、乳液和醇溶液。一般与其她维生素配合使用。技术指标： 中文名称： 维生素 B6，盐酸吡哆醇 英文名称： Vitamin B6，Pyridoxin 化学名称： 6甲基5羟基3，4吡啶二甲醇盐酸盐质量指标：熔 点：205209鉴 别：本品的红外吸取图谱应与对照的图谱一致。酸 度：PH值应为2.43.0产品阐明： 性 状： 白色或类白色的结晶或结晶性粉末；无臭，味酸苦；遇光渐变质。在水中易溶，在乙醇中微溶，在氯仿或乙醚中不溶。水溶液呈微酸性反映。吡哆醇是醇式维生素B6，是较稳定的一种构造，在酸性或碱性溶

13、液中可耐热維生素 B1（鹽酸硫胺素） 作 用 重要用於防治缺少維生素B1所致的腳氣病。也用於神經炎、心肌炎、消化不良輔助治療。甲狀腺機能亢進患者，妊娠或高熱患者，可適當補充維生素B1，以改善症狀。 罗纳普朗克动物营养公司的盐酸硫胺素（维生素B1）是盐酸铵素粉状产品，符合美国药典原则。构成: 化学式 C12H17C1N4OL HCI维生素B4 Vitamin B4（腺嘌呤，氨基嘌呤，Adeninephosphate）【性状】常用其磷酸盐，为白色针状结晶或结晶性粉末。易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚或氯仿。其饱和水溶液呈中性。【药理及应用】本品是核酸的构成成分，在体内参与RNA和DNA合成。当白细

14、胞缺少时，它能增进白细胞增生，一般用药24周左右，白细胞数目可增长。用于多种因素如放射治疗、苯中毒、抗肿瘤药和抗甲状腺药等引起的白细胞减少症，也用于急性粒细胞减少症。叶酸（维生素BC，维生素M）水溶性；维生素B族中的一种，亦称为维生素BC或维生素M； 计量单位是微克（mcg）； 是制造红血球不可缺少的物质； 协助蛋白质的代谢。-生物素（d-biotin, 1）又名维生素H，属水溶性维生素B族。 d-生物素是转化酶的辅酶R，也是蛋白质和脂肪中间代谢中的一种重要辅酶，在维持人和动物正常生长发育，保护皮肤，羽毛和骨髓健康起着必不可少的作用。因而为医疗，多维制剂和饲料行业等方面得以广泛应用。生物素的补

15、充物为右旋生物素（ D-生物素）制剂，纯品一般含 D-生物素98以上，是一种近白色结晶性粉末，在冷水中溶解度低，随水温升高其溶解度增长，但高温时稳定性受到影响，配制生物素溶液时，最适温度为50左右。生物素是稳定性较好的一种维生素，对氧化、还原、微量元素都很稳定，强酸、强碱、紫外线对生物素稍有影响，生物素对热敏感。D-生物素（维生素H）化学名称： D-Biotin（VITAMIN H）原则： USP24/BP98规格：医药级（ 99.0%）饲料级（2%）二四滴（ 2，4-dichlorophenoxyaceticacid，2，4-D） 一种人工合成的具有与生长素类似生理效应的有机物。化学名称为2

16、，4-二氯苯氧乙酸，合成过程简朴，可以大量生产，在农业及园艺生产上已广泛应用。低浓度具有增进插枝生根，制止器官脱落，形成无子果实等作用，如1015ppm（1ppm=10-6）溶液蘸花或喷洒花簇，即可得到无子果实；高浓度可杀死双子叶植物，作为单子叶植物小麦、玉米、高梁等田间的除草剂。吲哚丁酸 （IBA）和一种植物细胞分裂素：6苄基腺嘌吟（6BA）D-生物素/VH叶酸 /VBc萘乙酸简称，是一种植物生长调节剂，近年来在果树生产上应用十分广泛 .培养基的种类 培养基有许多种类，根据不同的植物和培养部位及不同的培养目的需选用不同的培养基。 培养基的产生最早是Sacks（1680）和Knop（1681）

17、，她们对绿色植物的成分进行了分析研究，根据植物从土中重要是吸取无机盐营养，设计出了由无机盐构成的Sacks和Knop溶液，至今仍在作为基本的无机盐培养基得到广泛应用。后来根据不同目的进行改良产生了多种培养基，White培养基在40年代用得较多，目前还常用。而到60和70年代则大多采用MS等高浓度培养基，可以保证培养材料对营养的需要，并能生长快、分化快，且由于浓度高，在配制、消毒过程中某些成分有些出入，也不致影响培养基的离子平衡。 培养基的名称，始终根据沿用的习惯。多数以发明人的名字来命名，如White培养基，Murashige和Skoog培养基（简称MS培养基），也有对某些成分进行改良称作改良

18、培养基。 目前国际上流行的培养基有几十种，常用的培养基及特点如下： （1）MS培养基 它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液。其养分的数量和比例较合适，可满足植物的营养和生理需要。它的硝酸盐含量较其她培养基为高，广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。有些培养基是由它演变而来的。 （2）B5培养基 是1968年由Gamborg等为培养大豆根细胞而设计的。其重要特点是具有较低的铵，这也许对不少培养物的生长有克制作用。从实践得知有些植物在B5培养基上生长更合适，如双子叶植物特别是木本植物。 （3）Whi

19、te培养基 是1943年由White为培养番茄根尖而设计的。1963年又作了改良，称作White改良培养基，提高了MgSO 4 的浓度和增长了鹏素。其特点是无机盐数量较低，适于生根培养。 （4）N6培养基 是1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。其特点是成分较简朴，KNO 3 和（NH 4 ）2SO 4 含量高。在国内已广泛应用于小麦、水稻及其她植物的花药培养和其她组织培养。 （5）KM-80培养基 它是1974年为原生质体培养而设计的。其特点是有机成分较复杂，它涉及了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合的培养。 培养基的选择 1、选择合适的培养基 选择合适的培养基是植物组织

20、培养成功的基本。选择合适的培养基重要从如下两个方面考虑：一是基本培养基；二是多种激素的浓度及相对比例。MS培养基适合于大多数双子叶植物，B5和N6培养基适合与许多单子叶植物，特别是N6培养基对禾本科植物小麦、水稻等很有效，White培养基适合于根的培养。一方面试用这些培养基进行初步实验，可以少走弯路，大大；减少时间、人力和物力的消耗。当通过一系列初试之后，可再根据实际状况对其中的某些成分做小范畴调节。在进行调节时，如下状况可供参照。一是当用一种化合物作为氮源时，硝酸盐的作用比铵盐好，但单独使用硝酸盐会使培养基的PH向碱性方向漂移，若同步加入硝酸盐和少量铵盐，会使这种漂移得到克服。二是当某些元素

21、供应局限性时，培养的植物会体现出某些症状，可根据症状加以调节，如氮局限性时，培养的组织常体现出花色苷的颜色（红、紫红色），愈伤组织内部很难看到导管分子的分化；当氮、钾或磷局限性时，细胞会明显过度生长，形成某些十分蓬松，甚至呈透明状的愈伤组织；铁、硫缺少时组织会失绿，细胞分裂停滞，愈伤组织浮现褐色衰老症状；缺硼时细胞分裂趋势缓慢，过度伸长；缺少锰或钼时细胞生长受到影响。培养基外源激素的作用也会使培养物浮现上述某些类似的状况，因此应仔细分析，不可容易下结论。2、激素浓度和相对比例的拟定 组织培养中对培养物影响最大的是外源激素，在基本培养基拟定之后，实验中要大量进行的工作是用不同种类的激素进行浓度和

22、多种激素间互相比例的配合实验。在实验中，一方面应参照已有的报道，看与否有用相似植物、相似组织或相近者做过成功或失败的实验，如果有则可直接作为参照；如果没有，则在建立激素配比中，将每一种拟使用的激素选择3-5个水平，再按随机组合的方式建立起如下的实验方案。 这样就设计出了16种激素配比的实验方案，即16种不同的培养基。用着16种培养基进行初试之后，你会找到1种或几种是比较好的。再在这些比较好的组合的基本上进行小范畴的调节，设计出一组新的配方。如在表一中，您觉得6号培养基较有但愿，就可以在此基本上做出如表二的一组新的设计。表一 两种激素4种浓度的组合实验 浓度为 mg ? L -1细胞分裂素 0.

23、51.5 3 4.5 生长素0 123 4 0.5 56 7 8 1.0 9 101112 2.013 141516有 16种不同的培养基 表二 第二次激素配比实验 浓度为 mg ? L -1细胞分裂素 1.01.25 1.50 1.75 生长素0.251 234 0.55 678 0.75 9101112 有16种不同的培养基 一般来说，通过这次实验就也许选出一种适合于你的实验材料的培养基，或许不是最佳的，但成果是可靠的。在此基本上可进行培养基中其她成分的变动实验，如可变动蔗糖浓度、琼脂用量、培养基的 PH或添加某些氨基酸等。但必须掌握一种原则，就是要有理有据，特别是对某些珍贵的植物培养材料

24、，更要慎之有慎。 如果上述实验失败，那就要做某些更细致、更麻烦的实验，耗费更多的时间、人力和物力，并且最佳在专业人员的指引下进行，切莫根据想象来随意设计培养基，这样成功的概率极小，使珍贵的植物材料丢失，或失去时机。 培养基的配制 配制培养基有两种措施可以选择，一是购买培养基中所有化学药物，按照需要自己配制；二是购买商品的混合好的培养基基本成分粉剂，如 MS、B5等。 自己配制可以节省费用，但挥霍时间、人力、且有时由于药物的质量问题，给实验带来麻烦。就目前国内的状况看，大部分还是自己配制。为了以便起见，现以MS培养基为例简介配备培养基的重要过程。1、配制几种母液 （1）配制MS大量元素母液 一般

25、将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。 分别称取 NH 4 NO 3 165g KH 2 PO4 17g KNO 3 190g CaCl 2 2H 2 O 44g MgSO 4 7H 2 O 37g 各自配成1L的母液。倒入1L试剂瓶中，寄存于冰箱中。 （2）配制MS微量元素母液 一般将微量元素配制成100倍母液。 依次称取 KI 0.083g Na 2 MoO 4 2H 2 O 0.025g H 3 BO 3 0.62g CuSO 4 5H 2 O 0.0025g MnSO 4 H 2 O 1.69g CoCl 2 6H 2 O 0.0025g ZnSO 4 7H 2

26、 O 0.86g 配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，寄存于冰箱中。 CuSO 4 5H 2 O和CoCl 2 6H 2 O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调节液。 分别称取 CuSO 4 5H 2 O 0.05g CoCl 2 6H2O 0.05g 各自配成100ml的调节液，然后取5ml就尚有0.0025g的量。 （3）配制MS有机母液 一般配制成100倍MS有机母液。 依次称取 肌醇 10g 盐酸硫胺素（VB1） 0.01g 烟酸 0.05g 甘氨酸 0.2g 盐酸吡哆醇（VB6） 0.05g 配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，寄存于冰箱中。 （4）配制MS铁盐母液

27、一般配制成100倍MS铁盐母液。 依次称取 EDTA二钠 3.73g FeSO47H2O 2.78g 配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，寄存于冰箱中。 因此MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐母液，共8种母液。激素母液的配制 多种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解，细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解，然后再加蒸馏水定容。一般取100mg配成100ml母液。2、配制培养基 以配备1L MS培养基为例，按顺序进行如下操作： （1）先在烧杯中放入某些蒸馏水。 （2）分别取上面八种母液10ml倒入。

28、 （3）一般称取30g蔗糖倒入，搅拌溶解。 （4）加蒸馏水用量筒定溶至1L。 （5）按设计好的方案添加多种激素，由于激素的用量很小，并且激素对组培植物的生长至关重要。因此有条件的话最佳用微量可调移液器吸取，减少误差。 （6）用精密试纸或酸度计调节PH至5.7-5.8。（有条件的话使用酸度计，比较精确） 可配1当量的HCL和1当量的NaOH用来调溶液PH值。 1当量HCL配制：用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。 1当量NaOH配制：称取NaOH 4g 配成100ml溶液。 （7）称取5g左右琼脂粉（质量好的琼脂粉）,倒入上面配好的溶液中，放在电炉上加热至沸腾，直到琼脂粉熔化。 （8）稍微冷

29、却后，分装入培养容器中。无盖的培养容器要用封口膜或牛皮纸封口，用橡皮筋或绳子扎紧。 （9）放入消毒灭菌锅灭菌，灭菌20分钟左右。 （10）灭菌后从灭菌锅中取出培养基，平放在实验台上令其冷却凝固。 有机营养成分 有机营养成分涉及维生素、氨基酸或某些有机混合物。维生素在某些酶系统中有催化作用，加速酶功能的发挥。硫氨素（维生素 B1）也许是几乎所有植物都需要的一种维生素，缺少维生素B1时离体培养的根就不能生长或生长十分缓慢。维生素B1常常以盐酸盐的形式即盐酸硫胺素加入培养基中。盐酸吡哆醇（维生素B6）和烟酸也许有刺激生长的作用。在细胞分裂素浓度低于0.1mg/L的状况下特别需要添加维生素B1，在细胞

30、分裂素浓度高于0.1mg/L时，烟草细胞在没有维生素B1的培养基上亦可缓慢生长，这表白细胞分裂素也许有诱导植物合成维生素B1的作用。除维生素B1、维生素B6之外，在部分培养基中还添加维生素BX（氨酰苯甲酸）、维生素C（抗坏血酸）、维生素E（生育酚）、维生素H（生物素）、维生素B12（氰钴胺酸）、维生素BC（叶酸）、维生素B2（核黄素）、泛酸钙和氯化胆碱等维生素。除叶酸外多种维生素都溶于水，叶酸需要先用少量稀氨水溶解，再加蒸馏水定容。甘氨酸（氨基乙酸）和肌醇（环己六醇）也是某些培养基的添加成分。此外，在某些植物或某些组织的培养中还加有水解乳蛋白、水解酪蛋白、椰子汁、玉米胚乳、麦芽浸出物、西红柿汁

31、和酵母浸出物等。这些也许对某些植物或植物的某些代谢过程有重要作用，如肌醇重要以磷酸肌醇和磷脂酰肌醇的形式参与由Ca介导的信号转导。无机营养成分 无机营养成分就是人们平常所说的矿物质、无机盐或无机元素。它们在植物生活中具有非常重要的作用，如氮（ N）、硫（S）、磷（P）是蛋白质、氨基酸、核酸和许多生物催化剂即酶的重要或重要组分。它们与蛋白质、氨基酸、核酸和酶的构造、功能、活性等有直接的不可缺少的关系。氮占蛋白质含量的16%-18%，在植物生命活动中占有首要的地位，故又称为生命元素。磷是能量货币腺苷三磷酸（ATP）的重要成分之一，与所有生命活动紧密相连，在糖代谢、氮代谢、脂肪转变等过程中不可缺少。

32、钾对于参与活体内多种重要反映的酶起着活化剂的作用，钾供应充足时糖类合成加强，纤维素和木质素含量提高，茎秆坚韧，植株强健。胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸等氨基酸中都具有硫，这些氨基酸几乎是所有蛋白质的构成分子。镁离子（Mg 2+ ）是叶绿素分子构造的一部分，缺少镁，叶绿素就不能形成，叶子就会失绿，就不能进行光合伙用。镁也是染色体的构成成分，在细胞分裂过程中起作用。钙是细胞壁的组分之一，果胶酸钙是植物细胞胞间层的重要成分，缺钙时细胞分裂受到影响，细胞壁形成受阻，严重时幼芽、幼根会溃烂坏死。现代生物学研究还证明钙是植物体内的信号分子（信使）之一，在植物信号转导中发挥重要作用，钙离子与钙调蛋白结合形成的Ca

33、2+CaM复合体，能活化多种酶，调节植物对外界环境的反映与应答过程。 根据植物对这些元素要量的不同或者根据目前植物培养基中添加的这些元素量的大小，可将它们提成大量元素和微量元素。大量元素一般指在培养基中的浓度不小于0.5mmol/L的元素，微量元素指不不小于0.5mmol/L的元素。1、大量元素 重要涉及氮、磷、钾、钙、镁和硫六种。其中，氮常以硝态氮（NO 3- ）或氨态氮（NH 4+ ），或两者互相配合的形式存在。缺氮时某些植物的愈伤组织会浮现一种很引人注目的花色素苷的颜色，愈伤组织内部不能形成导管。镁常MgSO 4 7H 2 O的形式，既提供了镁也提供了硫。硫尚有用Na2SO4的形式提供，

34、但是其中的钠（Na）对植物并不是必需的，或者说常常是不利的。磷常以NaH 2 PO 4 H 2 O,KH 2 PO 4 或（NH 4 ）H 2 PO 4 的形式提供。钾常以KCl、KNO 3 或KH 2 PO 4 形式。钙常以CaCl 2 2H 2 O、Ca（NO 3 ） 2 4H 2 O或其无水形式提供。缺硫时培养的植物组织会明显的退绿；缺磷或钾时细胞会过度生长，愈伤组织体现出极其蓬松状态。 （1）N 是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的构成成分，是生命不可缺少的物质。在制备培养基时以硝态氮（NO 3- ）或氨态氮（NH 4+ ）两种形式供应。大多数培养基既具有硝态氮（NO

35、3- ）又具有氨态氮（NH 4+ ）。氨态氮（NH 4+ ）对植物生长较为有利。供应的物质有KNO 3 、NH 4 NO 3 等。有时，也添加氨基酸来补充氮素。 （2）P 是磷脂的重要成分。而磷脂又是原生质、细胞核的重要构成部分。磷也是ATP、ADP等的构成成分。在植物组织培养过程中，向培养基内添加磷，不仅增长养分、提供能量，并且也增进对N的吸取，增长蛋白质在植物体中的积累。常用的物质有KH 2 PO 4 或NaH 2 PO 4 等。 （3）K 对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系。K增长时，蛋白质合成增长，维管束、纤维组织发达，对胚的分化有增进作用。但浓度不易过大，一般为1-3m

36、g/L为好。制备培养基时，常以KCl、KNO3等盐类提供。 （4）Mg、S和Ca、Mg 是叶绿素的构成成分，又是激酶的活化剂；S是含S氨基酸和蛋白质的构成成分。它们常以MgSO 4 .7H 2 O提供。用量为1-3mg/L较为合适；Ca是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、保护质膜不受破坏有明显作用，常以CaCl 2 .2H 2 9提供。2、微量元素 培养基的微量元素重要涉及铁（Fe）、锰（Mn）、铜（Cu）、锌（Zn）、氯（Cl）、硼（B）和钼（Mo）等。这些元素有的对生命活动的某个过程十分有用，有的对蛋白质或酶的生物活性十分重要，有的是参与某些生物过程的调节。Fe有两个重要功能，作为酶的

37、重要构成成分和合成叶绿素所必需，缺铁时细胞分裂停止。Mn对糖酵解中的某些酶有活化作用，是三羧酸循环中某些酶和硝酸还原酶的活化剂。B能增进糖的过膜运送，影响植物的有性生殖如花器官的发育和受精作用。B还具有克制有毒的酚类化合物的形成的作用，改善某些植物组织的培养状况，缺硼时细胞分裂停滞，愈伤体现出老化现象。Zn是吲哚乙酸生物合成必需的，也是谷氨酸脱氢酶、乙醇脱氢酶等的活化剂。Cu是细胞色素氧化酶、多酚氧化酶等氧化酶的成分，可影响氧化还原过程。Mo是硝酸还原酶和钼铁蛋白的金属成分。Cl在光合伙用的水光解过程中起活化剂的作用，增进氧的释放和还原NADP（辅酶II）。为了某些植物组织培养的特殊需要有人还

38、把钠（Na）、镍（Ni）、钴（Co）、碘（I）等也加入微量元素的行列。Na对某些盐生植物、C4植物和景天酸代谢植物是必需的。Ni对尿酸酶（urease）的构造和功能是必需的。但是有些成分的作用至今还不十分清晰，可人们仍然把它们加入培养基中，如碘（I）和钴（Co）等。铁是某些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的构成成分。同步，它又是叶绿素形成的必要条件。培养基中的铁对胚的形成、芽的分化和幼苗转绿有增进作用。铁作为一种微量元素，对植物也是必需的，但由于Fe的特殊性质，即很不稳定、易沉淀，需要在酸性条件下才干比较稳定，故在培养基配制时常常把Fe盐单独配制，且常以螯合物的形式，把FeSO 4 和它的

39、螯合剂乙二胺四乙酸钠（Na 2 EDTA）先分别配成溶液，再互相混合使形成螯合铁，以防沉淀和协助被植物吸取。但EDTA也许对某些酶系统和培养物的形成发生有一定的作用，使用时应谨慎。 为了使用以便，无论是大量元素还是微量元素都常常是先配制成母液（即比实际培养基中的使用浓度高的储存液），储存在4度冰箱内或在室温下短期寄存。 总之，植物必需营养元素可构成构造物质，也可是具有生理活性的物质，如酶、辅酶以及作为酶的活化剂，参与活跃的新陈代谢。此外，在维持离子浓度平衡、胶体稳定、电荷平衡等电化学方面起着重要作用。当某些营养元素供应局限性时，愈伤组织体现出一定的缺素症状。如缺氮，会体现出一种花色素苷的颜色，

40、不能形成导管；缺铁，细胞停止分裂；缺硫，体现出非常明显的褪绿；却锰或钼，则影响细胞的伸长。 碳水化合物 所有的植物组织培养基都需要有碳水化合物作为能源，但当培养物通过光合伙用提供的CO2能足以维持生长时可不在培养基上加碳源，这种状况是很少见的。用作碳源的碳水化合物一般为蔗糖或D-葡萄糖，用量一般为2%-4%，高者可达5%，亦可用市售的白糖所替代，但一般应增长用量，并且最佳用比较固定的厂家生产的产品，以保证明验的稳定性。在改用一批新的市售白糖时最佳先做预试，以防在大量使用时浮现问题，伤害培养材料，导致不必要的损失，由于市售白糖是一种混合物，成分复杂且不稳定。几乎所有的培养物在蔗糖作为碳源时生长都

41、比较好，只有少数植物或组织在葡萄糖或果糖作为碳源的培养基上生长更合适。也有用麦芽糖、半乳糖、甘露醇、山梨醇和乳糖作为碳源的。蔗糖在经高温灭菌后，会发生部分降解，产生D-葡萄糖和D-果糖等，与用过滤法灭菌相比，也许会浮现某些不同的实验成果，但这并不阐明高温灭菌与过滤灭菌哪一种方式更好。如果要进行比较严格、精确的实验，最佳用过滤法灭菌蔗糖，除此之外在大部分状况下可与培养基一起进行高温灭菌。研究表白蔗糖不仅作为碳源影响到培养物的营养状况，并且在某些状况下还会影响到细胞的分化，如在进行叶用莴苣的髓细胞培养时，诱导木质部分化的合适浓度为2g/L，但要让木质部进一步发育则最佳再提高蔗糖浓度，这样才干更有助

42、于木质部的形成。木质部成分的分化，特别是管胞分子的分化形成，往往是器官发生的先决条件。 蔗糖、葡萄糖、白糖等的纯度问题，目前也引起人们的注意，由于在结晶时，它们往往包藏有恒量的有机物如氨基酸等，这些虽然不会使实验受到很大影响，但有时也许影响到实验成果的分析，在使用时应稍加留神。 糖的种类和用量是植物组织培养能否成功的重要因素之一。蔗糖的作用品有普遍性和广泛性，这一点已无人怀疑。近年来，其他糖类在植物组织培养中的作用引起很大关注。在淀粉作为凝固剂的培养基中加入12%蜜二糖，比只加8%蔗糖的大麦花粉培养基产生胚状体的频率高35倍，可高达40%。乳糖、麦芽糖、半乳糖和甘油均可明显增进培养的柑橘的胚状

43、体发生。麦芽糖、麦芽浸出物和果糖对苜蓿胚状体发生的增进作用均不小于蔗糖。葡萄糖、果糖、甘露糖、核糖和蔗糖对培养的烟草原生质体再生均有增进作用，半乳糖则有克制作用。麦芽糖可明显提高培养的大麦花药的绿苗产率，而蔗糖、果糖和葡萄糖单独或麦芽糖混合使用，均不利胚状体的生长。 植物生长调节剂 植物生长调节物质是某些调节植物生长发育的物质。植物生长物质可分为两类：一类是植物激素；另一类是植物生长调节剂。植物激素是指自然状态下植物体内合成，并从产生处运送到别处，对生长发育产生明显作用的微量（1微摩尔/升如下）有机物；植物生长调节剂是指某些具有植物激素活性的人工合成的物质。但在平常工作中人们并没有将它们严格辨

44、别开来，而笼统称之为“激素”、“植物激素”或“植物生长调节物质”。此类物质既可以刺激植物生长，也可以克制植物的生长，对植物的生命活动真正起到调节作用。在植物组织培养中使用的生长调节物质重要有生长素类和细胞分裂素类两大类，少数培养基中还添加赤霉素GA3等。1、生长素 生长素在植物体中的合成部位是叶原基、嫩叶和发育中的种子。成熟叶片和根尖也产生很微量的生长素。在植物组织培养中，生长素重要被用做诱导刺激细胞分裂和根的分化。在植物组织培养中常用的生长素有：NAA（萘乙酸）、IAA（吲哚乙酸）、IBA（吲哚丁酸）、NOA（萘氧乙酸），P-CPA（对氯苯氧乙酸）、2，4-D（2，4-二氯苯氧乙酸），2，4

45、，5-T（2，4，5-三氯苯氧乙酸）等。NAA有 -和-两种形式，是由人工合成的，培养基中总是用-型，因此在配制培养基时总是说加-萘乙酸。与IBA相比，NAA诱发根的能力较弱，诱发的根少而粗，但对某些植物如杨树等却具有较好的效果，IBA在根的诱导与生长上作用强烈，作用时间长，诱发的根多而长，特别有效，但也不可一概而论。IBA是天然合成的生长素，可被光迅速溶解或被酶所氧化，由于培养基中也许有氧化酶存在，因此在使用浓度上应相对较高（1-30mg/L）。对愈伤组织增殖最有效的是2，4-D，特别是对单子叶植物，10-7-10-5mol/L即可以诱导产生愈伤，常常不需再加细胞分裂素。但2，4-D是一种极

46、有效的器官发生克制剂，不能用于启动根和芽分化的培养基中。2、细胞分裂素 细胞分裂素是腺嘌呤（adnine,也叫6-氨基嘌呤的衍生物。腺嘌呤的第6为氨基、第2位碳原子和第9位氮原子上的氢原子可以被不同的基团所取代，当被取代时就会形成多种不同的细胞分裂素，因此，确切的讲应当叫细胞分裂素类物质。植物和微生物中都具有细胞分裂素。细胞分裂素在植物生长发育的各个时期均可体现出它的调节作用，由于它是一种腺嘌呤的衍生物，因此人们联想到它的调节作用，由于它的调节作用也许对核酸的影响有关。它可以影响某些酶的活性，可以影响植物体内的物质运送，可以调控细胞器的发生，还可以打破某些植物种子的休眠和延缓叶片的衰老。现代生

47、物学研究初步证明，细胞分裂素可以结合到高等植物的核糖核蛋白体上，增进核糖体与mRNA的结合，加快翻译速度，从而增进蛋白质的生物合成。它还可以与细胞膜和细胞核结合，影响细胞的分裂、生长与分化。在tRNA分子的反密码子附近发既有细胞分裂素的结合位点，这也许预示着细胞分裂素在基因体现的翻译水平上具有调节作用，其实，细胞分裂素自身就是rRNA的构成部分，植物tRNA中的细胞分裂素就有异戊烯基腺苷、反式玉米素核苷、甲硫基异戊烯基腺苷和甲硫基玉米素核苷等数种。 自然状况下，细胞分裂素重要在根中合成，但根并不是唯一的合成部位，茎端、萌发中的种子、发育中的果实和种子也能合成。 在组织培养中使用细胞分裂素的重要

48、目的是刺激细胞分裂，诱导芽的分化、叶片扩大和茎长高，克制根的生长。培养基中常常使用的天然的细胞分裂素重要有：从甜玉米未成熟种子或其她植物中分离到的玉米素6-（4-羟基-3-甲基-反式-2-丁烯氨基）嘌呤。人工合成的细胞分裂素重要有激动素（KT，6-呋喃氨基嘌呤）、6-苄基腺嘌呤（6-BA）、2IP（异戊烯氨基嘌呤）和TDZ（thidiazuron,噻二唑苯基脲）等。细胞分裂素常常与生长素互相配合，用以调节细胞分裂，细胞伸长，细胞分化和器官形成。3、赤霉素 重要是GA3，虽然已经用于顶端分生组织的培养和维管分化的研究，但在培养基中很少添加，由于它的作用往往是负面的。虽然也有赤霉素能刺激不定胚发育

49、成正常小植株的报道，但在使用中仍需谨慎，不可容易添加。如果想在实验中添加赤霉素，则必须先用某些不重要的材料做预试，待获得肯定成果时再用于正式实验。4、乙烯 乙烯的作用逐渐引起注重，它在芽的诱导和管胞分化上具有一定作用，管胞分化往往又是器官发生的基本。乙烯单独地或与CO2共同加入瓶中以替代BA或BA+2，4-D的作用，增进水稻愈伤组织芽的生长，CO2对乙烯促芽的增进作用明显，AgNO3可逆转乙烯和2，4-D的克制作用，增进小麦愈伤组织生芽。在有IAA和KT时乙烯增进Wigitalis obscura芽的形成。乙烯对芽形成的这种相对独立的效果不只是由于种的差别，也与不同发育时期植物对乙烯的敏感性不

50、同有关。如烟草的组织随着培养时间而对乙烯的敏感性有变化，在培养初期增进芽的发端，后期则起克制作用。温度可以影响乙烯的产生量，25-35下产生量较高，可增进水稻培养细胞产生根，15或40下产生量减少，不生根。番茄叶圆片培养时，乙烯克制IAA诱导的生根。一般说来，依稀克制体细胞胚胎发生，非胚性愈伤组织比胚性愈伤组织产生更多的乙烯。在悬浮培养中，乙烯对细胞的指数生长期有双向作用。由于乙烯是一种简朴的不饱和碳氢化合物，在生理环境的温度和压力下，是一种气体，比空气轻，实验中很难掌握用量，因此一般不使用。高等植物各器官都能产生乙烯，但不同组织、不同器官和不同发育时期，乙烯的释放量不同。在组织培养中，培养的

51、植物组织也会产生乙烯，如果封口用的是不透气的塑料膜，容器内就会逐渐积累乙烯，严重时可引起培养物的死亡。培养瓶内乙烯的积累量因植物种类而不同，小麦的悬浮细胞培养物24H中每克干重可产生乙烯5nmol,水稻的为6nmol，亚麻的可高达900nmol。烟草的愈伤组织产生的乙烯量比胡萝卜的高400倍。 琼脂或其她支持物 除液体悬浮培养外，所有的培养物都应生长在固定或半固定的培养基上以避免培养物沉入液体培养基，因缺氧而死亡。就目前状况而言，琼脂是一种极为抱负的支持物。它是由海藻得来的多糖类物质，但并不是培养基中的必需成分，只是作为一种凝固胶黏剂使培养基变成固体或半固体状态，以支撑培养物，虽然琼脂只是作为

52、一种胶连物，但由于其生产方式和厂家不同而也许具有数量和种类不等的杂质，如Ca、Mg、Fe、硫酸盐等，从而也许影响到培养效果或某些实验的成果。在选择琼脂时，最佳固定厂家，但国内尚没有一种比较稳固的生产厂家提供优质琼脂。虽然市售的琼脂或琼脂条价格便宜，可以使用，但其带来的潜在副作用也许是组培失败或半途夭折的重要因素。建议在经济条件容许的状况下，建议买进口、固定厂家的商品。琼脂的使用浓度取决于培养目的，使用的琼脂性能（胨力张度、灰分、热水中不溶物、粗蛋白等）等因素，一般浓度为0.4%-1%，质量越差的琼脂用量越大。除琼脂外，为了更好的调控培养物的生长，目前发展的趋势是使用一种具有琼脂的混合物作为固体

53、胶连剂，如Sigma公司生产的Agargel就是用琼脂和Phytagl混合在一起的一种新型胶连剂，可以用来控制培养物的玻璃化。 培养基中添加琼脂使培养基呈固体或半固体状态，使培养物可以处在表面，既能吸取必需的养分、水分，又可不致因缺氧而死亡。但固体或半固体状态，一方面限制了培养基中营养成分和水的移动；另一方面也限制了培养的植物组织分泌物，特别是有毒代谢产物的扩散，使有培养物周边的营养成分逐渐匮乏，代谢产物逐渐积累，植物生长受阻或受到毒害。为理解决这个问题，人们实验使用其她支持物来替代琼脂。滤纸桥法即是一种，该法是将一张较厚的滤纸折叠成M型，放入液体培养基中，将培养的植物组织放在M的中间凹陷处，

54、这样培养物可通过滤纸的虹吸作用不断吸取营养和水分，又可保持有足够的氧气。在此基本上，又发展出了一种类似与“看护”培养的措施，即在滤纸桥的中间凹陷处加一种固体培养基，固体培养基中也可混有分散的植物细胞团，将材料放在固体培养基上，再把滤纸放入另一种液体培养基中，用两种不同的培养基同步培养材料，可收到较好的效果。目前也有用玻璃纤维滤器或人工合成的聚酯羊毛替代琼脂的实验中人们或许能受到某些启发，即培养基中添加琼脂的目的重要是为了支持培养物，只要达到这个目的，可选用不同的材料和措施进行替代琼脂的实验。需要考虑的重要问题是，这种材料必须无毒害作用，且不被培养的植物组织所吸取，不与培养液成分发生化学反映。

55、琼脂作为支持物或凝固剂对绝大部分植物都是有利的或者说是无害的，但也有某些报道说琼脂对某些培养物不利。在马铃薯、胡萝卜、烟草、小麦等作物组培中，均发现以淀粉替代琼脂更有助于培养物的生长和分化。但是，目前状况下还没有哪种支持物比琼脂更优越。 其她添加剂 为了特殊的培养目的，在一部分培养基中还添加了某些特殊成分，如水解酪蛋白，水解乳蛋白，甲硫氨酸（蛋氨酸）， L-酪氨酸、L-天冬氨酸、L-天冬酰胺、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-精氨酸等氨基酸，酵母提取物，胰蛋白胨，椰乳，西红柿汁，香蕉粉，橘子汁，可可汁，活性炭，渗入调节剂等。添加少量甲硫氨酸有增进乙烯合成和刺激木质部发生的作用，但添加多种氨基酸后往

56、往有制止生长的作用，这也许是由于多种氨基酸之间的互相竞争而引起的。对天然提取物的应用虽然有不同观点，有的主张使用，有的主张不使用，由于其营养成分和作用无法弄明白，但在用已知化学物质无法达到目的时，合适使用某些天然混合物，的确使某些用常规培养措施没有获得愈伤或不能诱导再生的植物产生了愈伤和分化形成植株。1、活性炭 活性炭为木炭粉碎经加工形成的粉末构造，它构造疏松、孔隙大，吸水力强，有很强的吸附作用，它的颗粒大小决定着吸附能力。粒度越小，吸附能力越大。温度低吸附能力强，温度高吸附能力弱，甚至解吸附。一般使用浓度为0.5-10g/L。它可以吸附非极性物质和色素等大分子物质，涉及琼脂中所含的杂质，培养

57、物分泌的酚、醌类物质以及蔗糖在高压消毒时产生的5-羟甲基糖醛及激素等。 茎尖初代培养，如果适量活性炭，可以吸附外植体产生的致死性褐化物，其效力优于VC和半胱氨酸；在新梢增殖阶段，活性炭可明显增进新梢的形成和伸长，但其作用有一种阀值，一般为0.1%-0.25，不能超过0.2%。 活性炭在生根时有明显的增进作用，其机理一般觉得与活性炭削弱光照有关，也许是由于根顶端产生增进根生长的IAA，但IAA易受可见光的光氧化而破坏，因此活性炭的重要作用就在于通过削弱光照保护了IAA，从而间接增进了根的生长，由于根的生长加快，吸取能力增强，反过来又增进了茎、叶的生长。 此外，在培养基中加入0.3%活性炭，还可减

58、少玻璃苗的产生频率，对避免产生玻璃苗有良好作用。 活性炭在胚胎培养中也有一定作用，如在葡萄胚珠培养时向培养基加入0.1%的活性炭，可减少组织变褐和培养基变色，产生较少的愈伤组织。 但是，活性炭具有副作用，研究表达，每毫克的活性炭能吸附100ng左右的生长调节物质，这阐明只需要很少量的活性炭就可以完全吸附培养基中调节物质。大量的活性炭加入会削弱琼脂的凝固能力，因此要多加某些琼脂。很细的活性炭也易沉淀，一般在琼脂凝固之前，要轻轻摇动培养瓶。总之，那种随意抓一撮活性炭放入培养基，会带来不良的后果。因此，在使用时要有其量的意识，使活性炭发挥其积极作用。 也许是由于活性炭的存在使培养基变黑，产生了类似于

59、土壤的效果，以利于植物的生长。尚有报道指出，活性炭有刺激胚胎发生或组织生长和形态发生的作用。活性炭来源的不同也也许使它所起的作用不同，如木材活性炭比骨质活性炭具有更多的碳，而骨质活性炭中具有的混合物也许对培养物有副作用。2、渗入调节剂 植物细胞对水的吸取受到其所含液泡与培养基之间的相对水势所控制。培养基中影响水分运用的重要成分是琼脂的百分含量，蔗糖的含量和添加的某些用于调节渗入压的非代谢物。渗入调节剂往往是选用某些代谢单薄的糖来充当，如甘露（糖）醇、山梨醇和聚乙二醇等，这些糖基本上不被培养的植物组织所吸取，而只存留在培养基中，起到调节渗入的作用。3、抗生素 培养的植物组织，很容易发生细菌或真菌

60、污染。引起的因素是多方面的，有的是消毒不彻底，有的是无菌操作过程中器皿或操作人员不注意，有的是消毒不彻底，有的是无菌操作过程中器皿或操作人员不注意，有的是培养过程中由于盖培养容器的盖子破损或没扎紧，有的是培养的植物组织内部携带有病原物，表面消毒不解决问题。污染会给组培工作带来很大影响或损失，特别是已经培养一段时间的材料在发生；污染所导致的损失更大。为理解决或避免这个问题，可在配备培养基时添加抗生素，例如加200-300U的庆大霉素可使细菌污染受到较好的控制，浓度超过600U时可在一定限度上克制分化，但这种克制作用可在除去庆大霉素后异端时间内得到恢复。4、抗氧化剂 植物组织在初割时会溢泌某些酚类

61、物质，接触空气中的氧气后，自动氧化或由酶类催化氧化为相应的醌类，产生可见的茶色、褐色以致黑色，这就是酚污染。这些物质渗出细胞外就导致自身中毒，使培养的材料生长停止，失去分化能力可，最后变褐色死亡。在木本，特别是热带木本及少数草本植物中较为严重。目前还没有彻底完善的措施，只能按不同的实际状况，加用某些药物，并合适减少培养温度、及时转移到新鲜培养基上等措施，使之有不同限度的缓和，固然像严格选择外植体部位，加大接种数量等也应一并考虑。 抗酚类氧化常用的药剂有半胱氨酸及VC，可用50-200mg/L的浓度洗涤刚切割的外植体伤口表面，或过滤灭菌后假入固体培养基的表层。其她抗氧化剂有二硫苏糖醇、谷胱甘肽、

62、硫乙醇、及二乙基二硫氨基甲酸酯。5、椰乳 是椰子的液体胚乳。它是使用最多、效果最大的一种天然复合物。一般使用浓度在10%-20%，与其果实成熟度及产地关系也很大。它在愈伤组织和细胞培养中有增进作用。在马铃薯茎尖分生组织很草莓微茎尖培养中起明显的增进作用，但茎尖组织的大小若超过1mm时，椰乳就不发生作用。6、香蕉 用量为150-200ml/L。用黄熟的小香蕉，加入培养基后变为紫色。对PH值的缓冲作用大。重要在兰花的组织培养中应用，对发育有增进作用。7、马铃薯 去掉皮和芽后，加水煮30分钟，再通过过滤，取其滤液使用。用量为150-200g/L。对PH值缓冲作用也大。添加后可得到强健的植株。8、水解酪蛋白 为蛋白质的水解物，重要成分为氨基酸，使用浓度为100-200mg/L。受酸和酶的作用易分解，使用时要注意。9、其她 酵母提取物（YE）（0.01%-0.05%），重要成分为氨基酸和维生素类；麦芽提取物（0.01%-0.5%）、苹果和番茄的果汁、黄瓜的果实、未熟玉米的胚乳等。遇热较稳定，大多在培养困难时使用，有时有效。培养基的配制 配制培养基有两