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1、实验原理实验原理淀淀 粉粉还原糖还原糖(如如:葡萄糖、果糖、麦芽糖葡萄糖、果糖、麦芽糖)蛋白质蛋白质脂脂 肪肪斐林试剂斐林试剂苏丹苏丹染液染液碘碘 液液双缩脲试剂双缩脲试剂橘黄色橘黄色紫色紫色蓝色蓝色试试 剂剂待检有机物待检有机物颜色变化颜色变化+砖红色沉淀砖红色沉淀苏丹苏丹染液染液红色红色一、还原糖的鉴定一、还原糖的鉴定可溶性可溶性还原糖还原糖+斐林试剂斐林试剂砖红色沉淀砖红色沉淀水浴水浴加热加热葡萄糖、果糖、麦芽糖是葡萄糖、果糖、麦芽糖是。蔗糖不是蔗糖不是在水浴加热的条件下，还原糖和斐林试剂反应，在水浴加热的条件下，还原糖和斐林试剂反应，生成砖红色沉淀。生成砖红色沉淀。A:A:实验原理：实
2、验原理：B:实验步驟实验步驟：选材：选材：含糖量高，含糖量高，颜色为白色或近于白色颜色为白色或近于白色。制备样液：苹果块制备样液：苹果块-研磨研磨-过滤过滤 水浴加热水浴加热苹果汁苹果汁注意：斐林试剂注意：斐林试剂不稳定，一般配不稳定，一般配成甲乙液，成甲乙液，现配现配现用现用，用时将甲，用时将甲乙两液乙两液等量混合等量混合后再加入样液中后再加入样液中 斐林试剂：斐林试剂：甲液甲液 0.1 g/ml的的NaOH溶液；溶液；乙液乙液 0.05 g/ml的的CuSO4溶液溶液苹果汁苹果汁斐林试剂斐林试剂颜色变化：浅蓝色颜色变化：浅蓝色-棕色棕色-砖红色砖红色设置对照组1.1.怎样配制斐林试剂？怎样
3、配制斐林试剂？用浓度为用浓度为 0.1g/ml NaOH(0.1g/ml NaOH(甲液甲液)与等量的与等量的0.05g/ml CuSO0.05g/ml CuSO4 4(乙液乙液)混合均匀而成。混合均匀而成。NaOH +CuSO4 Cu(OH)2 蓝色沉淀蓝色沉淀 +Cu(OH)2+还原糖还原糖 Cu 2 O 砖红色沉淀砖红色沉淀 +问题思问题思考考2.2.为什么斐林试剂可检验还原糖的存在？为什么斐林试剂可检验还原糖的存在？斐林试剂的本质是斐林试剂的本质是Cu(OH)Cu(OH)2 2 的悬浊液，还原糖的悬浊液，还原糖把把 Cu(OH)Cu(OH)2 2 还原成还原成Cu Cu 2 2 O O
4、 沉淀。沉淀。3.3.为什么要用新配制的试剂？为什么要用新配制的试剂？因为斐林试剂稳定性较差，要因为斐林试剂稳定性较差，要现用现配，混合使用现用现配，混合使用。二、脂肪的鉴定二、脂肪的鉴定A:实验原理实验原理:脂肪脂肪+苏丹苏丹III染液染液橘黄色橘黄色脂肪脂肪+苏丹苏丹IV染液染液红色红色 B:实验步驟实验步驟 选材选材:花生种子最好花生种子最好,浸泡浸泡.制备样品制备样品:花生去皮花生去皮-切薄片切薄片.鉴定鉴定:花生切片花生切片d 显微镜观察显微镜观察c 制片制片b 50%酒精漂洗酒精漂洗a 苏丹苏丹III染色染色实验现象实验现象:脂肪脂肪+苏丹苏丹III染液染液橘黄色橘黄色脂肪脂肪+苏
5、丹苏丹IV染液染液红色红色显微镜显微镜三三 、蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定A:实验原理：实验原理：蛋白质蛋白质+双缩脲试剂双缩脲试剂 紫色反应紫色反应B:B:实验步驟实验步驟:选择选择:大豆豆浆或鸡蛋蛋白大豆豆浆或鸡蛋蛋白(稀释稀释),),鲜肝提取液鲜肝提取液.制备样液制备样液:大豆大豆-研磨研磨-过滤过滤 鉴定步驟鉴定步驟:豆浆豆浆b b 再加双缩脲试剂再加双缩脲试剂B B液液a a 先加双缩脲试剂先加双缩脲试剂A A液液0.1 g/ml0.1 g/ml的的NaOHNaOH溶液溶液,先为实验制造碱性环境先为实验制造碱性环境.0.01 g/ml的的CuSO4溶液溶液蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生
6、紫色反应蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应 B B液要求量适中，否则液要求量适中，否则多余的多余的B B液液将会将会与与A A液液发生反应生发生反应生成成Cu(OH)Cu(OH)2 2显色而遮盖原有的颜色。显色而遮盖原有的颜色。鉴定前，留出一部分组织样液，以便鉴定前，留出一部分组织样液，以便对比对比用于蛋白质鉴定的用于蛋白质鉴定的蛋清必须稀释蛋清必须稀释，以免实验后粘住试管，以免实验后粘住试管壁，不易洗刷壁，不易洗刷斐林试剂与双缩脲试剂比较斐林试剂与双缩脲试剂比较原理不同：原理不同：斐林试剂的实质是新配制的斐林试剂的实质是新配制的Cu(OH)2溶液；溶液；双缩脲试剂实质是碱性环境中的双缩脲试剂实质是碱性环境中的Cu2+。
糖类脂肪蛋白质的检测课件
