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1、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒(PNP微板法)简介：酸酸性磷酸酶(acid phosphatase , ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细 胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内， 各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.55.5。存在于正常人肺 泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resist nt acid phosphatase, TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液，血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞， 因此可以通过测量血液中的TRAP 了解破骨细胞的功能状态，几乎被认
2、为是是机体破骨活 性的唯一血液指标。TRAP 一种糖基化的含金属蛋白酶，在破骨细胞(osteoclast)和破软骨 细胞(chon droclast )中高表达，在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。Leage ne抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒(Tartrate Resist nt Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是利用 Para-nitrophenyl phosphate(pNPP)为一种常 用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在酸性磷酸酶的作用下生成p-nitrophenol。在 碱性条件下p-nitrophenol呈黄色，产物黄色越深
3、，说明酸性磷酸酶活性越高，反之则酶 活性越低，通过分光光度比色法(酶标仪)测定吸光度，据此通过比色分析就可以计算出酸性 磷酸酶活性水平。在适量的酒石酸存在的情况下进行酸性磷酸酶的活性检测，检测得到的 酸性磷酸酶的活性就是抗酒石酸酸性磷酸酶的活性。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂 解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性。该试剂 盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。组成：名称编号TEO043120TStorage试剂(A): ACP Assay buffer15ml4C试剂(B): pNPP2支-20C避光试剂(C): Tartrate Solution1
4、ml4C试剂(D)： p-nitrophenol(10mM)0.1ml-20C避光使用说明书1份自备料：1、96孔板2、水浴锅或恒温箱3、酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、配制检测工作液： 配制显色工作液：取出pNPP，恢复至室温后溶解于ACP Assay buffer，混匀，冰上 预冷备用。新配制的显色工作液应在6h内用完。 配制标准品工作液：取出p-nitrophenol(10mM)恢复至室温后，取溶解于ACP Assay buffer，使浓度达到。2、准备样品： 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定， 尿液通常也可以直接用于测定，-20弋冻存，用于抗
5、酒石酸酸性磷酸酶的检测。 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要可用PBS或生理盐水进行适当 匀浆，一般细胞数量在106以上，组织应在100mg以上，离心取上清，-20弋冻存，用于 抗酒石酸酸性磷酸酶的检测。 植物样品：取适量的植物组织加入少量生理盐水或PBS，充分捣碎或研磨，静置，用纱 布或滤纸过滤，离心，留取上清液并测量体积，-20弋冻存，用于抗酒石酸酸性磷酸酶的检 测。 高活性样品：如果样品中含有较高活性的抗酒石酸酸性磷酸酶，可以使用ACP Assay buffe、PBS或生理盐水稀释后再行检测。3、加样：按照下表设置96孑L板空白对照、标准品、待测样品，溶液应按照顺序依次加
6、入， 并注意避免产生气泡。标准品的用量分别为4、8 16、24、32、40pl，待测样品直接 加40plo如果样品中的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔。空白对照孔标准品孔待测样品孔ACP Assay buffer40pl(40-x)pl(40-y)pl显色工作液40pl40pl40plTartrate Soluti on5pl5pl5pl待测样品ypl标准品工作液xpl1、轻轻混匀，37C孵育2530min。2、每孔加入Stopping Solution终止反应。3、酶标仪检测吸光值，如果无法检测410nm ,亦可检测400 -4
7、15nm范围内吸光值，一 般应数小时内检测完毕。计算：酸性磷酸酶活性单位的定义：pH4.8 37弋条件下，每分钟水解para-nitrophenyl phosphate显色底物产生1微摩尔p-ni trophe nol所需的酸性磷酸酶的量定义为一个酶活 力单位。根据酶活性定义，计算出样品中的抗酒石酸酸性磷酸酶活性。注意事项：1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。2、建议每次测定时都做标准曲线，以使标准更准确，另外标准品需避免反复冻融。3、如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色杯的最小检测体积，尽量采用小体积的比色杯。4、所测样本的值高于标准曲线的上限
8、，应用ACP Assay buffer稀释样品后重新测定。5、一支显色工作液配制后需当日使用完毕，因此请注意适当多准备一些样品一起检测。6、p-nitrophenol溶液对人体有害，反应终止液有腐蚀性，请小心操作。7、如果希望进行酶活性的绝对定量，进行酶反应时应精确计时，此时推荐采用孵育30min或更长时间，以减小操作过程中的时间误差。8、待测样品中抗酒石酸酸性磷酸酶活性较低时，可适当延长孵育时间至30min。9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。有效期：12个月有效。相关：编号名称CC0007磷酸缓冲盐溶液（10 x PBS，无钙镁）CS0001ACK 红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032Masson三色染色液DF0135多聚甲醛溶液（4% PFA）NR0001DEPC 处理水(0.1%)PS0013RIPA裂解液（强）TE0002碱性磷酸酶（ALP）检测试剂盒（PNP微板法）
抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒(PNP比色法)
