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1、植物组织中可溶性蛋白质含量的测定（福林酚试剂法）一、原理福林（Folin）酚试剂法结合了双缩脲试剂和酚试剂与蛋白质的反应，其中包 括两步反应：第一步是在碱性条件下，与铜试剂作用生成蛋白质铜络合物；第 二步是此络合物将磷钼酸、磷钨酸试剂还原，生成磷钼蓝和磷钨蓝的深蓝色混合 物，颜色深浅与蛋白含量成正相关。在650nm比色测定的灵敏度比双缩脲法高 100倍。由于肽键显色效果增强，从而减少了因蛋白质种类引起的偏差。该法适 于微量蛋白的测定（范围为5100g蛋白质）。二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：各种植物材料（二）仪器设备：1. 722 分光光度计；2. 离心机；3. 恒温水浴；4. 定量加样
2、器；5. 冷凝回流装置一套；6. 研钵；7. 离心管；8. 刻度移液管；9. 微量滴 定管；10. 试管等；（三）试剂： 标准蛋白质溶液：称取 25mg 牛血清蛋白，溶于 100ml 蒸馏水中， 使终浓度为250g/ml ；试剂甲；试剂乙。三、实验步骤（一）标准曲线的绘制1. 取 18X200mm 试管 7 支，1 7 编号，分别加入 0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml标准蛋白质溶液，用蒸馏水补足1ml，使每管含蛋白量分别为0、25、50、 100、 150、 200、 250 g/ ml。2. 用定量加样器给每支试管中加入5ml甲液，混匀，于30C下放置10min。3.
3、再向试管中喷射加入0.5ml乙液，立即振荡混匀，在30C下准确保温30min。4. 以不加标准蛋白的1号管为空白，在650nm下用1cm光径的比色皿测定吸光 度。以标准蛋白浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。（二）样品的测定称取鲜样0.8g，用5ml蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，定容25ml过滤，取滤液 1.0ml于试管中，然后重复标准曲线绘制中的24步骤，以空白管调零，测定 吸光度。根据吸光度查标准曲线，求出样品中的蛋白质含量。四、结果计算：样品中蛋白的含量（mg/g）=CXV / （V XFWX1000）Ts式中：C 查标准曲线值（g） ; VT 提取液总体积（ml） ； FW样品鲜重（g）； Vs 测定时加样量（ml）粗蛋白量（）=蛋白氮含量X6.2
植物组织内可溶性蛋白质的提取和含量测定
