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1、李亚东一、实验原理样品经沉淀蛋白质、 除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重 氮化以后，再与盐酸奈乙二胺偶合形成紫红色染料， 其最大的吸收波长为 538nm ， 因此可以通过测定样品液反应后的吸光度并与标准比较定量。二、实验试剂1、氯化铵缓冲液 :在 1L 玻璃烧杯中，加入 500mL 水，准确加入盐酸，混匀， 准确加入 50mL 氨水，必要时用稀盐酸和稀氨水调试至。2、 硫酸锌溶液(L):称取120g硫酸锌(ZnSO 47H2O )用水溶解并稀释至 lOOOmL。3、氢氧化钠溶液 ( 20mol/L ):称取 20g 氢氧化钠用水溶解， 稀释至 1000mL 。4、对氨基苯磺酸溶液
2、 :称取 lg 对氨基苯磺酸，溶于 7OmL 水和 3OmL 冰乙酸 中，置棕色瓶中混匀，室温保存。5、N- 1-萘基乙二胺溶液:称取01g N-1-萘基乙二胺，加60%乙酸溶液，并稀释至100mL，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。6、显色剂:临用前将N-1-萘基乙二胺溶液和氨基苯磺酸溶液等体积混合。7、亚硝酸钠标准溶液 :准确称取 0.2500g 于硅胶干燥器中干燥 24h 的亚硝酸钠，加水溶解移入 500mL 容量瓶中，加 100mL 氯化铵缓冲液， 加水稀释至刻度，混匀，在4C避光保存。此溶液每毫升相当于500ug的亚硝酸钠，作储备液。8、亚硝酸钠标准使用液 :临用前，吸取
3、亚硝酸钠标准溶液置于 100mL 容量瓶 中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于亚硝酸钠。三、实验仪器分光光度计四、实验步骤1、称取 10g 左右的火腿于研钵中，用量筒量取 70mL 的水，加入一部分于 研钵中，将其研成肉糜状。2、将肉糜状的火腿转移至烧杯中， 用剩下的水冲洗研钵， 一同倒入烧杯中。 加入 12mL 氢氧化钠溶液，用玻璃棒搅拌均匀。3、测量液体的 pH 值，若其大于 8，则将烧杯中所有物质转移至 250mL 容量瓶 中；若小于 8，则再加氢氧化钠直至大于 8 为止。4、加入 10mL 硫酸锌溶液，混匀，容量瓶中出现为乳白色的乳浊液。5、放入60 C的水浴锅中加热10min。6、
4、取出，用流水冷却，加水定容。然后静置 30min。7、 出去容量瓶中的上层脂肪，然后用漏斗过滤，弃去初始的20mL 滤液。 但是要全部过滤完得出滤液的总体积。8、制作标准曲线：吸取 0，亚硝酸钠标准使用液（相当于 0，5，10 15 ，20 ，25ug 亚硝酸盐）分别置于 25mL 容量瓶中分别加入氯化铵缓冲液，加 % 乙酸后，立即加入显色剂，加水至刻度，混匀，在暗处静置 25min ，用 1cm 比色 杯（灵敏度低可换 2cm 比色杯），以零管调节零点，于波长 550nm 处测吸光度， 绘制标准曲线，求出回归方程。9、测定样品吸光值分别吸取 10mL 过滤好的样液于两个容量瓶中， 其他试剂按
5、标准系列法操作。测出样品的两个吸光值五、计算公式 ：nir 工 1000ni| 乂 n I OCX） 式中：X:样品中亚硝酸盐的含量，mg/kg;mr样品质量，g ；m2:测定用样液中亚硝酸盐的质量，ug ；Vi：样品处理液总体积V2:测定用样液体积结果的表述:报告算术平均值的二位有效数。允许差:相对相差W10%六、实验结果及分析标准曲线结果o *1.1.11051015202530*111:亚硝酸盐（ug ）0510152025吸光值0根 据 数 据 制 作 标 准 曲 线 如 下 ：两个样品的吸光值为和。计算得出的亚硝酸盐含量分别为和。(gp-m1m(ug)2v (mL)i：L)X(mg/kg)样品A10样品B10X=(XA+XB)/2= mg/kg 分析：火腿肠中亚硝酸盐的正常含量在 30 mg/kg 之内，所测定的样品中亚硝酸 盐的含量在此范围之内，因此测定用的火腿肠符合质量要求。误差分析： 1、转移时有小部分火腿渣在研钵内 2、去除脂肪时带走一部分溶液。
实验八食品中亚硝酸盐的测定16090211.
