实验室常用培养基

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1、实验用培养基配制 1 牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养） 牛肉膏 3g ，蛋白胨 10g ， NaCl 5g ，水 1000mL ， pH7.4 7.6 2. 高氏 1 号培养基 ( 用于放线菌培养 ) 可溶性淀粉 20g ， KNO 3 1g ， NaCl 0.5g ， K 2 HPO 4- 3H 2 O 0.5g ， MgSO 4 7H 2 O 0.5g, ， FeSO4 7H 2 O 0.01g ，水 1000mL ， pH7.4 7.6 。 配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。 3 马丁氏（ Martin ）培养基（用于从土壤中分离真菌） K 2 HPO 4 1

2、g ， MgSO 4 7H 2 O 0.5g ，蛋白胨 5g ，葡萄糖 10g ， 1/3000 孟加拉红水溶液 100mL, 水 900mL ，自然 pH ， 121 湿热灭菌 30min 。 待培养基融化后冷却 55 60 时加入链霉素 ( 链霉素含量为 30 g/mL). 4. 马铃薯培养基 (PDA)( 用于霉菌或酵母菌培养 ) 马铃薯 ( 去皮 )200g, 蔗糖 ( 或葡萄糖 ) 20g, 水 1000mL 配制方法如下 : 将马铃署去皮 , 切成约 2cm 2 的小块 , 放入 1500mL 的烧杯中煮沸 30min, 注意用玻棒搅拌以防糊底 , 然后用双层纱布过滤 , 取其滤液

3、加糖 , 再补足至 1000mL, 自然 pH. 霉菌用蔗糖 , 酵母菌用葡萄糖 . 5. 察氏培养基 ( 蔗糖硝酸钠培养基 )( 用于霉菌培养 ) 蔗糖 30g, NaNO 3 2g, K 2 HPO 4 1g, MgSO 4 7H 2 O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO4 7H 2 O 0.1g, 水 1000mL, pH7.0 7.2 6. Hayflik 培养基 ( 用于支原体培养 ) 牛心消化液 ( 或浸出液 )1000mL, 蛋白胨 10g, NaCl 5g, 琼脂 15g, pH7.8 8.0, 分装每瓶 70mL, 121 湿热灭菌 15min, 待冷却至 80 左右

4、 , 每 70mL 中加入马血清 20mL,25% 鲜酵母浸出液 10mL, 15 醋酸铊水溶液 2.5mL, 青霉素 G 钾盐水溶液 (20 万单位以上 )0.5mL, 以上混合后倾注平板 . 注意 : 醋酸铊是极毒的药品 , 需特别注意安全操作 . 7 麦氏 (McCLary) 培养基 ( 醋酸钠培养基 ) 葡萄糖 0.1g, KCl 0.18g ，酵母膏 0.25g ，醋酸钠 0.82g, 琼脂 l.5g ，蒸馏水 l00mL 。溶解后分装试管， 1l5 湿热灭菌 15min 。 8 葡萄糖蛋白胨水培养基 ( 用于 V.P 反应和甲基红试验 ) 蛋白胨 0.5g ，葡萄糖 0.5g ，

5、K 2 HPO 4 0.2g ，水 100mL, pH7.2, 1l5 湿热灭菌 20min 。 9 蛋白胨水培养基 ( 用于吲哚试验 ) 蛋白胨 10g, NaCl 5g, 水 1000mL ， pH7.2 7.4, 121 湿热灭菌 20min 。 10 糖发酵培养基 ( 用于细菌糖发酵试验 ) 蛋白胨 0.2g, NaCl 0.5g, K 2 HPO 4 0.02g ，水 100mL ，溴麝香草酚蓝 ( 质量分数 1% 水溶液 ) 0.3mL ，糖类 lg 。分别称取蛋白胨和 NaCl 溶于热水中，调 pH 至 7.4 ，再加入溴麝香草酚蓝 ( 先用少量质量分数 95% 乙醇溶解后，再加

6、水配成质量分数 1% 水溶液 ) ，加入糖类，分装试管，装量 4 5cm 高，并倒放入一杜氏小管 ( 管口向下，管内充满培养液 ) 。 115 湿热灭菌 20min 。灭菌时注意适当延长煮沸时间，尽量把冷空气排尽以使杜氏小管内不残存气泡。常用的糖类，如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖等 ( 后两种糖的用量常加大为质量分数 1.5%) 。 11. RCM 培养基 ( 强化梭菌培养基 ) ( 用于厌氧菌培养 ) 酵母膏 3g ，牛肉膏 l0g ，蛋白胨 10g ，可溶性淀粉 lg ，葡萄糖 5g, 半胱氨酸盐酸盐 0.5g ， NaCl 3g ， NaAc 3g, 水 l000mL, p

7、H8.5 ，刃天青 3mg/L, l2l 湿热灭菌 30min 。 12. TYA 培养基 ( 用于厌氧菌培养 ) 葡萄糖 40g ，牛肉膏 2g ，酵母膏 2g ，胰蛋白胨 (bacto-typetone)6g ，醋酸铵 3g, KH 2 PO 4 0.5g ， MgSO 4 7H 2 O 0.2g ， FeSO 4 7H 2 O 0.01g ，水 1000mL, pH6.5, 121 湿热灭菌 30min 。 13 玉米醪培养基 ( 用于厌氧菌培养 ) 玉米粉 65g ，自来水 1000mL ，混匀，煮 10min 成糊状，自然 pH, 121 湿热灭菌 30min 。 14 中性红培养基

8、 ( 用于厌氧菌培养 ) 葡萄糖 40g ，胰蛋白胨 6g ，酵母膏 2g ，牛肉膏 2g ，醋酸铵 3g ， KH 2 PO 4 5g ，中性红 0.2g, MgSO 4 7H 2 O 0.2g ， FeSO 4 7H 2 O 0.01g, 水 1000ml, pH6.2, 121 湿热灭菌 30min 。 15 CaCO3 明胶麦芽汁培养基 ( 用于厌氧菌培养 ) 麦芽汁 (6 波美 )1000mL ，水 1000mL ， CaCO 3 10g, 明胶 10g ， pH6.8, 121 湿热灭菌 30min 。 16 BCG 牛乳培养基 ( 用于乳酸发酵 ) (A) 溶液：脱脂乳粉 100

9、g ，水 500mL ，加入质量分数 1.6% 溴甲酚绿 (B.C.G) 乙醇溶液 1mL ， 80 灭菌 20min 。 (B) 溶液：酵母膏 10g ，水 500mL ，琼脂 20g , pH6.8, 121 湿热灭菌 20min 。 以无菌操作趁热将 (A) 、 (B) 溶液混合均匀后倒平板。 17 乳酸菌培养基 ( 用于乳酸发酵 ) 牛肉膏 5g ，酵母膏 5g ，蛋白胨 10g ，葡萄糖 10g ，乳糖 5g, NaCl 5g ，水 1000mL, pH6.8, 121 湿热灭菌 20min 。 18 酒精发酵培养基 ( 用于酒精发酵 ) 蔗糖 10g, MgSO 4 7H 2 O

10、0.5g, NH 4 NO 3 0.5g, 质量分数 20% 豆芽汁 2mL, KH 2 PO 4 0.5g ，水 100mL ，自然 pH 。 19. 柯索夫培养基 ( 用于钩端螺旋体培养 ) 优质蛋白胨 0.4g, NaCl 0.7g, KCl 0.02g, Na HCO 3 0.01g ， CaCl 0.02g, KH 2 PO 4 0.09g, NaH 2 PO 4 0.48g, 蒸馏水 500 mL ，无菌兔血清 40mL 。 制法：除兔血清外的其余各成分混合，加热溶解，调 pH 至 7.2, 121 湿热灭菌 20min ，待冷却后，加入无菌兔血清，制成 8% 血清溶液，然后分装试

11、管（ 5 10mL/ 管） , 56 水浴灭活 lh 后备用。 20 豆芽汁培养基 黄豆芽 500g ，加水 1000mL ，煮沸 lh ，过滤后补足水分， 121 湿热灭菌后存放备用，此即质量分数为 50% 的豆芽汁， 用于细菌培养：质量分数 10% 豆芽汁 200mL ，葡萄糖 ( 或蔗糖 )50g ，水 800mL, pH7.2 7.4 。 用于霉菌或酵母菌培养：质量分数 10% 豆芽汁 200mL ，糖 50g ，水 800mL ，自然 pH 。霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。 21 LB(LuriaBertani) 培养基 ( 细菌培养，常在分子生物学中应用 ) 双蒸馏水 950mL ，

12、胰蛋白胨 l0g, NaCl l0g ，酵母提取物 (bacto- yeast extract)5g ，用 lmol/L NaOH ( 约 l mL) 调节 pH 值至 7.0 ，加双蒸馏水至总体积为 1L ， 121 湿热灭菌 30min 。 含氨苄青霉素 LB 培养基 : 待 LB 培养基灭菌后冷至 50 左右加入抗生素，至终浓度为 80 100mg/L 。 22 复红亚硫酸钠培养基 ( 远藤氏培养基 ) ( 用于水体中大肠菌群测定 ) 蛋白胨 10g ，牛肉浸膏 5g ，酵母浸膏 5g ，琼脂 20g ，乳糖 10g, K 2 HPO 4 0.5g ，无水亚硫酸钠 5g, 5% 碱性复红

13、乙醇溶液 20mL ，蒸馏水 1000mL 。 制作过程：先将蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和琼脂加入到 900mL 水中，加热溶解，再加入 K 2 PO 4 ，溶解后补充水至 l000mL ，调 pH 至 7.2 7.4 。随后加入乳糖，混匀溶解后，于 115 湿热灭菌 20min 。再称取亚硫酸钠至一无菌空试管中，用少许无菌水使其溶解，在水浴中煮沸 10min 后，立即滴加于 20mL 质量分数 5% 碱性复红乙醇溶液中，直至深红色转变为淡粉红色为止。将此混合液全部加入到上述已灭菌的并仍保持融化状态的培养基中，混匀后立即倒平板，待凝固后存放冰箱备用，若颜色由淡红变为深红，则不能再用。 23 乳

14、糖蛋白胨半固体培养基 ( 用于水体中大肠菌群测定 ) 蛋白胨 10g ，牛肉浸膏 5g ，酵母膏 5g ，乳糖 10g ，琼脂 5g ，蒸馏水 1000mL ， pH7.2 7.4 ，分装试管 (l0mL/ 管 ), 115 湿热灭菌 20min 。 24 乳糖蛋白胨培养液 ( 用于多管发酵法检测水体中大肠菌群 ) 蛋白胨 10g ，牛肉膏 3g ，乳糖 5g ， NaCl 5g ，蒸馏水 l000mL ，质量分数 1.6% 溴甲酚紫乙醇溶液 lmL 。调 pH 至 7.2 ，分装试管 (l0mL/ 管 ) ，并放入倒置杜氏小管， l15 湿热灭菌 20min 。 25 三倍浓乳糖蛋白胨培养液

15、 ( 用于水体中大肠菌群测定 ) 将乳糖蛋白胨培养液中各营养成分以扩大 3 倍加入到 l000mL 水中，制法同上，分装于放有倒置杜氏小管的试管中，每管 5mL ， 1l5 湿热灭菌 20min 。 26 伊红美蓝培养基 (EMB 培养基 )( 用于水体中大肠菌群测定和细菌转导 ) 蛋白胨 l0g, 乳糖 10g, K 2 HPO 4 2g ，琼脂 25g, 质量分数 2%/ 伊红 Y( 曙红 ) 水溶液 20mL, 质量分数 0.5% 美蓝 ( 亚甲蓝 ) 水溶液 l3mL ， pH7.4 。 制作过程：先将蛋白胨、乳糖、 K 2 HPO 4 和琼脂混匀，加热溶解后，调 pH 至 7.4,

16、1l5 湿热灭菌 20min ，然后加入已分别灭菌的伊红液和美蓝液，充分混匀，防止产生气泡。待培养基冷却到 50 左右倒平皿。如培养基太热会产生过多的凝集水，可在平板凝固后倒置存于冰箱备用。在细菌转导实验中用半乳糖代替乳糖，其余成分不变。 27 加倍肉汤培养基 ( 用于细菌转导 ) 牛肉膏 6g ，蛋白胨 20g, NaCL 10g ，水 1000mL, pH7.4 7.6 。 28 半固体素琼脂 ( 用于细菌转导 ) 琼脂 1g ，水 100mL, 121 湿热灭菌 30min 。 29 豆饼斜面培养基 ( 用于产蛋白酶霉菌菌株筛选 ) 豆饼 100g 加水 5 6 倍，煮出滤汁 100mL

17、 ，汁内加入 KH 2 PO 4 质量分数为 0.1%, MgSO 4 质量分数为 0.05%, (NH 4 ) 2 SO 4 质量分数为 0.05% ，可溶性淀粉质量分数为 2%, pH6 ，琼脂质量分数为 2% 2.5% 。 30 酪素培养基 ( 用于蛋白酶菌株筛选 ) 分别配制 A 液和 B 液。 A 液：称取 Na 2 HPO 4 7H 2 O 1.07g 。干酪素 4g ，加适量蒸馏水，并加热溶解。 B 液：称取 KH 2 PO 4 0.36g ，加水溶解。 A 、 B 液混合后，加入酪素水解液 0.3 mL, 加琼脂 20g ，最后用蒸馏水定容至 1000mL 。 酪素水解液的配制

18、： 1g 酪蛋白溶于碱性缓冲液中，加入质量分数 1% 的枯草芽孢杆菌蛋白酶 25mL 加水至 100mL, 30 水解 lh 。用于配制培养基时，其用量为 1000mL 培养基中加入 100mL 以上水解液。 31 细菌基本培养基 ( 用于筛选营养缺陷型 ) Na 2 HPO 4 7H 2 O 1g ， MgSO 4 7H 2 O 0.2g , 葡萄糖 5g , NaCl 5g , K 2 HPO 4 lg ，水 l000mL, pH7.0, 1l 5 湿热灭菌 30min 。 32. YEPD 培养基 ( 用于酵母原生质体融合 ) 酵母粉 10g, 蛋白胨 20g ，葡萄糖 20g ，蒸馏水

19、 1000mL, pH6.0 ， 115 湿热灭菌 20min 。 33. YEPD 高渗培养基 ( 用于酵母原生质体融合 ) 在 YEPD 培养基中加入 0.6mol/L 的 NaCL ，质量分数 3% 琼脂。 34. YNB 基本培养基 ( 用于酵母原生质体融合 ) 质量分数 0.67% 酵母氮碱基 (YNB, 不含氨基酸， Difco), 质量分数 2% 葡萄糖，质量分数 3% 琼脂， pH6.2 。另一配方为：葡萄糖 10g (NH 4 ) 2 SO 4 1g ， K 2 HPO 4 0.125g ， KHPO 4 0.875g, KI 0.0001g ， MgSO 4 7H 2 O

20、0.5g, CaCl 2 2H 2 O 0.lg, NaCl0.1g ，维量元素母液 lmL, 维生素母液 lmL( 母液均按常规配制 ) ，水 1000mL, pH5.8 6.0 。 35. YNB 高渗基本培养基 ( 用于原生质体融合 ) 在 YNB 基本培养基中加入 0.6mol/LNaCl 。 36 酚红半固体柱状培养基 ( 用于检查氧与菌生长的关系 ) 蛋白胨 1g ，葡萄糖 10g, 玉米浆 10g ，琼脂 7g, 水 1000mL ， pH7.2 。在调好 pH 后，加入质量分数 1.6% 酚红溶液数滴，至培养基变为深红色，分装于大试管中，装量约为试管高度的 1/2 ， 1l5 灭菌 20min 。细菌在此培养基中利用葡萄糖生长产酸，使酚红从红色变成黄色，在不同部位生长的细菌，可使培养基的相应部位颜色改变。但注意培养时间太长，酸可扩散以致不能正确判断结果。 以上各种培养基均可配制成固体或半固体状态，只需改变琼脂用量即可，前者质量分数为 1.5% 2.0% ，后者质量分数为 0.3% 0.8% 。