毕业论文答辩-狭叶荨麻中多糖的提取研究

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1、狭叶荨麻中狭叶荨麻中多糖的提取研究多糖的提取研究姓姓 名：名：指导老师：指导老师：专专 业：食品科学与工程业：食品科学与工程 研究意义研究意义 狭叶荨麻是我国常用民间药，始载于狭叶荨麻是我国常用民间药，始载于图经本草图经本草，药用历史悠久，已被收入，药用历史悠久，已被收入1995年年卫生部药品标准卫生部药品标准（藏药）第（藏药）第一册一册。在东北地区资源丰富，却尚未被开在东北地区资源丰富，却尚未被开发利用，具有广阔的市场前景。发利用，具有广阔的市场前景。目前，我国对狭叶荨麻的基础研究甚少，多为其同属目前，我国对狭叶荨麻的基础研究甚少，多为其同属植物的研究，因此我们选取狭叶荨麻作为研究对象，对狭

2、植物的研究，因此我们选取狭叶荨麻作为研究对象，对狭叶荨麻中多糖进行提取研究，为对其进行深入研究奠定基叶荨麻中多糖进行提取研究，为对其进行深入研究奠定基础。因此，本论文的研究内容具有重要的意义。础。因此，本论文的研究内容具有重要的意义。国内外研究现状国内外研究现状 目前国内外对狭叶荨麻的研究还很少，目前国内外对狭叶荨麻的研究还很少，主主要在于它的提取物的药理作用的研究。国外研要在于它的提取物的药理作用的研究。国外研究表明狭叶荨麻提取物有抗肾上腺素作用，而究表明狭叶荨麻提取物有抗肾上腺素作用，而国内也有报道狭叶荨麻水煎液具有明显的抗凝国内也有报道狭叶荨麻水煎液具有明显的抗凝血作用。现代药理研究也证

3、实，荨麻多糖有显血作用。现代药理研究也证实，荨麻多糖有显著的抗炎、增强免疫作用。因此，对狭叶荨麻著的抗炎、增强免疫作用。因此，对狭叶荨麻的活性成分的活性成分-多糖的深入研究有待进一步开展。多糖的深入研究有待进一步开展。研究内容研究内容v 狭叶荨麻多糖的提取狭叶荨麻多糖的提取v 狭叶荨麻多糖的分离纯化狭叶荨麻多糖的分离纯化v 狭叶荨麻多糖光谱分析狭叶荨麻多糖光谱分析v 狭叶荨麻多糖组分分析狭叶荨麻多糖组分分析1.狭叶荨麻多糖提取纯化工艺流程图狭叶荨麻多糖提取纯化工艺流程图 狭叶荨麻狭叶荨麻干品干品预处理预处理热水浸提热水浸提浓缩浓缩 醇沉醇沉离心离心狭叶荨麻狭叶荨麻粗多糖粗多糖Sevage法法脱

4、蛋白脱蛋白有机溶剂有机溶剂萃取萃取干燥干燥狭叶荨麻狭叶荨麻多糖多糖狭叶荨麻多糖的提取狭叶荨麻多糖的提取 (1)葡萄糖标准曲线葡萄糖标准曲线 如图如图1所示，以葡萄糖浓所示，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标度为横坐标，吸光度为纵坐标得标准曲线。回归方程为：得标准曲线。回归方程为：C=12.188A-0.0005（R=0.9991）通过回归方程以及提取率通过回归方程以及提取率的计算公式计算狭叶荨麻在最的计算公式计算狭叶荨麻在最优试验条件下的多糖提取率为优试验条件下的多糖提取率为6.309%。0.000.010.020.030.040.050.00.10.20.30.40.5A糖浓度/mg/mL

5、图图1 葡萄糖标准曲线葡萄糖标准曲线2.狭叶荨麻多糖含量测定狭叶荨麻多糖含量测定 (2)葡萄糖稳定性实验葡萄糖稳定性实验 如图如图2所示，以时间为所示，以时间为横坐标，吸光度为纵坐标横坐标，吸光度为纵坐标进行绘图。结果表明所用进行绘图。结果表明所用测定方法显色后测定方法显色后5min内稳内稳定，定，10min内吸光度略有下内吸光度略有下降。因此应该在显色后降。因此应该在显色后5min内完成测定。内完成测定。图图2 葡萄糖标品稳定性图葡萄糖标品稳定性图2.狭叶荨麻多糖含量测定狭叶荨麻多糖含量测定v 3.狭叶荨麻多糖提取的影响因素狭叶荨麻多糖提取的影响因素0123456760708090100浸提

6、温度/多糖提取率%(1)浸提温度浸提温度 如图如图3所示，所示，9090C C为最佳为最佳 提取温度提取温度。图图3 浸提温度对多糖提取率的影响浸提温度对多糖提取率的影响(2)浸提时间浸提时间 如图如图4 4所示，所示，1h为最佳提为最佳提 取时间。取时间。012345670.511.522.5浸提时间/h多糖提取率%图图4 浸提时间对多糖提取率的影响浸提时间对多糖提取率的影响012345671:051:101:151:201:25料液比多糖提取率%(3)料液比料液比 如图如图5所示，所示，110为最佳为最佳 料液比。料液比。图图5 料液比对多糖提取率的影响料液比对多糖提取率的影响4.正交试验

7、正交试验 通过单因素试验得出正交试验因素水平表通过单因素试验得出正交试验因素水平表（如表（如表1），），选择选择L L9（34）正交表（表）正交表（表2）进行试验）进行试验。因素因素水平水平 A AB BC C时间时间(min)料液比料液比温度温度()0.51580 111090 1.5115100表表1 因素水平表因素水平表表表2 2 正交试验结果正交试验结果 方案方案 A BC提取率（提取率（%）浸提时间浸提时间(min)料液比料液比温度（温度（）1 10.50.5 1 15 580803.983.98 2 20.5 0.5 1 110 10 90 90 6.14 6.14 3 30.5

8、0.5 1 115 15 100 100 5.785.78 4 41 1 1 1151580805.67 5.67 5 51 1 1 15 5 90 90 6.23 6.23 6 61 1 1 110 10 100 100 6.19 6.19 7 71.5 1.5 1 11 10 0 80 80 5.26 5.26 8 81.51.51 115 15 90 90 5.34 5.34 9 9 1.5 1.5 1 15 5 100 100 4.97 4.97 K K1 10.5510.551 0.604 0.6040.527 0.527 K K2 20.6360.636 0.636 0.6360.

9、701 0.701 K K3 30.592 0.592 0.599 0.5990.569 0.569 R R0.085 0.085 0.037 0.0370.174 0.174 表表3 3 正交试验方差分析表正交试验方差分析表因素因素偏差平方偏差平方和和自由度自由度F F比比F F临界值临界值显著性显著性温度温度0.24022.7204.460*时间时间0.06720.7594.460料液比料液比0.03120.3514.460误差误差0.358 由正交试验结果（表由正交试验结果（表2）和方差分析表）和方差分析表(表表3)可知，可知，最佳提取工艺条件为：最佳提取工艺条件为：料液比料液比1 1

10、1010，温度，温度9090，时间时间1h1h。影响狭叶荨麻多糖提取率各因素的主次关系影响狭叶荨麻多糖提取率各因素的主次关系为：为：浸提温度浸提温度 浸提时间浸提时间 料液比料液比。5.优化方案验证试验优化方案验证试验表表4 优化工艺提取验证结果优化工艺提取验证结果 优选出最佳工艺后，进行验证试验，以确保优选出最佳工艺后，进行验证试验，以确保其重复性和准确性。其重复性和准确性。序号序号123RSD(%)多糖得率多糖得率(%)6.3276.2866.3151.10 由表由表4可知，验证的最佳工艺多糖得率稳定，可知，验证的最佳工艺多糖得率稳定，提取率高，证明优选出的最佳工艺合理可行。提取率高，证明

11、优选出的最佳工艺合理可行。6.醇沉比的选择醇沉比的选择 由图由图6可知，醇沉比可知，醇沉比为为13时狭叶荨麻多时狭叶荨麻多糖的提取率最高，所糖的提取率最高，所以醇沉比以醇沉比13为最佳为最佳条件。条件。图图6 6 醇沉比对多糖提取率的影响醇沉比对多糖提取率的影响 1.Sevage法脱蛋白法脱蛋白 在多糖溶液中按在多糖溶液中按5 51 1与与SevageSevage试剂试剂（氯仿（氯仿正丁醇正丁醇=5=51 1）混合，经充分振摇，混合，经充分振摇，将游离蛋白质沉淀，将游离蛋白质沉淀，经分液除去。经分液除去。其脱蛋其脱蛋白效果如图白效果如图7 7所示。所示。图图7 Sevage法脱蛋白效果图法脱蛋

12、白效果图狭叶荨麻多糖的分离纯化狭叶荨麻多糖的分离纯化2.有机溶剂萃取有机溶剂萃取1)石油醚萃取石油醚萃取05101520253035012345石油醚萃取次数杂质含量(g/mL）在多糖溶液中按在多糖溶液中按3 31 1加入石油醚，经加入石油醚，经充分振摇，将杂质溶充分振摇，将杂质溶于石油醚中于石油醚中，经分液，经分液除去。除去。其杂质除去效其杂质除去效果如图果如图8 8所示。所示。图图8 石油醚除杂质效果图石油醚除杂质效果图2)乙醚萃取乙醚萃取 在多糖溶液中按在多糖溶液中按3 31 1加入乙醚，经充加入乙醚，经充分振摇，将杂质溶于分振摇，将杂质溶于乙醚之中乙醚之中，经分液除，经分液除去。去。其

13、杂质除去效果其杂质除去效果如图如图9 9所示。所示。图图9 乙醚除杂质效果图乙醚除杂质效果图3)乙酸乙酯萃取乙酸乙酯萃取 在多糖溶液中按在多糖溶液中按3 31 1加入乙酸乙酯，加入乙酸乙酯，经充分振摇，将杂质经充分振摇，将杂质溶于乙酸乙酯中溶于乙酸乙酯中，经，经分液除去。分液除去。其杂质除其杂质除去效果如图去效果如图1010所示。所示。图图10 乙酸乙酯除杂质效果图乙酸乙酯除杂质效果图红外光谱分析红外光谱分析 图图11中中3467cm-1处有处有吸收峰，为多糖吸收峰，为多糖-O-H形成形成的分子间或分子内氢键；的分子间或分子内氢键；1430cm-1处为处为CO的伸缩的伸缩振动峰，为多糖的特征吸

14、振动峰，为多糖的特征吸收峰收峰；850cm-1处表明组成处表明组成的单糖有的单糖有-D-吡喃葡萄糖吡喃葡萄糖存在；存在；760cm-1为吡喃糖环为吡喃糖环C-O-C对称振动对称振动峰峰。图图11 红外光谱图红外光谱图狭叶荨麻多糖光谱分析狭叶荨麻多糖光谱分析狭叶荨麻多糖组分分析狭叶荨麻多糖组分分析图图12 气相色谱分析图气相色谱分析图气相色谱分析气相色谱分析 由图由图12及表及表5可知，狭叶荨麻多糖主要由可知，狭叶荨麻多糖主要由3 3种单糖组成：种单糖组成：葡萄糖、木糖、葡萄糖、木糖、甘露甘露糖。并根据面积归一化法，面积之比糖。并根据面积归一化法，面积之比近似等于物质量之比，可推算出各个单糖物质

15、量之比大致近似等于物质量之比，可推算出各个单糖物质量之比大致为：木糖为：木糖 葡萄糖葡萄糖 甘露糖甘露糖=15.24 17.66 66.10。峰号峰号保留时间保留时间组分名称组分名称面积面积归一化比例归一化比例/%/%18.621木糖木糖14257.115.24218.209葡萄葡萄糖糖16561.917.66319.197甘露甘露糖糖62857.566.10表表5 5 狭叶荨麻多糖气相色谱数据表狭叶荨麻多糖气相色谱数据表结论结论 本论文通过对狭叶荨麻多糖提取本论文通过对狭叶荨麻多糖提取、分离、分离纯化的研究和多纯化的研究和多糖组成成分分析，主要得出以下结论：糖组成成分分析，主要得出以下结论：

16、v对狭叶荨麻多糖进行提取条件优化的研究表明：料液比为对狭叶荨麻多糖进行提取条件优化的研究表明：料液比为 1 11010，浸提温度为，浸提温度为9090，浸提时间为，浸提时间为1h1h为最佳提取工艺条为最佳提取工艺条件。最佳醇沉比为件。最佳醇沉比为1 13 3。经优化试验验证，狭叶荨麻多糖在。经优化试验验证，狭叶荨麻多糖在优选工艺条件下提取率为优选工艺条件下提取率为6.36.30909%。v本试验用本试验用SevagSevage e法脱蛋白，有机溶剂萃取对狭叶荨麻粗多糖法脱蛋白，有机溶剂萃取对狭叶荨麻粗多糖进行纯化进行纯化，结果显示效果比较理想。，结果显示效果比较理想。v对狭叶荨麻多糖样品进行红外光谱检测，图谱显示出一般多对狭叶荨麻多糖样品进行红外光谱检测，图谱显示出一般多糖类物质的特征吸收峰。糖类物质的特征吸收峰。v对狭叶荨麻多糖样品进行气相色谱分析，得出狭叶荨麻多糖对狭叶荨麻多糖样品进行气相色谱分析，得出狭叶荨麻多糖主要由主要由3 3种单糖组成：葡萄糖、木糖、种单糖组成：葡萄糖、木糖、甘露甘露糖。糖。