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1、原果胶(PP)检测试剂盒(咔唑比色法)简介：天然果胶类物质以原果胶、果胶(Pecti n)、果胶酸的形态广泛存在于植物的果实、根、 茎、叶中，是细胞壁的一种组成成分，它们伴随纤维素而存在，构成相邻细胞中间层粘结 物，使植物组织细胞紧紧黏结在一起。原果胶是不溶于水的物质，但可在酸、碱、盐等化 学试剂及酶的作用下，加水分解转变成水溶性果胶。果胶Peet in)又称多聚半乳糖醛酸，是 由D-半乳糖醛酸以a-1,4糖苷键连接形成的直链状聚合物，本质上是一种线形的多糖聚合 物，含有数百个脱水半乳糖醛酸残基。原果胶是一种非水溶性的物质，在未成熟的果实或 植物组织中果胶物质大多与纤维素结合以原果胶的形式存在
2、，原果胶能使果实或其他植物 组织坚硬、变脆。Leagene原果胶(PP)检测试剂盒(咔唑比色法)检测原理是果胶物质水解生成半乳糖醛 酸，后者在硫酸溶液中咔唑进行缩合反应形成紫红色的化合物，该化合物呈色强度与半乳 糖醛酸浓度成正比，该化合物颜色在反应内呈色最深，当反应液颜色最深时在波长处测定 吸光度，通过与标准曲线比较，计算出样品中原果胶或可溶性果胶含量。该试剂盒主要用 于定量检测植物组织或果实中原果胶含量，亦可用于定量检测植物组织或果实中可溶性果 胶含量，进而计算出总果胶含量(为原果胶含量与可溶性果胶含量之和)。该25T试剂盒可 以检测25-30左右个样本。该试盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊
3、断或其他用途。组成：编号名称TC212325TStorage试剂(A):果胶标准(1mg/ml)1ml4C避光试剂(B)： SP Lysis buffer2x500mlRT试剂(C)： PP Lysis buffer100mlRT使用说明书1份自备料：1、蒸馏水2、浓硫酸3、实验材料：桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织4、研钵或匀浆器5、试管6、离心机7、水浴锅8、比色杯9、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、可溶性及原果胶提取： 取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品，置于研钵或匀浆器。 加入SP Lysis buffer，充分研磨或匀浆后转入试管中。用SP Lysis
4、buffer冲洗研钵或匀 浆器并转移至试管中，补加SP Lysis buffer。 沸水浴，在煮沸过程中及时补加SP Lysis buffer，取出冷却至室温，离心，弃上清液。 重复该步骤，以去除样品中的糖分以及其他物质。 取含有沉淀的试管，加入蒸馏水，水浴以溶解果胶。取出冷却至室温，离心，将上清液 转移至新试管中。用少量蒸馏水洗涤沉淀，离心，-并将上清液转移至上述新试管中，加 蒸馏水定容，即为可溶性果胶提取液。 取上述可溶性果胶提取液，离心，弃上清液，向离心管中加入PP Lysis buffer,沸水浴， 取出冷却至室温，离心，加蒸馏水定容，即为原果胶提取液。2、稀释果胶标准溶液：取适量的果
5、胶标准(1mg/ml)，按下表进行稀释：加入物(ml)12345果胶标准(1mg/ml)0.010.020.030.040.05蒸馏水0.490.480.470.460.45果胶含量(pg)10203040503、加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免 产生气泡，小心混匀。如果样品中的果胶浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再 进行测定。样品的检测最好能设置平行管，求平均值。加入物(ml)空白管标准管测定管蒸馏水0.5系列果胶标准(1-5号管)0.5原果胶(或可溶性果胶)提取液0.5浓硫酸(沿管壁小心加入)333加盖或塞沸水浴20min，迅速冷却至室温。
6、注意：浓硫酸具有强腐蚀性，应小心操作，沿管壁缓慢加入。4、测定：加入PP Assay buffer，避光静置，当显色最深时以分光光度计，比色杯光径， 以空白调零，测定系列标准管、测定管吸光度。如果测定原果胶含量，以原果胶提取液 作为测定管；如果测定可溶性果胶含量，则以可溶性果胶作为测定管；如果测定总果胶 含量，则同时以原果胶作为测定管和可溶性果胶作为测定管。计算：以1-5号管系列果胶标准(10、20、30、40、50pg)为横坐标，以对应的吸光度为纵 坐标，绘制标准曲线，直接计算直线回归方程。果胶二原果胶+可溶性果胶。组织样品的原果胶(或可溶性果胶)(pg)=mxVT/(WxVs)式中：m二根
7、据标准曲线求得的测定管果胶含量(pg)VT二原果胶(或可溶性果胶)提取液总体积(ml)W二样品鲜重(g)Vs二加样时所用原果胶(或可溶性果胶)提取液的体积(ml)=0.5液体样品的原果胶(或可溶性果胶)(pg/ml)=mxN/V式中：m二根据标准曲线求得的测定管果胶含量(pg)N二稀释倍数V二加样时所用原果胶(或可溶性果胶)提取液的体积(ml)=0.5注意事项：1、浓硫酸具有强腐蚀性，应小心操作，沿管壁缓慢加入。2、取样量、试剂用量应根据果胶含量适当调整。3、可溶性糖对测定结果有较大影响，应彻底去除样品中的可溶性糖。4、PP Assay buffer应密闭避光保存，避免有效成分挥发。5、PP Assay buffer的反应时间根据具体情况而定。6、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应考虑酶标仪的最大检测体积。7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。北京雷根生物技术有限公司www.l eagene .com有效期：6个月有效。
原果胶检测试剂盒
