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1、会计学1层析技术层析技术第一页，共47页。特性的差异，使它们在某种基质中移动速度不同而进行分离和分析的方法。流动相流动相流动相加样展开洗脱第1页/共47页第二页，共47页。第2页/共47页第三页，共47页。第3页/共47页第四页，共47页。按固定(gdng)相基质分类名称操作形式柱层析法固定相装于柱内，使样品沿着一个方向前移而达分离薄层层析法将适当粘度的固定相均匀涂铺在薄板上，点样后用流动相展开，使各组份分离纸层析法用滤纸作液体的载体，点样后用流动相展开，使各组份分离薄膜层析法将适当的高分子有机吸附剂制成薄膜，以类似纸层析方法进行物质的分离第4页/共47页第五页，共47页。按层析原理分类(fn
2、 li)名称分离原理吸附层析法组份在吸附剂表面吸附，固定相是固体吸附剂分配层析法各组份在流动相和静止液相（固相）中的分配系数不同离子交换层析法固定相是离子交换剂，各组份与离子交换剂亲和力不同凝胶层析法固定相是多孔凝胶，各组份的分子大小不同，因而在凝胶上受阻滞的程度不同亲和层析法固定相只能与一种待分离组份专一结合，以此和无亲和力的其它组份分离第5页/共47页第六页，共47页。离子交换(l z jio hun)层析的基本原理离子交换介质(jizh)的基本性质离子交换层析的基本操作离子交换介质的选择原则第6页/共47页第七页，共47页。第7页/共47页第八页，共47页。离子交换原理(yunl)及流程
3、示意图+第8页/共47页第九页，共47页。n基团在水溶液中能与溶液中的基团在水溶液中能与溶液中的其它阳离子或阴离子起交换作其它阳离子或阴离子起交换作用。用。n第9页/共47页第十页，共47页。来，达到分离纯化的目的。来，达到分离纯化的目的。第10页/共47页第十一页，共47页。2.2 离子交换介质(jizh)的分类第11页/共47页第十二页，共47页。第12页/共47页第十三页，共47页。2.3 常用(chn yn)的离子交换剂第13页/共47页第十四页，共47页。第14页/共47页第十五页，共47页。第15页/共47页第十六页，共47页。第16页/共47页第十七页，共47页。第17页/共47
4、页第十八页，共47页。第18页/共47页第十九页，共47页。能膨胀至能膨胀至1.5-2cm3为宜为宜)，交换反，交换反应的速度慢，因此要求树脂的交联应的速度慢，因此要求树脂的交联度一般为度一般为4-14。第19页/共47页第二十页，共47页。的大小取决于网状结构内所含活的大小取决于网状结构内所含活性基团的数目，交换容量可通过性基团的数目，交换容量可通过实验测得。例如强酸性阳离子交实验测得。例如强酸性阳离子交换树脂交换容量的测定手续如下。换树脂交换容量的测定手续如下。第20页/共47页第二十一页，共47页。第21页/共47页第二十二页，共47页。第22页/共47页第二十三页，共47页。第23页/
5、共47页第二十四页，共47页。第24页/共47页第二十五页，共47页。第25页/共47页第二十六页，共47页。等。n阴离子型离子交换纤维素包括二乙基胺基乙基纤维素（DEAE纤维素）。2.3.2 离子交换(l z jio hun)纤维素第26页/共47页第二十七页，共47页。2.3.3 离子交换(l z jio hun)葡聚糖第27页/共47页第二十八页，共47页。第28页/共47页第二十九页，共47页。2.3.3 离子交换(l z jio hun)琼脂糖第29页/共47页第三十页，共47页。第30页/共47页第三十一页，共47页。第31页/共47页第三十二页，共47页。强酸(qin sun)型
6、阳离子交换树脂pH23，使所有氨基酸带正电荷，正电荷大小顺序：碱性(jin xn)AA中性AA酸性AA逐步提高洗脱液pH和离子强度4 离子交换层析的基本操作第32页/共47页第三十三页，共47页。第33页/共47页第三十四页，共47页。第34页/共47页第三十五页，共47页。第35页/共47页第三十六页，共47页。层析柱平衡 *平衡缓冲液的用量至少(zhsho)为柱体积的 2 倍。*平衡缓冲液的流速可略高于正常操作流速。*平衡终点以流出液的离子浓度、导电性、pH值与缓冲液一致为准，其中pH值最重要。第36页/共47页第三十七页，共47页。第37页/共47页第三十八页，共47页。第38页/共47
7、页第三十九页，共47页。样品(yngpn)洗脱恒定(hngdng)洗脱阶段(jidun)洗脱梯度洗脱102030405060708090分子浓度离子强度pH值第39页/共47页第四十页，共47页。第40页/共47页第四十一页，共47页。第41页/共47页第四十二页，共47页。第42页/共47页第四十三页，共47页。离子交换层析技术已广泛(gungfn)于各学科领域。在生物化学及临床生化检验中主要用于分离氨基酸、多肽及蛋白质，也可用于分离核酸、核苷酸及其它带电荷的生物分子。第43页/共47页第四十四页，共47页。第44页/共47页第四十五页，共47页。第45页/共47页第四十六页，共47页。第46页/共47页第四十七页，共47页。
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