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1、实验二十五 邻菲啰啉分光光度法测定铁实验目的（1）进一步了解朗伯-比尔定律的应用。（2）学会邻菲罗啉分光光度法测定铁的方法和正确绘制邻菲罗啉-铁的标准曲线。（3）了解分光光度计的构造及使用。实验原理在pH=1.59.5的条件下，Fe2+与邻菲罗啉生成很稳定的橙红色的络合物，反应式如下:此络合物的logK稳=21.3，s =11000。在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe3+还原为Fe2+：4 Fe3+2NH2OH=4 Fe2+N2O+H2O+4H+测定时，控制溶液酸度在pH=29较适宜，酸度过高，反应速度慢，酸度太低，则Fe2+ 水解，影响显色。Bi3+、Ca2+、Hg2+、Ag+、Zn2+离子与显
2、色剂生成沉淀，Cu2+、Co2+、Ni2+离子则形成有 色络合物，因此当这些离子共存时应注意它们的干扰作用。3 仪器和试剂可见分光光度计，比色管，10mL移液管（有刻度）1 支, 5mL移液管（有刻度）4支， 5mL量筒1个，500mL烧杯1个，洗瓶1个，洗耳球1个，小滤纸，镜头纸。A液（母液0.1gL-1）:准确称取1.4060g分析纯硫酸亚铁铵（NH4）2Fe（SO4）26H2O于 200mL烧杯中，加入50.0mL 1molL-1HCl，完全溶解后，移入250mL容量瓶中，加去离子 水稀释至刻度，摇匀。B液（。.。吨丄-1）:准确移取A液25.00mL，置于250mL的容量瓶中，加去离子
3、水稀释 至刻度，摇匀，备用。乙酸-乙酸钠（HAc-NaAc）缓冲溶液（pH=4.6）:称取135g分析纯乙酸钠，加入120mL 冰乙酸，加水溶解后，稀释至 500mL。10gL-1的盐酸羟胺水溶液，因不稳定，需临用时配制。1gL-1的邻菲罗啉水溶液：先用少许乙醇溶解后，用水稀释，新近配制。实验步骤1. 条件实验（1）吸收曲线的绘制和测量波长的选择用移液管吸取B液5.00mL于25mL比色管中，依次加入5.0mL HAcNaAc缓冲溶 液、2.5mL盐酸羟胺、5.0mL邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。用1cm比色 皿以试剂空白为参比，在450550nm范围内，每隔10nm测量1次吸光度。
4、在峰值附近每 间隔5nm测量1次。以波长为横坐标、吸光度为纵坐标绘制吸收曲线，确定最大吸收波长。（2）显色时间。移取B液5.00mL于25mL比色管中，依次加入5.0mL HAcNaAc缓冲溶液、2.5mL 盐酸羟胺、5.0mL邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。用1cm比色皿以试剂空 白为参比，在选择的波长下测量吸光度。然后依次测量放置5min、lOmin、30min后的吸光 度。以时间t为横坐标、吸光度A为纵坐标，绘制A与t的显色时间影响曲线，得出铁与邻 菲啰啉显色反应完全所需要的适宜时间。2. 标准曲线绘制分别B液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL于6个2
5、5mL比色管中，依次分别加入 5.0mL HAcNaAc缓冲液、2.5mL盐酸羟胺、5.0mL邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释 至刻度，摇匀，放置 10min。按仪器说明书要求，将分光光度计各部分线路接好，光源接10V电压。按仪器使用说明“操作步骤”的要求，在其最大吸收波长（510nm）下，用lcm的比色皿 测得各标准溶液的吸光度，以不含铁的试剂溶液作参比溶液3. 试样中铁的含量测定吸取试液10.00mL于25mL比色管，加入5.0mL HAcNaAc缓冲液、2.5mL盐酸羟 胺、5.0mL邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10min，仍以不含铁的试剂 溶液作参比溶液，于分光光度计上测定吸光度。实验完毕后，用去离子水将比色皿洗干净，用滤纸、镜头纸吸干水分，放回原处。 实验数据记录与结果：分光光度计型号波长标准溶液（。.。吨丄-1）未知液容量瓶编号1234567吸取的体积/mL0.001.002.003.004.005.0010.00吸光度/A总含铁量/mL1）绘制标准曲线2）从标准曲线查出未知液的铁的含量3）计算试样中铁的含量思考题发色前加入盐酸羟胺的目的是什么？如测定一般铁盐的总铁量，是否需要加入盐酸羟胺？本实验中哪些试剂加入量的体积要比较准确？哪些试剂则可以不必？为什么？根据自己的实验数据，计算在最合适波长下邻菲罗啉铁络合物的摩尔吸光系数
分光光度法实验
