常用培养基及抗生素

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1、常用培养基LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1N NaOH （lml）调整pH至7.0,再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1 mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml 的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加 1ml灭过菌的1mol/L

2、氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中, 再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌）。TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨112g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60C，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2P04/0.72 mol/LK2HP04的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高 压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。2XYT培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1N NaOH (1ml)调整pH

3、至7.0,再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中：用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基 添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭 菌前加入20g琼脂粉。常用抗生素氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml)溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。 常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)溶解0.

4、5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮 存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常以3 7.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常以 10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)

5、溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常 以12.5ug/ml25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。链霉素(strepto mycin)(50mg/ml)溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C 贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml)溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。 常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。四环素(tetr acyyline)(10mg/ml)溶解10

6、0mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至1 0ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20C贮存。常以10ug/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。10xTE的配制将 100mM Tris-Hcl (PH=8.0) 6.057g 与 10mM EDTA (PH=8.0) 1.8612g 溶于 400ddH20 中， 调 PH=8.0,定容到 500ml。EDTA(pH8.0) 0.5 M/L组份浓度：0.5 M EDTA配制量：1 L配制方法：称取186.1 g Na2EDTA 2H20，置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充

7、分搅拌。3. 用 NaOH 调节 pH 值至 &0 (约 20 g NaOH)。 注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。4. 加去离子水将溶液定容至1 L。5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。溶液1(质粒提取用)组份浓度：25 mM Tris-HCl(pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose 配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。1M Tris-HCl (PH8.0)25ml0.5M EDTA (PH8.0)20ml20%Glucose (1.11M)45mldH2O910ml2. 高温高压灭菌后，4C保存。3. 使用前

8、每 50 ml 的 Solution I 中加入 2 ml 的 RNase A (20 mg/ml)。溶液II(质粒提取用)组份浓度： 200mM/L NaOH， 1(W/V)SDS配制量：500ml 配制方法：1. 量取下列溶液，置于 500ml 烧杯中10 SDS 50ml2M/L NaOH 50ml2. 加灭菌水定容至500ml，充分混匀3. 室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌溶液III(质粒提取用)组份浓度：3 M/L KOAc, 5 M/L CH3COOH配制量：500 ml配制方法：1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。KOAc14

9、7gCHgOOH57. 5ml2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。4. 高温高压灭菌后，4C保存。电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50XTris-乙酸(TAE)缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱1mol/L乙酸100 mmol/L EDTA242g57.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol/L)200ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0)5XTris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱445 mmol/L硼酸盐10 mmol/L ED

10、TA水54g27.5g硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0) 补足1L染料1%溴酚蓝(bromophenol blue)加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1%二甲苯青 FF （xylene cyanole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml 的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶 解。用铝箔包裹装液管，于4C贮存。凝胶上样液（gel loading solutions）6X碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度

11、配制10ml溶液各成分用量0.3 N氢氧化钠6 mmol/L EDTA 18%聚蔗糖（400型） 0.15%溴甲酚绿 0.25%二甲苯青FF 水300ul 10N氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0)1.8g15mg25mg 补足到10ml6X聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15%聚蔗糖（400型）水1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0)1.5g补足到10ml6X溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存

12、）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25%溴酚蓝2.5ml 1%溴酚蓝0.25%二甲苯青FF2.5ml 1%二甲苯青 FF15%聚蔗糖（400型）1.5g水补足到10ml6X甘油凝胶上样液（4C贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50%甘油水1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0)3ml3.9ml6X蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40%聚蔗糖水1.5ml

13、 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0)4g补足到10ml10X十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2%溴酚蓝0.2%二甲苯青FF200 mmol/L EDTA 0.1%SDS 50%甘油 水20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10% SDS5ml补足到10ml1M Tris-HCl（ pH7.4， 7.6 ，8.0 ） 配制量 1L1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。pH 值浓 HCl7.4 约 70mL7.6 约 60mL8.0 约 42mL4. 将溶解定容至 1L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差很大 温度每升高1c,溶液的pH值大约降低0.03个单位。