石蜡切片具体过程及操作步骤精心整理

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1、石蜡切片具体过程及操作步骤固定:组织块大小:1.5X1.5X0.2CM固定液4倍组织体积福尔马林固定市售为40%甲醛水溶液,应放入小量碳酸钠放置一段时间福尔马林固定液:40%甲醛溶液1份,水9份固定数小时后用水洗24小时优点:克服了乙醇固定的缺点脱水(组织块)70%乙醇片刻80%乙醇2-4小时95%乙醇2-4小时95%乙醇2-4小时100%乙醇2-4小时100%乙醇2-4小时注:为保证100%乙醇无水,可在容器中放入无水硫酸铜吸收水分,变蓝后更换。最好能将100%乙醇中取出来的组织浸入香柏油后再经二甲苯后浸石蜡。透明(组织块)100%乙醇:二甲苯(1:1)15分钟二甲苯15分钟二甲苯15分钟注

2、意:时间太长变脆浸蜡(组织块)石蜡熔点5256C温箱:56C二甲苯:石蜡(1:1)1-2小时石蜡1-2小时石蜡1-2小时包埋将熔化了的石蜡倾入包埋框内,随即迅速将组织块用加温了的镊子送置于框内,平置底面。注意组织切面,放入冷水,冷固后将蜡块修齐,固定于木块上。石蜡切片切片机:调整好。刀:磨刀时一个方向,液体石蜡。切下的片子,右手用弯镊子轻轻钳牢石蜡切片,左手用干燥毛笔将切片取下,放入盛温水(约30C)的玻璃皿内,将切片摊于温水面上,光亮的切面向下,用弯镊子细心张开皱纹。然后将水温加到40C,使切片更平均地展开于水面上,再用弯镊子细心分开各蜡片,将涂过少许蛋白甘油的载玻片沉至切片下面,然后将切片

3、从水面取出。最后将切片置于56C保温箱内烘干,需时2小时。刀的倾角:2030冬天石蜡52-54C,夏天56-58CHE染色法石蜡切片I二甲苯2-5分钟(冬季56C温箱)H二甲苯2-5分钟(冬季56C温箱)100%乙醇1min95%乙醇1min80%乙醇1min70%乙醇1min先用自来水而后用蒸馏水洗0.5minHarris氏苏木紫液5min。苏木紫为盐基性染料可染细胞核。在冬季可预先放入保温箱内,使染剂保持在30C左右,如此染5min即已足够。染色时间与气候和染液的浓度都有密切关系,须灵活掌握。自来水洗2秒钟。用1%酸性酒精(1mLHCl和99mL70%酒精混合液)分化5秒钟。用自来水洗少许

4、时候,而后入饱和碳酸锂水溶液中,使切片变蓝色,共需时约10秒钟。(此步后须用镜检细胞核是否适当,如细胞核过淡,可用自来水和蒸馏水洗一下,再用苏木紫重染,如细胞核过深,可用水洗一下,再在酸酒精中分化一下,其余步骤与上相同。此步骤镜检很重要,不可忽视。)充分流动自来水冲洗2-10min,冲洗时间愈久,分化愈清楚(但不要超过12小时)。而后入80%酒精中1分钟。入0.5%伊红酒精溶液中1-2min(伊红为酸性染色剂,可染细胞浆,100mL溶液中加入1-2滴冰醋酸,冰醋酸为促染剂,使伊红容易着色,经酒精是不易脱色)。经I95%乙醇脱水2min经n95%乙醇脱水2min经I100%乙醇脱水1min经n1

5、00%乙醇脱水1min浸入石炭酸二甲苯混合液(1:3)透明和吸水5min。再经I二甲苯1min洗净石炭酸,并使其更为透明。再经n二甲苯1min,切片自二甲苯中取出,用干纱布揩净切片以外的二甲苯,立刻滴上一小滴加拿大树胶液,并迅速用镊子取洁净盖玻片盖上(勿留气泡)。结果:细胞核呈蓝紫色,细胞浆呈红色。Harris氏苏木紫染色液配制法甲液:苏木紫1g100%乙醇10mL(可稍加热使苏木紫溶解于酒精中)乙液:钾明矾20g蒸馏水200mL(可稍加热使明矾溶解于蒸馏水中)混合甲乙二液,煮沸后,即加氧化汞(HgO)0.5g,热至染液变深紫色,立即将烧瓶放入流动冷水中冷却。次日进行过滤,可暴露于日光中,使其氧化为苏木红,这个过程叫做成熟。使用时加冰醋酸4mL,可增加细胞核染色。

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